用于检测诊断标志物的侧流平台制造技术

本发明专利技术在一个方面提供了用于检测多种疾病的诊断标志物或生物标志物的平台和相关方法。在一些实施方式中，该平台可以是一个侧流测试条，具有沉积在一个或多个测试区的水凝胶组合物。组合物。组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测诊断标志物的侧流平台
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年10月14日提交的美国临时申请号63/091,790的优先权和权益，其完整公开内容通过引用纳入本文。
[0003]序列表
[0004]通过EFS
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Web在2021年10月14日创建的名为“012201seq.txt”的具有2,644字节大小的ASCII文本文件通过引用其全部内容纳入本文。


[0005]本公开一般涉及用于检测致病性标志物的方法和组合物。

技术介绍

[0006]2019年鉴定了新型冠状病毒。从那时起，2019冠状病毒病(也称为COVID
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19)已经演变成大流行。根据约翰霍普金斯大学系统科学与工程中心(CSSE)的COVID
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19总结表格，截至2020年10月10日，全世界报道了37,050,406例COVID
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19病例和1,070,393例死亡。仅在美国就有7,706,256例COVID
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19病例(超过全球病例的20％)和214,286例死亡。
[0007]随着大流行逐渐结束，预计SARS
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CoV
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2会反复1，新的检测策略称为：从诊断有症状或暴露于病毒的人转向使用更快更便宜的检测来筛选整个人群2。
[0008]尽管SARS
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CoV
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2感染的病原学诊断实际上是通过检测生物样品(特别是那些从上呼吸道和下呼吸道提取的样品)中的病毒RNA来实现的，但是采用血清学检测识别对病毒的体液反应产生的抗体和疫苗引起的中和抗体的存在。血清学检测可以监测血清流行率和群体免疫力，进行流行病学观察体液免疫的性质和持续时间，补充核酸测试进行诊断。3此外，它还可以用于基于抗体的治疗(即康复血清或单克隆抗体)和疫苗(即选择非免疫个体和随访)。4由于快速且便宜，侧流免疫测定(LFIA)被用于测试抗
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SARS
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CoV
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2抗体。在COVID
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19大流行期间，许多公司已经获得了用于SARS
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CoV
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2测试的LFIA的紧急使用授权。然而，这些LFIA受限于其低特异性和灵敏度。Ye及其同事从临床样品中发现，IgG和IgM的LFIA测试的灵敏度为约89％，特异性为约90％。5此外，来自不同供应商的产品显示出不同的特异性和灵敏度。6[0009]因此，需要改进的侧流试条。
附图说明
[0010]图1说明了示例性的侧流试条，带有水凝胶检测线的图案。
[0011]图2说明了产生聚丙烯酰胺水凝胶网络的示例性光化学过程，其在硝化纤维素膜上的图案化区域中捕捉(trapped)了蛋白质。图3：色谱侧流图显示了锚蛋白分子以不同方式固定在硝化纤维素膜上的测试条的检测限，(分图a)通过常规的物理吸附，(分图b)通过水凝胶，(分图c)通过水凝胶和链霉亲和素，以及(分图d)通过改进的水凝胶和链霉亲和素。
[0012]图4：色谱侧流图，显示了在硝化纤维素膜上固定有Strep
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CBD的测试条的检测限。
[0013]图5说明了产生聚丙烯酰胺水凝胶网络的示例性光化学过程，其中蛋白质固定在水凝胶测试区。
[0014]图6：图像显示了由不同引发剂形成的水凝胶测试区中固定有捕获蛋白分子的测试条的检测限。
[0015]图7：(分图a)固定在侧流试条中的捕获DNA的序列(SEQ ID No.2:TTTTTTTTTTTTTTTTGTAAAACGACGGCCAGT)和固定在金纳米颗粒上的互补报告探针的序列(SEQ ID No.3:TTTTTTTTTTTTTTTACTGGCCGTCGTTTTACA)；(分图b)色谱侧流图显示金纳米颗粒的捕获。
[0016]图8：印在8cm硝化纤维素膜上的丙烯酰胺溶液线的图像。

技术实现思路

[0017]在一方面，本文提供了一种用于检测或鉴定分析物的系统，包括：
[0018]侧流测试条；
[0019]位于侧流测试条上的测试区，包括固定其上的亲和分子，其中所述亲和分子被预选为对感兴趣的分析物具有结合特异性；和
[0020]沉积在测试区的水凝胶组合物，包括嵌入其中的锚部分，其中所述锚部分被预选为与亲和分子结合或反应，从而将亲和分子固定在所述测试区；
[0021]其中所述水凝胶组合物包括约0.01重量％至20重量％，或0.01重量％至10重量％，或约0.1重量％至5重量％，或约0.5重量％至5重量％，或约0.5重量％至2重量％的修饰单体，各修饰单体包含所述锚部分。
[0022]在一些实施方式中，侧流测试条可包括基材、样品垫、探针偶联垫、检测垫、吸附垫，其中所述检测垫包括测试区和对照线。
[0023]在一些实施方式中，在所述侧流测试条上，所述样品垫可位于第一端，然后是所述探针偶联垫和所述吸附垫在第二端。在一些实施方式中，探针偶联垫位于第一端，然后是样品垫和吸附垫在第二端。
[0024]在一些实施方式中，测试区被成形为线、正方形、圆形、卵圆形或其任何组合。
[0025]在一些实施方式中，感兴趣的分析物可以选自核酸、寡核苷酸、蛋白质、肽、抗体、抗原、碳水化合物、表位、代谢物、生物标志物及其任何组合。相应地，可以根据分析物来选择亲和分子。
[0026]在一些实施方式中，所述水凝胶组合物可以由选自聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、多糖、多肽、两种或更多种聚合物的共聚物及其任何组合的聚合物材料制成。
[0027]在一些实施方式中，水凝胶组合物可以是通过用所述修饰的单体、单体、交联剂和光引发剂的混合物进行光照射而形成的，其中所述光引发剂选自二苯甲酮及其衍生物、苯甲酰基苯基
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丙烯酰胺、偶氮引发剂及其任何组合。
[0028]在一些实施方式中，交联剂可以是双丙烯酰胺、乙二醇二丙烯酸酯、二丙烯酸酯的衍生物或其任何组合。
[0029]在一些实施方式中，单体可以选自丙烯酰胺、丙烯酸酯、丙烯酸的水溶性衍生物及其任何组合。
[0030]在一些实施方式中，单体以约2重量％至30重量％，优选3重量％至10重量％的浓度存在于所述混合物中。
[0031]在一些实施方式中，单体与交联剂的比率可以是约200:1至1:0，优选约50:1至10:1。
[0032]在一些实施方式中，光引发剂与混合物的比率可以是约0.01％至10％，优选0.1％至1％。
[0033]在一些实施方式中，锚部分包括蛋白质，如链霉亲和素、受体蛋白和其他能够与目标结合的蛋白质。
[0034]在一些实施方式中，修饰的单体包括具有官能团的丙烯酸酯衍生物，例如丙烯酸酯胺、丙烯酸酯羟胺、丙烯酸酯肼、丙烯酸酯硼酸或其任何组合。
[0035]在一些实施方式中，修饰的单体可包括具有官能团的甲基丙烯酸酯衍生物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于检测或鉴定分析物的系统，其包括：侧流测试条，位于侧流测试条上的测试区，包括固定其上的亲和分子，其中所述亲和分子被预选为对感兴趣的分析物具有结合特异性；和沉积在测试区的水凝胶组合物，包括嵌入其中的锚部分，其中所述锚部分被预选为与亲和分子结合或反应，从而将亲和分子固定在所述测试区；其中所述水凝胶组合物包括约0.01重量％至20重量％，或0.01重量％至10重量％，或约0.1重量％至5重量％，或约0.5重量％至5重量％，或约0.5重量％至2重量％的修饰单体，各修饰单体包含所述锚部分。2.如权利要求1所述的系统，其中所述侧流测试条包括基材、样品垫、探针偶联垫、检测垫和吸附垫，其中所述检测垫包括所述测试区和对照线。3.如权利要求2所述的系统，其中在所述侧流测试条上，所述样品垫位于第一端，然后是所述探针偶联垫和所述吸附垫在第二端。4.如权利要求2所述的系统，其中在所述侧流测试条上，所述探针偶联垫位于第一端，然后是所述样品垫和所述吸附垫在第二端。5.如权利要求1所述的系统，其中所述测试区被成形为线、正方形、圆形、卵圆形或其任何组合。6.如权利要求1所述的系统，其中所述感兴趣的分析物选自核酸、寡核苷酸、蛋白质、肽、抗体、抗原、碳水化合物、表位、代谢物、生物标志物及其任何组合。7.如权利要求1所述的系统，其中所述水凝胶组合物包含聚合物材料，选自聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、多糖、多肽、两种或更多种聚合物的共聚物及其任何组合。8.如权利要求1所述的系统，其中所述水凝胶组合物是通过用所述修饰的单体、单体、交联剂和光引发剂的混合物进行光照射而形成的，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丕明，S，
申请(专利权)人：通用测序技术公司，
类型：发明
国别省市：