一株具有抗炎平喘功效的高产量微黄奈瑟氏菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开一株具有抗炎平喘功效的高产量的微黄奈瑟氏菌(Neisseria subflava NICE2022

【技术实现步骤摘要】
一株具有抗炎平喘功效的高产量微黄奈瑟氏菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物领域，具体涉及一株具有抗炎平喘功效的高产量微黄奈瑟氏菌(Neisseria subflava)及其应用。

技术介绍

[0002]微黄奈瑟菌(Neisseria subflava)：变形菌门(Proteobacteria)奈瑟氏菌科(Neisseriaceae)奈瑟氏菌属(Neisseria)。奈瑟氏菌是一种革兰氏阴性球状，常见的奈瑟氏菌家族成员主要有干燥奈瑟氏菌(N.sicca)、徽黄奈瑟氏菌(N.subflava)、粘液奈瑟氏菌(N.mucosa)、脑膜炎奈瑟氏菌(N.meningitidis)、淋病奈瑟菌(N.gonorrhoeae)等。奈瑟氏菌菌体较小，直径为0.6～1.0微米的肾形球菌，无芽胞，无鞭毛，少数有荚膜，需氧或兼性厌氧，发酸能力弱，有氧化酶，不形成吲哚，不还原硝酸盐，寄生于哺乳动物的粘膜上，可氧化多种糖类，产酸不产气。其中脑膜炎奈瑟氏菌及淋病奈瑟氏菌是引起人类疾病的病原菌，其它奈瑟氏菌多为人体呼吸道中寄生的正常菌群。
[0003]上世纪70年代，我国科学家从慢性支气管炎患者的痰液中分离出白色葡萄球菌，奈瑟氏菌及枯草芽孢杆菌，将三者组合后用于支气管炎和哮喘的治疗，发现有很好的疗效，该菌剂已由山东齐鲁制药生产上市，商品名为“白葡奈氏菌片”。其中，奈瑟氏菌细胞壁上含有的脂多糖成分能诱生干扰素直接激活补体C3途径，调动机体的网状内皮系统机能并增强白细胞吞噬能力，从而提高机体非特异性免疫和呼吸道粘膜的特异性免疫功能，增强机体抵抗力，因此可用于支气管炎或哮喘等疾病的治疗。该药物有利于减少抗生素滥用导致的耐药性问题，具有很大的市场前景，然而奈瑟氏菌的发酵生产培养要求高，产量低，严重增加了奈瑟氏菌的生产成本，限制了奈瑟氏菌的工业化发展及其在临床上的进一步应用。
[0004]因此，筛选疗效好且具有高产量能力的奈瑟氏菌尤为重要，不仅有利于解决奈瑟氏菌产业化遇到的瓶颈问题，而且有助于实现奈瑟氏菌生产企业的转型升级，具有极大的社会和经济效益。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一株具有抗炎平喘功效的高产量微黄奈瑟氏菌及其应用。
[0006]申请人从健康人呼吸道咽拭子中进行筛选，采集到一株菌株生长能力强的革兰氏阴性球菌，在同等发酵条件下该菌株的发酵能力强于筛选到的其它革兰氏阴性球菌以及商品化奈瑟氏菌。经鉴定，该菌株为微黄奈瑟氏菌(Neisseria subflava)，申请人将其命名为微黄奈瑟氏菌NICE2022
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623，并于2023年4月24日将其保藏于湖北省武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，并获得保藏编号为CCTCC NO：M 2023605。
[0007]然后，申请人对NICE2022
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623菌株进行了扩大培养和灭活处理，最终得到了产量高达24.6g/L的灭活菌粉，从而大幅降低了企业生产成本，解决了制约该菌产业化的瓶颈问题。
[0008]最后，申请人通过烟熏方法构建气管炎动物模型，考察了NICE2022
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623灭活菌粉
对气管炎的疗效。结果发现该菌具有很好的平喘效果，能够延长模型动物的引喘潜伏期，进一步的研究发现，该菌具有很强的抗炎作用，能显著降低模型动物肺泡中的炎症因子水平和肺组织炎性浸润，因此可用于制备药物并通过发挥抗炎平喘功效治疗气管炎。
[0009]本专利技术进一步提供一种制备所述治疗气管炎药物的方法，包括以下步骤：
[0010]1)将微黄奈瑟氏菌NICE2022
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623菌株的种子液进行发酵培养，得到发酵菌液；
[0011]2)向发酵菌液中加入甲醛进行灭活，离心、洗涤后真空冷冻干燥，制得菌粉。
[0012]其中，所述发酵培养的培养基为：葡萄糖6g/L，酵母粉25g/L，蛋白胨15g/L，氯化钠5g/L，磷酸氢二钠3g/L，硫酸镁0.3g/L，磷酸二氢钾5g/L，硫酸铵2g/L，柠檬酸2g/L，微量元素0.1％，水为余量，pH7.0～7.6。
[0013]其中，所述发酵培养的条件是：培养温度为37
±
1℃，含糖量不低于0.3wt％，发酵时间18～24h。
[0014]其中，所述甲醛的终浓度为0.6wt％。
[0015]利用NICE2022
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623的灭活菌粉可制备适合临床使用的各种制剂，包括但不限于口服制剂、注射剂、外用制剂，动物试验可用于指导临床用药，根据本专利技术的一个具体实施例，优选的药物为口服制剂。
[0016]本专利技术的有益效果是：
[0017](1)发酵能力强，菌粉产量大。本专利技术的菌种是通过菌株发酵能力比较筛选得到，菌粉产量不仅高于筛选到的其它菌株，而且也高于同属的商品化菌株，本专利技术有利于提高微黄奈瑟氏菌的产量，降低生产成本，实现产业化。
[0018](2)药物疗效好，安全性高。本专利技术筛选的菌种具有很强的抗炎平喘功效，能用于气管炎的临床治疗，疗效显著；微黄奈瑟氏菌为人体寄生菌，自身无害，且本专利技术还对其进行了灭活处理，因此也具有很高的安全性。本专利技术为气管炎的临床治疗提供了一种新的药物选择，对满足临床用药具有重要意义。
附图说明
[0019]图1是NICE2022
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623菌株的菌体形态。
[0020]图2是NICE2022
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623菌株的生长曲线。
[0021]图3是NICE2022
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623菌株对豚鼠肺泡灌洗液中炎症因子IL
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6、IL
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8的影响。
[0022]图4是NICE2022
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623菌株对豚鼠肺组织病理切片的影响。
具体实施方式
[0023]下面将结合具体实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地说明，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]实施例1：菌种筛选
[0025](1)样品采集：无菌采集健康人呼吸道咽拭子，华中科技大学在校学生20人(男生10人，女生10人)，受试者张嘴，头向后倾斜。采样人员用压舌板固定舌头，无菌植绒拭子在咽后壁和侧壁上反复擦拭三次，采集咽部分泌物。
[0026](2)纯化：每份样品分别划线接种于哥伦比亚平板，37℃培养24小时，挑取中等大小、边缘整齐、光滑湿润、圆形凸起的菌落，在哥伦比亚平板上连续纯化3次，获得纯化培养物。
[0027](3)分离：取步骤(2)的纯化培养物，均匀涂布在载玻片上制备成涂片，经革兰氏染色后显微镜观察细菌形态，选取单个革兰氏阴性菌，接种至LB培养基中培养12h，然后利用革兰氏染色观察形态，选取菌体形态为双球菌的革兰氏阴性球菌。本试验共得到三株革兰氏阴性球菌，菌体形态如图1所示本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株具有抗炎平喘功效的高产量微黄奈瑟氏菌(Neisseria subflava)NICE2022
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623菌株，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M 2023605。2.权利要求1所述的微黄奈瑟氏菌NICE2022
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623菌株在制备治疗气管炎药物中的用途。3.一种治疗气管炎药物，该药物中的活性成分是权利要求1所述的微黄奈瑟氏菌NICE2022
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623的灭活菌粉。4.如权利要求3所述的治疗气管炎药物，该药物为口服药物。5.一种制备权利要求3或4所述治疗气管炎药物的方法，其特征在于包括以下步骤：1)将微黄奈瑟氏菌NICE2022
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623...

【专利技术属性】
技术研发人员：余龙江，白少良，施川，许攀，雷舒文，张晶晶，贾丰瑜，王游，陈烨，钟杰，金文闻，刘享平，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：