用于检测莫能菌素的侧向流测定制造技术

提供了用于使用竞争性侧向流测定检测动物饲料中莫能菌素的存在的方法。该方法允许莫能菌素的定性检测，以及以非常高的灵敏度水平的定量检测，例如饲料样品中10ppm或更少的检测。还提供了用于该方法中的竞争性侧向流测定条装置。条装置。条装置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测莫能菌素的侧向流测定
[0001]优先权要求
[0002]本申请要求于2020年12月11日提交的美国临时申请号63/124,551的优先权，其全部公开通过引用并入本文。
[0003]专利技术背景
[0004]莫能菌素(Monensin)是与冠醚有关的聚醚类抗生素离子载体，优先与诸如Li
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、Na
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、K
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、Rb
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、Ag
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和Tl
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的单价阳离子形成络合物。莫能菌素能够在电中性(即非去极化)交换中将这些阳离子转运穿过细胞的脂质膜，作为Na
+
/H
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逆向转运体发挥重要作用。最近的研究已经显示，莫能菌素可以以产生电和电中性两种方式转运钠离子通过细胞膜。这种方法不仅解释母体莫能菌素而且解释其不具备羧基的衍生物的离子载体能力以及因此地抗菌特性。其阻断细胞内蛋白转运，并且展现出抗生素、抗疟疾和其他生物活性。莫能菌素及其衍生物的抗菌特性是它们转运金属阳离子通过细胞和亚细胞膜的能力的结果。
[0005]莫能菌素广泛地用于动物健康行业，以加药品于牛和家禽的饲料。然而，由于它的离子载体活性，其防止生长中的动物内有害的细菌和原生动物的活动，它也可以对哺乳动物膜具有有害影响。莫能菌素中毒在动物健康加药饲料中得到良好记录，并且要非常小心地以确保莫能菌素含量对于使用加药饲料的动物来说不会太高(参见例如，Chalmers(1981)Can.Vet.J.22:21
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22；Potter et al.(1984)J.Anim.Sci.58:1499
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1511；Gonzalez et al.(2005)Can.Vet.J.46:910
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912)。根据动物的物种、年龄和生产利用(production utilization)，莫能菌素的浓度通常在几克/短吨至最多几百克/短吨饲料的范围内利用。例如，奶牛需要与肉牛不同剂量的莫能菌素。类似地，用于雏鸡的起始配给量与用于生长中的肉鸡或蛋鸡的起始配给量非常不同。因此，工业上用于生产加药饲料的饲料厂需要测量饲料中莫能菌素的精确量。此外，当出于不同的生产目的使动物远离莫能菌素时，饲料厂必须注意确保其研磨设备不含莫能菌素，以确保饲料中的莫能菌素不会对动物或动物产品诸如牛奶或鸡蛋的安全产生有害影响。
[0006]目前用于测量饲料中莫能菌素的一种方法是高效液相色谱法(HPLC)，其可能成本高、耗时，并且中断饲养程序的安排和劳动力/设备的使用。因此，需要一种快速、可靠、有成本效益且劳动高效的方法来测定饲料中莫能菌素的存在。
[0007]专利技术概述
[0008]本公开提供了用于检测例如动物饲料中的莫能菌素的竞争性侧向流测定(LFA)的方法和装置。本公开的方法和装置提供了用于检测莫能菌素的快速、有成本效益和劳动高效的方法，同时还允许非常灵敏的检测，例如，动物饲料中低至10ppm(或甚至更低)的莫能菌素的检测下限。此外，该方法和装置允许莫能菌素的定量测量以及定性检测，从而允许动物饲料使用者在使用用于调节饲料中莫能菌素水平的LFA方法和装置时具有非常精确的控制。
[0009]因此，在一方面，本公开涉及用于检测液体样品中的莫能菌素的竞争性侧向流测定(LFA)条装置，该装置包含：
[0010]样品垫；
[0011]缀合物垫，其加载有与可检测标记物缀合的抗莫能菌素特异性抗体(M抗体)和与可检测标记物缀合的对照抗体(C抗体)；和
[0012]膜表面，其包含测试线和对照线，该测试线具有与M抗体结合的固定化莫能菌素，该对照线具有与C抗体结合的固定化抗原，
[0013]其中应用于样品垫的液体样品首先流过缀合物垫，然后流穿膜表面的测试线和对照线；
[0014]其中M抗体与测试线的结合导致可检测的信号，并且C抗体与对照线的结合导致可检测的信号；
[0015]其中相对于缺乏莫能菌素的样品，液体样品中莫能菌素的存在降低测试线处的可检测信号；和
[0016]其中LFA条装置对于检测液体样品中的莫能菌素具有10ppm或更小的灵敏度。
[0017]在一个实施方案中，LFA条装置具有检测6
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10ppm、或6.6
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10ppm、或7
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10ppm、或8
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10ppm或9
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10ppm的莫能菌素的灵敏度下限。在某些实施方案中，LFA条装置具有检测10ppm、9ppm、8ppm、7ppm、6.6ppm、6ppm、5ppm、4ppm、3ppm或2ppm的莫能菌素的灵敏度下限。
[0018]在一个实施方案中，样品垫是聚酯纤维垫。在一个实施方案中，缀合物垫是短切玻璃垫(chopped glass pad)。在一个实施方案中，膜表面包含硝化纤维素膜。本文进一步描述了用于LFA条装置的这些组件的合适材料。
[0019]在一个实施方案中，M莫能菌素特异性抗体缀合至金纳米颗粒。
[0020]在一个实施方案中，测试线处的固定化莫能菌素是BSA
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莫能菌素，其可通过莫能菌素特异性M抗体检测。
[0021]在一个实施方案中，C抗体是缀合至金纳米颗粒的抗鸡IgY抗体或抗小鼠IgG，并且对照线处的固定化抗原是鸡IgY或小鼠IgG。
[0022]在一个实施方案中，缀合物垫加载有浓度为25
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50ug/mL的M抗体。在一个实施方案中，缀合物垫加载有浓度为30
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40ug/mL的M抗体。在一个实施方案中，缀合物垫加载有浓度为30ug/mL的M抗体。
[0023]在一个实施方案中，缀合物垫加载有90
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95％的M抗体和5
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10％的C抗体。在一个实施方案中，缀合物垫加载有90％的M抗体和10％的C抗体。在一个实施方案中，缀合物垫加载有95％的M抗体和5％的C抗体。
[0024]在另一方面，本公开涉及使用本公开的LFA装置检测例如动物饲料中的莫能菌素的方法。因此，本公开提供了检测动物饲料中莫能菌素的存在的方法，该方法包括：
[0025](a)将动物饲料的样品与液体提取缓冲液接触(例如，温育、混合或悬浮)以获得液体样品；
[0026](b)将液体样品(例如，预定的量)应用于本公开的LFA条装置的样品垫；
[0027](c)将LFA条装置显影至少3分钟(即，允许应用于样品垫的液体样品流过缀合物垫并流到膜表面上，流穿LFA条装置的测试和对照线)；和
[0028](d)目视读取或定量测量LFA条装置，从而检测动物饲料中莫能菌素的存在。
[0029]在一个实施方案中，将LFA条带装置显影至少5分钟。
[0030]在一个实施方案中，液体提取缓冲液包含有机溶剂，诸如醇。在一个实施方案中，液体提取缓冲液中的醇是乙醇。在一个实施方案中，液体提取缓冲液包含具有0.5％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于检测液体样品中的莫能菌素的竞争性侧向流测定(LFA)条装置，所述装置包含：样品垫；缀合物垫，其加载有与可检测标记物缀合的抗莫能菌素特异性抗体(M抗体)和与可检测标记物缀合的对照抗体(C抗体)；和膜表面，其包含测试线和对照线，所述测试线具有与所述M抗体结合的固定化莫能菌素，所述对照线具有与所述C抗体结合的固定化抗原，其中应用于所述样品垫的液体样品首先流过所述缀合物垫，然后流穿所述膜表面的所述测试线和所述对照线；其中所述M抗体与所述测试线的结合导致可检测的信号，并且所述C抗体与所述对照线的结合导致可检测的信号；其中相对于缺乏莫能菌素的样品，所述液体样品中莫能菌素的存在降低所述测试线处的所述可检测信号；和其中所述LFA条装置对于检测所述液体样品中的莫能菌素具有10ppm或更小的灵敏度。2.权利要求1所述的LFA条装置，其对于检测所述液体样品中莫能菌素具有2ppm的灵敏度。3.权利要求1所述的LFA条装置，其对于检测所述液体样品中莫能菌素具有6
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10ppm的灵敏度。4.权利要求1所述的LFA条装置，其中所述样品垫是聚酯纤维垫。5.权利要求1所述的LFA条装置，其中所述缀合物垫是短切玻璃垫。6.权利要求1所述的LFA条装置，其中所述膜表面包含硝化纤维素膜。7.权利要求1所述的LFA条装置，其中所述M抗体缀合至金纳米颗粒。8.权利要求1所述的LFA条装置，其中所述测试线处的所述固定化莫能菌素是BSA
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莫能菌素。9.权利要求1所述的LFA条装置...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：浩卫制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：