抗流感抗体和其组合制造技术

本公开部分地涉及用于预防和治疗流感感染的抗流感抗体(和其抗原结合片段)和其组合。当前所公开的组合提供了令人惊讶的协同效应，并且可以有效预防、抑制或中和流感感染，如甲型流感病毒(IAV)感染、乙型流感病毒(IBV)感染或两者。或两者。或两者。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗流感抗体和其组合
[0001]关于序列表的声明
[0002]与本申请相关的序列表以文本格式提供以代替纸质副本，并且在此通过引用并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称为930585_415WO_SEQUENCE_LISTING.txt。文本文件为174KB，创建于2021年11月16日，并通过EFS
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Web以电子方式提交。

技术介绍

[0003]流感是一种传染病，其每年在世界各地爆发，每年造成约300万至约500万例严重疾病和约290,000至650,000例呼吸系统疾病死亡(WHO,《流感(季节性)情况说明书(Influenza(Seasonal)Fact sheet)》,2018年11月6日)。最常见的症状包括：突然发烧、咳嗽(通常是干咳)、头痛、肌肉和关节痛、严重不适(感觉不舒服)、喉咙痛和流鼻涕。潜伏期在一天至四天之间变化，即使症状通常在暴露于病毒后约2天开始。流感的并发症可能包括肺炎、鼻窦感染和既往健康问题(如哮喘或心力衰竭)恶化、败血症或慢性基础疾病加重。
[0004]流感是由流感病毒引起的，流感病毒是正粘病毒科(family Orthomyxoviridae)的一组含有负义单链分段的RNA基因组的具有抗原性和遗传多样性的病毒。在四种类型的流感病毒(A、B、C和D)中，已知三种类型(A、B和C)会影响人类。可以基于存在的主要表面蛋白的不同亚型对流感病毒进行分类：血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。至少有18种由血凝素(“HA”)蛋白定义的甲型流感亚型。HA可以分为两组。组1含有H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16和H17亚型，并且组2包括H3、H4、H7、H10、H14和H15亚型。虽然所有亚型都存在于鸟类中，但H1、H2和H3亚型大多在人类中引起疾病。H5、H7和H9亚型在人类中引起散发性严重感染，并且可能产生新的大流行。甲型流感病毒不断进化，从而产生新的变体，即被称为抗原漂移的现象。因此，响应于过去的病毒产生的抗体可能对新的漂移病毒保护不充分或没有保护。其结果是，每年都必须生产针对预计出现的H1和H3病毒的新疫苗，这一过程非常昂贵，而且并不总是有效的。这同样适用于生产H5流感疫苗。
[0005]HA是甲型流感病毒的主要表面蛋白，并且是由感染或疫苗接种诱导的中和抗体的主要靶标。不希望受理论的束缚，HA负责将病毒与膜上具有唾液酸的细胞(如上呼吸道中的细胞或红细胞)结合。此外，在pH已经降低之后，HA介导病毒包膜与核内体膜融合。HA是一种同源三聚体整体膜糖蛋白。HA三聚体由三个相同的单体构成，每个单体由完整的HA0单肽链组成，其中HA1和HA2区由2个二硫桥连接。每个HA2区采用α螺旋形卷曲螺旋结构，并且主要形成HA的“茎”或“柄”区，而HA1区是含有α/β结构的混合体的小型球状结构域(HA的“头部”区)。球状HA头部区介导与唾液酸受体的结合，而HA茎介导随后在核内体中以低pH触发的病毒膜与细胞膜之间的融合。虽然免疫显性的HA球状头部结构域具有高可塑性，其中不同的抗原位点经历恒定的抗原漂移，但HA茎区在亚型中相对保守。目前的流感疫苗大多诱导针对免疫显性和可变的HA头部区的免疫应答，所述头部区比HA的茎区进化快(Kirkpatrick E,Qiu X,Wilson PC,Bahl J,Krammer F.流感病毒血凝素头部比柄结构域进化快(The influenza virus hemagglutinin head evolves faster than the stalk domain.)《科学报告(Sci Rep.)》2018年7月11日；8(1):10432)。因此，特定流感疫苗的保护作用通常不
超过几年，并且每年都需要重新开发流感疫苗。
[0006]至少有11种不同的神经氨酸酶亚型(分别为N1至N11(cdc.gov/flu/about/viruses/types.htm))。神经氨酸酶通过催化从受感染的宿主细胞释放前病毒粒子上和靶细胞表面糖蛋白上的唾液酸残基的水解而在病毒移动和播散中发挥作用。已经开发出了旨在抑制神经氨酸酶(NAI)的药物(例如，奥司他韦(oseltamivir)、扎那米韦(zanamivir)、帕拉米韦(peramivir)、拉尼娜米韦(laninamivir))，尽管IAV亚型的自然获得突变降低了对当前NAI的易感性(Hussain等人,《感染和耐药性(Infection and Drug Resistance)》10:121
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134(2017))。
[0007]需要用于治疗或预防流感病毒感染的新型方法。
附图说明
[0008]图1A
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1F示出了抗NA(神经氨酸酶)单克隆抗体与抗HA(血凝素)单克隆抗体的组合对流感病毒的体外中和。使用基于荧光的测定评价抗NA单克隆抗体“FNI3”(VH：SEQ ID NO:72；VL：SEQ ID NO:78)和“FNI9”(VH：SEQ ID NO:132；VL：SEQ ID NO:138)以及抗HA单克隆抗体“FM08”(VH：SEQ ID NO:43；VL：SEQ ID NO:44；还参见Kallewaard等人,《细胞(Cell)》166(3):596
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608(2016)，图1A)和“FHF11”(VH：SEQ ID NO:2；VL：SEQ ID NO:8)的唾液酸酶抑制，所述唾液酸酶抑制测量2'
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(4
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甲基伞型基)
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α
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D
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N
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乙酰神经氨酸(MUNANA)的切割。示出了FM08+FNI3(图1A)、FM08+FNI9(图1B)、FHF11+FNI9(图1C)对H1N1 Cal/09唾液酸酶活性的抑制；以及FM08和FNI3(图1D)、FM08和FNI9(图1E)、FHF11和FNI9(图1F)对H3N2 HK/68唾液酸酶活性的抑制。热图描绘了按μg/ml计的中和(％)(上图；在x轴和y轴上示出了抗体浓度)和协同/拮抗评分(下图，反映抗体组合在所指示浓度下的中和相对于单独抗体的组合效应(例如，FM08+FNI9的效应相对于单独FM08的效应+单独FNI9的效应)增加或减少)。图1A
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1F中的每个图中的上部图表的最左边列和底行中示出了单独抗体的效应。
[0009]图2A
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2C示出了抗NA单克隆抗体与抗HA单克隆抗体的组合对流感病毒的体外中和。通过核蛋白染色评价抗NA单克隆抗体“FNI9”(VH：SEQ ID NO:132；VL：SEQ ID NO:138)、“FNI17”(VH：SEQ ID NO:192；VL：SEQ ID NO:198)和“FNI19”(VH：SEQ ID NO:204；VL：SEQ ID NO:210)以及抗HA单克隆抗体“FM08”(VH：SEQ ID NO:43；VL：SEQ ID NO:44；还参见Kallewaar本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合，所述组合包括：(1)(a)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与甲型流感病毒(IAV)血凝素(HA)结合并且中和由IAV引起的感染，或(b)编码抗HA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸；以及(2)(a)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与来自以下的神经氨酸酶(NA)结合：2(i)IAV，其中所述IAV包括组1 IAV、组2 IAV或两者；以及2(ii)乙型流感病毒(IBV)，并且能够中和由所述IAV和/或所述IBV引起的感染和/或抑制所述IAV和/或所述IBV的唾液酸酶活性，或(b)编码抗NA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。2.一种组合物，所述组合包含：(1)(a)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与甲型流感病毒(IAV)血凝素(HA)结合并且中和由IAV引起的感染，或(b)编码抗HA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸；以及(2)(a)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与来自以下的神经氨酸酶(NA)结合：2(i)IAV，其中所述IAV包括组1 IAV、组2 IAV或两者；以及2(ii)乙型流感病毒(IBV)，并且能够中和由所述IAV和/或所述IBV引起的感染和/或抑制所述IAV和/或所述IBV的唾液酸酶活性，或(b)编码抗NA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，以及任选地药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。3.根据权利要求1所述的组合或根据权利要求2所述的组合物，其在治疗或预防受试者的流感(IAV、IBV或两者)感染的方法中使用，其中所述方法包括分别向所述受试者施用有效量的所述组合物或所述组合。4.根据权利要求1所述的组合或根据权利要求2所述的组合物，其用于制备用于治疗或预防受试者的流感(IAV、IBV或两者)感染的药物。5.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与甲型流感病毒(IAV)血凝素(HA)结合并且中和由IAV引起的感染，或编码抗HA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，所述抗体或其抗原结合片段或所述多核苷酸用于治疗或预防受试者的流感感染的方法中，其中所述方法包括向已经接受、正在接受或将接受以下的受试者施用有效量的所述抗HA抗体或其抗原结合片段：(1)有效量的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与来自以下的神经氨酸酶(NA)结合：(i)IAV，其中所述IAV包括组1 IAV、组2 IAV或两者；以及(ii)乙型流感病毒(IBV)，并且能够中和由所述IAV和/或所述IBV引起的感染和/或抑制所述IAV和/或所述IBV的唾液酸酶活性，或(2)编码抗NA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。6.一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与来自以下的神经氨酸酶(NA)结合：(i)甲型流感病毒(IAV)，其中所述IAV包括组1 IAV、组2 IAV或两者；以及(ii)乙型流感病毒(IBV)，并且能够中和由所述IAV和/或所述IBV引起的感染和/或抑制所述IAV和/或所述IBV的唾液酸酶活性，或编码抗NA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，所述抗体或其抗原结合片段或所述多核苷酸在治疗或预防受试者的流感(IAV、IBV或两者)感染的方法中使用，
其中所述方法包括向已经接受、正在接受或将接受有效量的以下各项的受试者施用有效量的所述抗NA抗体或其抗原结合片段：(a)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与IAV血凝素(HA)结合并且中和由所述IAV引起的感染，或(b)编码抗HA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。7.一种治疗或预防受试者的流感(IAV、IBV或两者)感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的：(1)(a)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与甲型流感病毒(IAV)血凝素(HA)结合并且中和由所述IAV引起的感染，或(b)编码抗HA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸；以及(2)(a)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与来自以下的神经氨酸酶(NA)结合：2(i)IAV，其中所述IAV包括组1 IAV、组2 IAV或两者；以及2(ii)乙型流感病毒(IBV)，并且能够中和由所述IAV和/或所述IBV引起的感染和/或抑制所述IAV和/或所述IBV的唾液酸酶活性，或(b)编码抗NA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。8.一种治疗或预防受试者的流感(IAV、IBV或两者)感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的：(1)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与甲型流感病毒(IAV)血凝素(HA)结合并且中和由所述IAV引起的感染，或(2)编码抗HA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，其中所述受试者已经接受、正在接受或将接受以下：(a)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与来自以下的神经氨酸酶(NA)结合：(i)IAV，其中所述IAV包括组1 IAV、组2 IAV或两者；以及(ii)乙型流感病毒(IBV)，并且能够中和由所述IAV和/或所述IBV引起的感染和/或抑制所述IAV和/或所述IBV的唾液酸酶活性，或(b)编码抗NA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。9.一种治疗或预防受试者的流感感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的：(1)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与来自以下的神经氨酸酶(NA)结合：(i)甲型流感病毒(IAV)，其中所述IAV包括组1 IAV、组2 IAV或两者；以及(ii)乙型流感病毒(IBV)，并且能够中和由所述IAV和/或所述IBV引起的感染和/或抑制所述IAV和/或所述IBV的唾液酸酶活性，或(2)编码抗NA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，其中所述受试者已经接受、正在接受或将接受以下：(a)抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段能够与IAV血凝素(HA)结合并且中和由所述IAV引起的感染，或(b)编码抗HA抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。10.根据权利要求1所述的组合、根据权利要求2所述的组合物、根据权利要求3和4中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5和6中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中：(1)所述抗HA抗体或抗原结合片段包括：(1)(i)VH，所述VH包括与以下任一所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多)同一性的氨基酸序列或由其组成：SEQID NO:43、2、26、28、31、34、37、14、39和41，其中分别参考SEQ ID NO:43、2、26、28、31、34、37、14、39和41的序列变异任选地包括在一个或多个框架区中，和/或序列变异包括一个或多个种系编码的氨基酸的取代；和/或(1)(ii)VL包括与以下任一氨基酸序列具有至少80％(例如，80％、85％、90％、91％、
NO:229和238；(4)(xxiii)分别为SEQ ID NO:144和150；(4)(xxiv)分别为SEQ ID NO:156和162；(4)(xxv)分别为SEQ ID NO:168和174；(4)(xxvi)分别为SEQ ID NO:180和186；(4)(xxvii)分别为SEQ ID NO:192和198；(4)(xxviii)分别为SEQ ID NO:204和210；(4)(xxix)分别为SEQ ID NO:48和54；(4)(xxx)分别为SEQ ID NO:245和247；(4)(xxxi)分别为SEQ ID NO:249和251；(4)(xxxii)分别为SEQ ID NO:258和259；或(4)(xxxi)分别为SEQ ID NO:261和263，其中任选地所述HCDR和所述LCDR根据IMGT编号，其中优选地所述抗HA抗体或抗原结合片段包括VH和VL，所述VH和所述VL分别包括以下所示的VH氨基酸序列和VL氨基酸序列的HCDR和LCDR：分别为SEQ ID NO:43和44，并且所述抗NA抗体或抗原结合片段包括VH和VL，所述VH和所述VL分别包括以下所示的VH氨基酸序列和VL氨基酸序列的HCDR和LCDR：SEQ ID NO:(4)(i)241和243。11.根据权利要求1或10所述的组合、根据权利要求2或10所述的组合物、根据权利要求3、4和10中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至10中任一项所述的方法，其中：(1)所述抗HA抗体或抗原结合片段的所述VH和所述VL包括根据以下的氨基酸序列或由其组成：(1)(i)分别为SEQ ID NO:43和44；(1)(ii)分别为SEQ ID NO:26和8；(1)(iii)分别为SEQ ID NO:2和8；(1)(iv)分别为SEQ ID NO:31和8；(1)(v)分别为SEQ ID NO:34和8；(1)(vi)分别为SEQ ID NO:37和8；(1)(vii)分别为SEQ ID NO:14和20；(1)(viii)分别为SEQ ID NO:39和20；(1)(ix)分别为SEQ ID NO:41和20；或(1)(x)分别为SEQ ID NO:28和8；和/或(2)所述抗NA抗体或抗原结合片段的所述VH和所述VL包括根据以下的氨基酸序列或由其组成：(2)(i)分别为SEQ ID NO:241和243；(2)(ii)分别为SEQID NO:60和66；(2)(iii)分别为SEQ ID NO:72和78或220或223；(2)(vi)分别为SEQ ID NO:72和226；(2)(vii)分别为SEQ ID NO:217和78；(2)(viii)分别为SEQ ID NO:217和220；(2)(ix)分别为SEQ ID NO:217和223；(2)(x)分别为SEQ ID NO:217和226；(2)(xi)分别为SEQ ID NO:84和90；(2)(xii)分别为SEQ ID NO:96和102；(2)(xiii)分别为SEQ ID NO:108和114；(2)(xiv)分别为SEQ ID NO:120和126；(2)(xv)分别为SEQ ID NO:132和138；(2)(xvi)分别为SEQ ID NO:132和232；(2)(xvii)分别为SEQ ID NO:132和235；(2)(xviii)分别为SEQ ID NO:132和238；(2)(xix)分别为SEQ ID NO:229和138；(2)(xx)分别为SEQ ID NO:229和232；(2)(xxi)分别为SEQ ID NO:229和235；(2)(xxii)分别为SEQ ID NO:229和238；(2)(xxiii)分别为SEQ ID NO:144和150；(2)(xxiv)分别为SEQ ID NO:156和162；(2)(xxv)分别为SEQ ID NO:168和174；(2)(xxvi)分别为SEQ ID NO:180和186；(2)(xxvii)分别为SEQ ID NO:192和198；(2)(xxviii)分别为SEQ ID NO:204和210；(2)(xxix)分别为SEQ ID NO:48和54；(2)(xxx)分别为SEQ ID NO:245和247；(2)(xxxi)分别为SEQ ID NO:249和251；(2)(xxxii)分别为SEQ ID NO:258和259；或(2)(xxxiii)分别为SEQ ID NO:261和263，其中优选地所述抗HA抗体或抗原结合片段的所述VH和所述VL包括根据以下的氨基酸序列或由其组成：分别为SEQ ID NO:43和44，所述抗NA抗体或抗原结合片段的所述VH和所述VL包括根据以下的氨基酸序列或由其组成：分别为SEQ ID NO:241和243。12.根据权利要求1、10或11所述的组合、根据权利要求2、10或11所述的组合物、根据权利要求3、4、10和11中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6、10和11中任
一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至11中任一项所述的方法，其中：(1)所述抗HA抗体或抗原结合片段的所述VH和所述VL包括根据以下的氨基酸序列或由其组成：(1)(i)分别为分别为SEQ ID NO:43和44；(1)(ii)分别为SEQ ID NO:26和8；(1)(iii)分别为SEQ ID NO:28和8；(1)(iv)分别为SEQ ID NO:31和8；(1)(v)分别为SEQ ID NO:34和8；(1)(vi)分别为SEQ ID NO:37和8；(1)(vii)分别为SEQ ID NO:14和20；(1)(viii)分别为SEQ ID NO:39和20；(1)(ix)分别为SEQ ID NO:41和20；或(1)(x)分别为SEQ ID NO:2和8；和/或(2)所述抗NA抗体或抗原结合片段的所述VH和所述VL包括根据以下的氨基酸序列或由其组成：(2)(i)分别为分别为SEQ ID NO:241和243；(2)(ii)分别为SEQ ID NO:72和226；(2)(iii)分别为SEQ ID NO:217和78；(2)(iv)分别为SEQ ID NO:217和220；(2)(v)分别为SEQ ID NO:132和138；(2)(vi)分别为SEQ ID NO:132和232；(2)(vii)分别为SEQ ID NO:132和235；(2)(viii)分别为SEQ ID NO:132和238；(2)(ix)分别为SEQ ID NO:229和138；(2)(x)分别为SEQ ID NO:229和232；(2)(xi)分别为SEQ ID NO:229和235；(2)(xii)分别为SEQ ID NO:229和238；(2)(xiii)分别为SEQ ID NO:217和223；(2)(xiv)分别为SEQ ID NO:217和226；(2)(xv)分别为SEQ ID NO:72和78或220或223；(2)(xvi)分别为SEQ ID NO:245和247；或(2)(xvii)分别为SEQ ID NO:249和251，其中优选地所述抗HA抗体或抗原结合片段的所述VH和所述VL包括根据以下的氨基酸序列或由其组成：分别为SEQ ID NO:43和44，所述抗NA抗体或抗原结合片段的所述VH和所述VL包括根据以下的氨基酸序列或由其组成：分别为SEQ ID NO:241和243。13.根据权利要求1和10至12中任一项所述的组合、根据权利要求2或10至12中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4、10、11或12中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6、10、11或12中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至12中任一项所述的方法，其中：(1)所述抗HA抗体或其抗原结合片段包括重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，所述VH包括互补决定区(CDR)H1、CDRH2和CDRH3，所述VL包括CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述CDR任选地根据IMGT编号系统，并且其中：(1)(i)所述CDRH1包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:274、3、32和15，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；和/或(1)(ii)所述CDRH2包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:275、4、29、35、16和42，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；和/或(1)(iii)所述CDRH3包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:276、5和17，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；和/或(1)(iv)所述CDRL1包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:277、9和21，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；和/或(1)(v)所述CDRL2任选地包括如以下任一者所示的氨基酸序列
或由其组成：SEQ ID NO:278、10和22，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；和/或(1)(vi)所述CDRL3包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:279、11和23，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括具有一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；和/或(2)所述抗NA抗体或抗原结合片段包括VH和VL，所述VH包括CDRH1、CDRH2和CDRH3，所述VL包括CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中：(2)(i)任选地所述CDRH1包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:193、49、61、73、85、97、109、121、133、145、157、169、181、205和264，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；(2)(ii)任选地所述CDRH2包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:194、50、62、74、86、98、110、122、134、146、158、170、182、206和265，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；(2)(iii)所述CDRH3包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:195、51、63、75、218、87、99、111、123、135、230、147、159、171、183、207和266，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；(2)(iv)任选地所述CDRL1包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:199、55、67、79、91、103、115、127、139、151、163、175、187、211和267，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；(2)(v)任选地所述CDRL2包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:200、56、68、80、92、104、116、128、140、152、164、176、188、212和268，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代；和/或(2)(vi)任选地所述CDRL3包括如以下任一者所示的氨基酸序列或由其组成：SEQ ID NO:201、57、69、81、221、224、227、93、105、117、129、141、233、239、153、165、177、189、236、213和269，或者其功能变体或由其组成，所述功能变体包括具有一个、两个或三个氨基酸取代，所述取代中的一个或多个取代任选地是保守取代和/或是种系编码的氨基酸的取代。14.根据权利要求1和10至13中任一项所述的组合、根据权利要求2或10至13中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4、10、11、12或13中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6、10、11、12或13中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至13中任一项所述的方法，其中：(1)所述抗HA抗体或抗原结合片段包括以下的CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3氨基酸序列：(1)(i)分别为SEQ ID NO:274
‑
279；(1)(ii)分别为SEQ ID NO:3、29、5和9
‑
11；(1)(iii)分别为SEQ ID NO:32、4、5和9
‑
11；(1)(iv)分别为SEQ ID NO:3、35、5和9
‑
11；(1)(v)分别为SEQ ID NO:32、35、5和9
‑
11；(1)(vi)分别为SEQ ID NO:15
‑
17和21
‑
23；
NO:133、134、184、139、141和239；(2)(xvii)分别为SEQ ID NO:264
‑
266和267
‑
296；或(2)(xviii)分别为SEQ ID NO:73
‑
75和79
‑
81。16.根据权利要求1和10至15中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至15中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至15中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至15中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至15中任一项所述的方法，其中：(i)组1 IAV NA包括N1、N4、N5和/或N8；和/或(ii)组2 IAV NA包括N2、N3、N6、N7和/或N9。17.根据权利要求16所述的组合、根据权利要求16所述的组合物、根据权利要求16所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求16所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求16所述的方法，其中：(i)所述N1是来自以下中的任一种或多种的N1：A/加利福尼亚州/07/2009、A/加利福尼亚州/07/2009I23R/H275Y、A/猪/江苏/J004/2018、A/斯德哥尔摩/18/2007、A/布里斯班/02/2018、A/密歇根州/45/2015、A/密西西比州/3/2001、A/荷兰/603/2009、A/荷兰/602/2009、A/越南/1203/2004、A/G4/SW/山东/1207/2016、A/G4/SW/河南/SN13/2018和A/新泽西州/8/1976；(ii)所述N4来自A/绿头鸭/荷兰/30/2011；(iii)所述N5来自A/水禽/韩国/CN5/2009；(iv)所述N8来自A/斑海豹/新罕布什尔/179629/2011；(v)所述N2是来自以下中的任一种或多种的N2：A/华盛顿/01/2007、A/中国香港/68、A/南澳大利亚/34/2019、A/瑞士/8060/2017、A/新加坡/INFIMH
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16
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0019/2016、A/瑞士/9715293/2013、A/列宁格勒/134/17/57、A/佛罗里达州/4/2006、A/荷兰/823/1992、A/挪威/466/2014、A/瑞士/8060/2017、A/德克萨斯州/50/2012、A/维多利亚/361/2011；A/中国香港/2671/2019、A/SW/墨西哥/SG1444/2011、A/坦桑尼亚/205/2010、A/爱知/2/1968、A/比尔特霍芬/21793/1972、A/荷兰/233/1982、A/上海/11/1987、A/南昌/933/1995、A/福井/45/2004和A/布里斯班/10/2007；(vi)所述N3来自A/加拿大/rv504/2004；(v)所述N6来自A/猪/安大略/01911/1/99；(vi)所述N7来自A/荷兰/078/03；和/或(vii)所述N9是来自以下中的任一种或多种的N9：A/安徽/2013和A/中国香港/56/2015。18.根据权利要求1和10至17中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至17中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至17中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至17中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至17中任一项所述的方法，其中IBV NA是来自以下中的任一种或多种的NA：B/李/10/1940(祖先)；B/布里斯班/60/2008(维多利亚)；B/马来西亚/2506/2004(维多利亚)；B/马来西亚/3120318925/2013(山形县)；B/威斯康星州/1/2010(山形县)；B/山梨县/166/1998(山形县)；B/布里斯班/33/2008；B/科罗拉多州/06/2017；B/湖北
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乌江/158/2009；B/马萨诸塞州/02/2012；B/荷兰/234/2011；B/佩斯/211/2001；B/德克萨斯州/06/2011(山形县)；B/佩斯/211/2011；B/中国香港/05/1972；B/普吉岛/3073/2013；B/哈尔滨/7/1994(维多利亚)；
以及B/华盛顿/02/2019(维多利亚)。19.根据权利要求1和10至18中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至18中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至18中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至18中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至18中任一项所述的方法，其中所述NA是N1、N2和/或N9。20.根据权利要求1和10至19中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至19中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至19中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至19中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至19中任一项所述的方法，其中所述抗NA抗体或抗原结合片段能够与以下结合：(1)(i)包括以下氨基酸(N1 NA编号)中的任一者或多者的NA表位：R368、R293、E228、E344、S247、D198、D151、R118；和/或(ii)包括以下氨基酸(N2 NA编号)中的任一者或多者的NA表位：R371、R292、E227、E344、S247、D198、D151、R118；和/或(2)(i)包括氨基酸R368、R293、E228、D151和R118(N1 NA编号)的NA表位；和/或(ii)包括氨基酸R371、R292、E227、D151和R118(N2 NA编号)的NA表位；和/或(3)包括在NA活性位点中或包括其的表位，其中任选地所述NA活性表位包括以下氨基酸(N2编号)：R118、D151、R152、R224、E276、R292、R371、Y406、E119、R156、W178、S179、D/N198、I222、E227、H274、E277、D293、E425；和/或(4)包括以下的IBV NA表位：(i)以下氨基酸中的任一者或多者：R116、D149、E226、R292和R374；或(ii)氨基酸R116、D149、E226、R292和R374。21.根据权利要求20所述的组合、根据权利要求20所述的组合物、根据权利要求20所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求20所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求20所述的方法，其中所述抗NA抗体或抗原结合片段能够与以下结合：(1)进一步包括以下NA氨基酸(N2编号)中的任一者或多者的表位：E344、E227、S247和D198；和/或(2)包括S245N氨基酸突变和/或E221D氨基酸突变的NA。22.根据权利要求1和10至21中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至21中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至21中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至21中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至21中任一项所述的方法，其中所述抗NA抗体或抗原结合片段能够与包括S245N氨基酸突变和/或E221D氨基酸突变的NA结合。23.根据权利要求1和10至22中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至22中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至22中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至22中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至22中任一项所述的方法，其中：(i)所述组1 IAV NA包括H1N1和/或H5N1；(ii)所述组2 IAV NA包括H3N2和/或H7N9；和/或
(iii)所述IBV NA包括以下中的一种或多种：B/李/10/1940(祖先)；B/中国香港/05/1972；B/中国台湾/2/1962(祖先)；B/布里斯班/33/2008(维多利亚)；B/布里斯班/60/2008(维多利亚)；B/马来西亚/2506/2004(维多利亚)；B/纽约/1056/2003(维多利亚)；B/佛罗里达州/4/2006(山形县)；B/江苏/10/2003(山形县)；B/德克萨斯州/06/2011(山形县)；B/佩斯/211/2011；B/哈尔滨/7/1994(维多利亚)；B/科罗拉多州/06/2017(维多利亚)；B/华盛顿/02/2019(维多利亚)；B/佩斯/211/2001(山形县)；B/湖北
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伍家岗/158/2009(山形县)；B/威斯康星州/01/2010(山形县)；B/马萨诸塞州/02/2012(山形县)；以及B/普吉岛/3073/2013(山形县)。24.根据权利要求1和10至23中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至23中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至23中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至23中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至23中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段能够与以下IAV亚型中的任一种或多种结合：H1、H2、H3、H4、H5、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H17和H18。25.根据权利要求1和10至24中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至24中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至24中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至24中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至24中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段能够通过以下中和感染：(i)H1N1 IAV，其中任选地所述H1N1 IAV包括以下中的任一种或多种：A/加利福尼亚州/07/2009、A/PR/8/34和A/所罗门群岛/3/06；以及(ii)H3N2 IAV，其中任选地所述H3N2 IAV包括以下中的任一种或多种：A/爱知/2/68、A/布里斯班/10/07和A/中国香港/68；(i)组1 IAV，其中任选地所述组1 IAV包括或是H5 IAV，其中进一步任选地所述H5 IAV包括或是H5/VN/11/94pp；以及(ii)组2 IAV，其中任选地所述组2 IAV包括或是H7 IAV，其中进一步任选地所述H7 IAV包括或是H7/IT/99pp，其中任选地感染的中和是使用用所述IAV假型化的病毒确定的。26.根据权利要求1和10至25中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至25中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至25中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至25中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至25中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段能够与以下(i)
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(iv)中的一项或多项结合：(i)H1 HA，所述H1 HA任选地包括以下中的任一种或多种：A/英格兰/195/2009；A/布里斯班/59/2007；A/所罗门群岛/3/2006；A/新喀里多尼亚/20/99；A/德克萨斯州/36/1991；A/中国台湾/01/1986；A/新泽西州/8/1976；A/奥尔巴尼/12/1951；A/蒙茅斯堡/1/1947；A/纽约/1/1918；A/波多黎各/8/34；以及A/加利福尼/07/2009；(ii)H2 HA，所述H2 HA任选地包括A/日本/305/1957；(iii)H5 HA，所述H5 HA任选地包括A/越南/1194/2004；以及(iv)H9 HA，所述H9 HA任选地包括A/中国香港/1073/99。
27.根据权利要求1和10至26中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至26中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至26中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至26中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至26中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段、所述抗NA抗体或抗原结合片段或两者能够激活人FcγRIIIa(任选地F158等位基因)。28.根据权利要求27所述的组合、根据权利要求27所述的组合物、根据权利要求27所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求27所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求27所述的方法，其中激活是在将所述抗体或抗原结合片段与用IAV和/或IBV感染的靶细胞(例如，A549细胞)一起温育(例如，23小时)之后使用包括以下的宿主细胞(任选地Jurkat细胞)确定的：(i)所述人FcγRIIIa(任选地F158等位基因)；以及(ii)NFAT表达控制序列，所述NFAT表达控制序列与编码报告基因，如荧光素酶报告基因的序列可操作地连接。29.根据权利要求27或28所述的组合、根据权利要求27或28所述的组合物、根据权利要求27或28所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求27或28所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求27或28所述的方法，其中激活是在将所述抗体或抗原结合片段与用H1N1和/或H3N2 IAV感染的靶细胞一起温育(任选地持续约23小时)之后确定的，其中任选地所述H1N1 IAV是A/PR8/34，并且进一步任选地感染复数(MOI)为6，和/或其中所述H3N2 IAV是A/爱知/68，并且进一步任选地MOI为18。30.根据权利要求1和10至29中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至29中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至29中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至29中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至29中任一项所述的方法，其中所述IAV和/或所述IBV是抗病毒药抗性的，其中任选地所述抗病毒药是奥司他韦。31.根据权利要求1和10至30中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至30中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至30中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至30中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7中任一项所述的方法，其中所述IAV包括包含以下氨基酸突变的N1 NA：H275Y；E119D+H275Y；S247N+H275Y；I222V；和/或N294S，其中任选地所述IAV包括CA09或A/爱知。32.根据权利要求1和10至31中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至31中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至31中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至32中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至31中任一项所述的方法，其中所述IAV包括包含以下氨基酸突变的N2 NA：E119V、Q136K和/或R292K。33.根据权利要求1和10至32中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至32中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至32中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至32中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至32中任一项所述的方法，其中在施用有效量的所述抗体或抗原结合片段之后，所述抗HA抗体或抗原结合片段、所述抗NA抗体或抗原结合片段或两者能够预防被所述IAV和/或所述IBV感染的受试者的体重减轻，任选地持续(i)至多15天，或(ii)超过15天。
34.根据权利要求1和10至33中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至33中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至33中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至33中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至33中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段、所述抗NA抗体或抗原结合片段或两者能够预防患有IAV感染和/或IBV感染的受试者的体重减轻大于25％、20％、15％、10％或5％，如通过参考恰好在所述IAV感染和/或所述IBV感染之前所述受试者的体重确定的。35.根据权利要求1和10至34中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至34中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至34中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至34中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至34中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段、所述抗NA抗体或抗原结合片段或两者能够延长患有IAV感染和/或IBV感染的受试者的存活期。36.根据权利要求1和10至35中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至35中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至35中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至35中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至35中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段、所述抗NA抗体或抗原结合片段或两者是IgG、IgA、IgM、IgE或IgD同种型。37.根据权利要求1和10至36中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至36中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至36中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至36中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至36中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段、所述抗NA抗体或抗原结合片段或两者是选自以下的IgG同种型：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。38.根据权利要求1和10至37中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至37中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至37中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至37中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至37中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段、所述抗NA抗体或抗原结合片段或两者包括人抗体、单克隆抗体、经纯化的抗体、单链抗体、Fab、Fab'、F(ab')2或Fv。39.根据权利要求1和10至38中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至38中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至38中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至38中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至38中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段、所述抗NA抗体或抗原结合片段或两者是多特异性抗体或抗原结合片段，其中任选地所述多特异性抗体或抗原结合片段包括双特异性抗体或抗原结合片段。40.根据权利要求1和10至39中任一项所述的组合、根据权利要求2和10至39中任一项所述的组合物、根据权利要求3、4和10至39中任一项所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求5、6和10至39中任一项所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根据权利要求7至39中任一项所述的方法，其中所述抗HA抗体或抗原结合片段、所述抗NA抗体或抗原结合片段或两者包括Fc多肽或其片段。
41.根据权利要求40所述的组合、根据权利要求40所述的组合物、根据权利要求40所述的供使用的组合或组合物、根据权利要求40所述的供使用的抗体或抗原结合片段或多核苷酸或根...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：胡默波斯生物医学公司，
类型：发明
国别省市：