快速检测二代测序DNA聚合酶活性的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种快速检测二代测序DNA聚合酶活性的方法和试剂盒，所述检测方法：获得至少一种荧光引物，其在退火之后形成茎环结构，且其5

【技术实现步骤摘要】
快速检测二代测序DNA聚合酶活性的方法和试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，涉及基因测序技术，具体是涉及一种快速检测二代测序DNA聚合酶活性的方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]DNA聚合酶，又称DNA依赖的DNA聚合酶(DNA—dependent DNA polymerase，DNA pol)，它是以亲代DNA为模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一类酶。此酶最早是美国科学家Arthur Komberg于1957年在大肠杆菌中发现的，被称为DNA聚合酶Ⅰ(DNA polymeraseⅠ，简称polⅠ)以后陆续在其他原核生物及真核生物中找到了多种DNA聚合酶。这些DNA聚合酶的共同特征为：
①
具有5
’→3’
聚合酶活性，这就决定了DNA只能沿着5
’→3’
方向合成。
[0003]随着测序技术的不断发展，目前市场上存在一代、二代、三代多种测序技术平台，而其中二代测序平台以其通量高、准确性高、成本相对较低的特点成为市场上商业化最为成功的测序平台。生产二代测序平台的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速检测二代测序DNA聚合酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.获得至少一种荧光引物，所述荧光引物的在退火之后形成茎环结构，茎环结构之外，其5
’
末端突出一个未配对的碱基，所述未配对的碱基选自A、C、G、T种任一种；所述荧光引物的5
’
末端修饰了荧光淬灭基团；S2.将待检测的DNA聚合酶、所述荧光引物、至少一种荧光基团标记碱基底物混合至一起构成检测体系，进行聚合反应，并同时进行荧光检测，所述碱基底物选自dTTP、dCTP、dATP、dGTP，且相应地与所述荧光引物的未配对的碱基能够配对。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述荧光引物的碱基长度为39
‑
51，更优选为41
‑
47。3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述二代测序DNA聚合酶是对带有修饰基团的非天然dNTP具有聚合活性的聚合酶，优选地，包括KOD聚合酶、9N聚合酶及其相应突变体。4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述荧光检测的时间为15
‑
30min。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述方法，其特征在于，所述荧光引物在检测体系中的浓度为1.5μM
‑
2.5μM，更优选为1.8μM
‑
2.2μM，进一步优选为1.9μM
‑
2.1μM。6.根据权利要求1
‑
4任一项所述方法，其特征在于，所述碱基底物在检测体系中的浓度为0.6μM
‑
1.5μM,更优选为0....

【专利技术属性】
技术研发人员：傅德丰，王谷丰，刘二凯，赵陆洋，
申请(专利权)人：深圳赛陆医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：