抗原结合分子及其方法II技术

本发明专利技术涉及与MHC I类DLA

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗原结合分子及其方法II


[0001]本专利技术一般性地涉及抗原结合分子。特别地，本公开内容涉及与MHC I类DLA
‑
12抗原特异性结合的抗原结合分子。

技术介绍

[0002]伴侣动物中的癌症是兽医和宠物主人二者的主要关注事项，因为其是47％的狗和32％的猫的主要诊断以及主要死亡原因。伴侣动物中的一些常见癌症类型包括皮肤癌、淋巴瘤、血管肉瘤和乳腺癌。尽管宠物主人愿意支付并寻求治疗，但由于缺乏用于动物应用的靶向肿瘤药物，伴侣动物的癌症治疗仍然具有挑战性。
[0003]淋巴瘤是狗和猫中最常见的癌类型之一，其与肥大细胞肿瘤、血管肉瘤、黑素瘤、骨肉瘤和乳腺癌并列。最常见淋巴瘤类型的未经治疗的平均存活时间为4至6周。目前推荐的淋巴瘤治疗包括CHOP多药化学治疗：环磷酰胺、羟基柔红霉素(hydroxydaunorubicin)(多柔比星)、(长春新碱)，以及泼尼松。然而，对于狗来说尽管可以实现缓解，但是淋巴瘤的治愈并不常见。此外，该疾病的复发通常在治疗后一年内观察到，少于25％的狗存活两年。
[0004]尽管治疗后的总体响应温和，但有时会存在导致致命并发症的副作用。由于化学治疗药物的毒性，因此处理经历治疗的狗的宠物主人必须用化学治疗抗性的手套保护以避免接触它的粪便、尿液、呕吐物、以及唾液。
[0005]因此，通常期望克服或改善一个或更多个上述困难。

技术实现思路

[0006]本文中公开了抗原结合分子，其与MHC I类DLA
‑
12抗原特异性结合。/>[0007]本文中公开了嵌合分子，其包含如本文中限定的抗原结合分子以及异源部分。
[0008]本文中公开了分离的多核苷酸，其包含编码如本文中限定的抗原结合分子或嵌合分子的核酸序列。
[0009]本文中公开了构建体，其包含与一个或更多个控制序列可操作连接的如本文中限定的多核苷酸。
[0010]本文中公开了宿主细胞，其包含如本文中限定的构建体。
[0011]本文中公开了药物组合物，其包含如本文中限定的抗原结合分子或嵌合分子。
[0012]本文中公开了如本文中限定的抗原结合分子、嵌合分子或药物组合物，其用作药物。
[0013]本文中公开了用于降低或抑制癌细胞的增殖和/或生存力的方法，该方法包括使癌细胞与治疗有效量的如本文中限定的抗原结合分子、嵌合分子或药物组合物接触。
[0014]本文中公开了在对象中降低或抑制癌细胞的增殖、存活和/或生存力的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的如本文中限定的抗原结合分子、嵌合分子或药物组合物。
[0015]本文中公开了在对象中治疗癌症的方法，该方法包括向对象施用治疗有效量的如
本文中限定的抗原结合分子、嵌合分子或药物组合物。
[0016]本文中公开了在对象中治疗与不期望的MHC I类DLA
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12抗原表达相关的疾病或病症的方法，其中该方法包括向对象施用治疗有效量的如本文中限定的抗原结合分子、嵌合分子或药物组合物。
[0017]本文中公开了在对象中检测癌症存在可能性的方法，该方法包括确定从对象获得的样品中MHC I类DLA
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12抗原的水平，其中MHC I类DLA
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12抗原水平与参考相比的提高指示在对象中具有癌症存在可能性。
附图说明
[0018]图1.mAb cLy07
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m10C5的同种型是IgG1。
[0019]图2.示出了cLy
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m10C5与多种细胞系(A)CLBL
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1(B)cLy09(C)MDCK(D)cf2TH(E)PBMC结合的流式细胞术数据。与mAb结合的细胞表面标志物在CLBL
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1细胞中高度表达。直方图的阴影峰是阴性对照并且无阴影峰是cLy
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m10C5结合。
[0020]图3.具有cLy
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m10C5的正常犬组织样本的免疫组织化学染色。mAb没有将大多数来源于主要器官的正常狗组织染色。将cLy09细胞的阳性染色用作对照。放大率：10
×
。
[0021]图4.具有cLy
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m10C5的正常犬组织样本的免疫组织化学染色，mAb没有将大多数来源于主要器官的正常狗组织染色。将cLy09细胞的阳性染色用作对照。放大率：2.5
×
。
[0022]图5.具有cLy
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m10C5的犬肥大肿瘤样本的免疫组织化学染色。观察到肥大癌组织的染色。
[0023]图6.抗原靶标的确定。cLy
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m10C5与约42kDa蛋白质结合。(A)用于检测与cLy
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m10C5结合的蛋白质条带的Western印迹，并且该相互作用在10％β
‑
巯基乙醇还原条件下消失，(B)使用mAb cLy
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m10C5的蛋白G捕获的抗原靶标的免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)。在将Western印迹与cLy
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m10C5一起孵育之后在约42kDa处检测到蛋白质条带。将该条带在平行SDS
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PAGE凝胶上重现并切下以用于质谱。
[0024]图7.通过交叉探测的抗原靶标验证。使用来自Abcam的商业抗体兔α
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人HLAA(ab52922)用于验证。商业mAb的免疫原是对应于人HLAA(aa 50至100)的合成肽。将IP样品在SDS
‑
PAGE上一式两份运行并转移至PVDF印迹。框起的条带表示在印迹与(A)cLy
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m10C5(B)兔抗人HLAA一起孵育之后的IP产物。如通过MS数据所示以及通过IP所验证的，cLy
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m10C5与MHC 1类样分子(狗中的DLA
‑
12，人中的HLAA)结合。
[0025]图8.用siRNA瞬时转染的犬肥大细胞的流式细胞术。用(A)cLy
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m10C5和(B)抗MHC 1类(AbD Serotec MCA2189)对用靶向人HLAA的siRNA处理的细胞(虚线)针对细胞表面MHC I类DLA
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12表达进行染色。将用无规(scrambled)siRNA处理的细胞(实线)用作阴性对照。观察到MHC I类(DLA
‑
12)的表面表达在核转染后的过夜孵育之后降低。
[0026]图9.用以确定cLy
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m10C5的表位的结合测定。(A)高碘酸盐测定示出了cLy
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m10C5与对处理敏感的聚糖表位结合并且观察到在去除聚糖之后结合消失。(B)经PNG酶F处理的裂解物指示在N
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聚糖去除之后cLy
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m10C5与蛋白质结合。(C)通过在温和的碱处理(50mM NaOH)中消除β来去除O<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.抗原结合分子，其与MHC I类DLA
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12抗原特异性结合。2.权利要求1所述的抗原结合分子，其中所述MHC I类DLA
‑
12抗原是犬MHC I类DLA
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12抗原。3.权利要求1或2所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：a)重链可变(VH)区，其包含VHCDR1氨基酸序列KASGYTFTDYNMH(SEQ ID NO：1)、VHCDR2氨基酸序列YIYPYNGGTDYNQKFK(SEQ ID NO：2)和VHCDR3氨基酸序列GGLVGAMDY(SEQ ID NO：3)；以及b)轻链可变(VL)区，其包含VLCDR1氨基酸序列RASGNIHNSLA(SEQ ID NO：4)、VLCDR2氨基酸序列NAKTLPD(SEQ ID NO：5)和VLCDR3氨基酸序列QHFWSIPWT(SEQ ID NO：6)。4.权利要求1至3中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合分子包含：a)VH区，其包含与以下具有至少70％序列同一性的氨基酸序列：以及b)VL区，其包含与以下具有至少70％序列同一性的氨基酸序列：5.权利要求1至4中任一项所述的抗原结合分子，其中所述抗原结合片段是抗体或其抗原结合片段。6.权利要求5所述的抗原结合分子，其中所述抗体或其抗原结合分子是犬源化的或嵌合的。7.权利要求5或6所述的抗原结合分子，其中所述抗体或其抗原结合片段是全长抗体、基本完整的抗体、Fab片段、scFab、Fab
’
、单链可变片段(scFv)或单臂抗体。8.权利要求7所述的抗原结合分子，其中所述抗体或其抗原结合片段是全长抗体并且包含犬恒定区。9.嵌合分子，其包含根据前述权利要求中任一项所述的抗原结合分子以及异源部分。10.权利要求9所述的嵌合分子，其中所述异源部分是可检测部分、半衰期延长部分或治疗部分。11.权利要求10所述的嵌合分子，其中所述治疗部分是毒素。12.权利要求11所述的嵌合分子，其中所述毒素是奥瑞他汀、皂草毒蛋白、美登素(DM1)。13.权利要求12所述的嵌合分子，其中所述奥瑞他汀是单甲基奥瑞他汀E(MMAE)。14.分离的多核苷酸，其包含编码根据权利要求1至8中任一项所述的抗原结合分子或
权利要求9至13中任一项所述的嵌合分子的核酸序列。...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈翠萍，徐文华，冯慧佳，陈美仪，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：