【技术实现步骤摘要】
一种基于催化发夹自组装和杂交链式反应的多种miRNA同时检测方法
[0001]本专利技术属于生物检测
,特别涉及一种基于催化发夹自组装和杂交链式反应的多种miRNA同时检测方法。
技术介绍
[0002]microRNA(miRNA)是一类内源性的小RNA,在细胞发育、分化等生命过程中起着重要的调控作用,其异常表达与多种疾病相关,是预防、诊断、治疗癌症及其它疾病的理想生物标志物。因此,开发具有高灵敏度、高特异性、高稳定性的miRNA检测方法或策略对于癌症等重大疾病的诊断具有重要意义。研究者们致力于miRNA研究开发了多种有关miRNA的检测方法,其中常用检测方法是传统的分子生物学技术,如qRT
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PCR、Northern印迹、微阵列等。但是,由于仪器昂贵、操作复杂、miRNA序列长度短、丰度低、序列同源性大等固有特性,使得上述检测方法对miRNA进行定量检测同样具有很大的挑战。因此,开发简单、高效、灵敏的检测方法尤为重要。
[0003]脱氧核酶作为人工核酸酶家族中的一员,可催化一些化学反应。与蛋白质酶相比,脱氧核酶热稳定性高、易合成、识别区域灵活性高,是开发生物传感平台的理想选择。其中由G
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四链体序列和血红素组成的G
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四链体/血红素复合体脱氧核酶,表现出较好的过氧化物酶活性,在H2O2存在时可以催化ABTS、鲁米诺、硫胺等产生颜色变化、化学发光或荧光等现象。因此,基于G
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四链体脱氧核酶的优良特性,可开发比色、化学发光或荧光等检测 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基于催化发夹自组装和杂交链式反应的多种miRNA同时检测方法,其特征在于,所述检测方法包括以下步骤:步骤1,发夹探针检测单元的构建:将不同的发夹探针H1,分别固定在石英阵列检测孔底部,形成若干不同检测单元;步骤2,将含有待测miRNA序列和对应不同发夹探针H2的反应溶液,加入到步骤1所述不同检测单元内,该过程发生于催化发夹自组装,反应后去除多余的待测miRNA序列和发夹探针H2;步骤3,将发夹探针H3和发夹探针H4的混合液分别加入到经步骤2处理后的不同检测单元内,该过程发生杂交链式反应,反应后洗涤;所述发夹探针H3末端标有3/4的G
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四链体序列,发夹探针H4末端标有1/4的G
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四链体序列,发生HCR反应并形成完整的G
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四链体脱氧核酶;步骤4,向步骤3处理后的不同检测单元内加入血红素溶液,反应后再加入鲁米诺和H2O2,立即进行成像检测,根据化学发光强度确定待测miRNA的种类和浓度。2.根据权利要求1所述的基于催化发夹自组装和杂交链式反应的多种miRNA同时检测方法,其特征在于,步骤2中,所述待测miRNA包括四种,分别为miRNA
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21、miRNA
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16、miRNA
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221和miRNA
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155;与其对应的四种发夹探针H1分别为H1
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21、H1
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16、H1
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221和H1
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155,序列分别如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.4所示。3.根据权利要求1所述的基于催化发夹自组装和杂交链式反应的多种miRNA同时检测方法,其特征在于,步骤2中,所述发夹探针H2包括H2
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21、H2
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16、H2
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155和H2
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221,序列分别如SEQ ID NO.5~SEQ ID NO.8所示。4.根据权利要求1所述的基于催化发夹自组装和杂交链式反应的多种miRNA同时检测方法,其特征在于,步骤3中,所述发夹探针H3的序列如SEQ ID NO.9所示。5.根据权利要求1所述的基于催化发夹自组装和杂交链式反应的多种miRNA同时...
【专利技术属性】
技术研发人员:王瑞丽,陈亮,兰蓉,沈荣,李晔,金丽华,马思辰,
申请(专利权)人:北京电子科技职业学院,
类型:发明
国别省市:
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