一种提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法，胚状体单个分离，转入胚状体萌发培养基成苗；将发育健壮的无根苗或寄生胚状体苗剪下，转入生根萌芽培养基诱导生根后，形成完整的植株再移栽炼苗；将生根萌芽培养基上生根且发育出1个及以上枝条的胚状体苗，直接进行移栽炼苗；生长健壮的丛生苗，顺着分枝向根部撕开，分成数个植株，有根的苗直接栽植，无根的枝条则按照组培苗炼苗方法，进行移栽和保湿保温管理，待成活后再移至田间；移栽田间成活的多分枝苗，分枝条进行自交留种，或者是分枝条进行扦插/嫁接保存。本发明专利技术方法极大地提高了利用花药培养技术创制茄子新种质的效率。率。率。

【技术实现步骤摘要】
一种提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法


[0001]本专利技术属于植物组织培养领域，具体涉及一种提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法。

技术介绍

[0002]茄子(Solarium melongena L)，原产亚洲热带，我国各省均有栽培。草本或亚灌木状，果可供蔬食，根、茎、叶、种子皆可入药。70年代初,Riana等成功地通过茄子花药培养经愈伤组织途径成苗，目前不论是茄子花药还是花粉(小孢子)培养，都已有许多成功的报道，但在国内利用花药或花粉培养获得的纯合亲本，选育出茄子新品种的报道却并不多。究其原因，主要是茄子花药或花粉培养主要是通过愈伤组织再分化途径成苗，形成具有完整的根和茎的苗频率很低；而通过胚状体发生和萌发途径产生再生植株的频率，理论上比愈伤组织再分化途径要高得多，但其实现的前提是诱导茄子花药产生胚状体的频率较高且稳定、胚状体多，目前多数研究者做不到这一点，因此未见系统的促进胚状体萌发成苗的方法以及最终成株率的报道。
[0003]本课题组自2014年通过胚状体发生途径从茄子花药诱导出纯合的二倍体等植株后，不断优化茄子花药培养条件，2019年建立了茄子花药培养的培养程序，通过小孢子胚状体发生途径再生出单倍体、二倍体和多倍体植株，胚状体发生频率达到平均每花蕾0.4
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0.6个
[1]，稍高于刘独臣报道的0.3
‑
0.35
[2]。此后课题组对培养程序、培养基配方和移栽过程中的炼苗技术等所有技术环节不断进行改进，目前已经建立了稳定可重复的、花药出胚率30％以上、每个花药再生出1至数十个胚状体的茄子花药培养技术体系，为进一步研究胚状体萌发成苗提供了试验材料。
[0004][1]刘独臣,房超,李建跃,等.茄子花药培养诱导胚状体成苗[J].西南农业学报,2008,21(6):1643
‑
1646
[0005][2]王畅,崔群香*,朱海佳,等.培养程序及培养基成分对茄子优选植株花药培养的影响[J].蔬菜，2019,(4):15
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21

技术实现思路

[0006]专利技术目的：针对现有技术平均每花蕾产生的胚状体苗数量少以及移栽成苗率低的不足，提供一种提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法，提高茄子种质创制和新品种选育的效率。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0008]一种提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法，包括如下步骤：
[0009](1)胚状体单个分离，转入胚状体萌发培养基成苗；
[0010](2)胚状体二次成苗：将发育健壮的无根苗或寄生胚状体苗剪下，转入生根萌芽培养基诱导生根后，形成完整的植株再移栽炼苗；
[0011](3)发育健壮的生根胚状体苗直接移栽：将生根萌芽培养基上生根且发育出1个及
以上枝条的胚状体苗，直接进行移栽炼苗；
[0012](4)移栽成活的丛生苗分株栽植：生长健壮的丛生苗，顺着分枝向根部撕开，分成数个植株，有根的苗直接栽植，无根的枝条则按照组培苗炼苗方法，进行移栽和保湿保温管理，待成活后再移至田间；
[0013](5)移栽田间成活的多分枝苗，分枝条进行自交留种，或者是分枝条进行扦插/嫁接保存。
[0014]具体地，步骤(1)中，在肉眼观察胚状体出现后10d内进行分离和转接，方法是单个独立的胚状体直接转接，紧密靠在一起的胚状体用刀片或解剖针分离成单个独立的胚状体后转接，所有的花药全部转接。
[0015]具体地，步骤(1)中，分所述的分离单个胚状体的时期和方法为：花药接种后40
‑
50天，产生肉眼可见的绿白色胚状体且胚状体未愈伤化，此时将靠在一起的、大小差异明显、生长方向不一致的胚状体，利用解剖针和刀片，在超净工作台上，无菌条件下进行分离。
[0016]具体地，步骤(1)中，所述的胚状体萌发培养基为含有少量生长素和/或分裂素类物质的B5或NLN固体培养基，且生长素类物质浓度高于分裂素类物质浓度；优选生长素类物质浓度为0.2mg/L，分裂素类物质浓度为0.1mg/L。培养条件为放入光照培养箱中培养约10d，培养的温度为25℃，光周期为12～16h，暗周期为8～12h，光照强度为1000～1500lx。
[0017]具体地，步骤(2)中，所述的生根萌芽培养基为B5/NLN固体培养基添加或不添加0.1
‑
0.2mg/L的植物生长素。
[0018]具体地，步骤(2)中所述的移栽方法为：将适宜移栽的苗从培养瓶中取出，根部浸入多菌灵溶液，浸泡时间为5～30min，优选10～30min；取出后用水清洗，轻轻吸干根部液滴，再浸入NAA或IBA溶液中1s
‑
1min，然后栽入常规的育苗基质中，浇透水但不积水，盖上透明度高的薄膜，放入光照培养箱中2周。薄膜四周盖严，防止从苗上部散失水分，前1周不打开薄膜，1周后将薄膜揭开一部分，降低苗的湿度，1周后移栽苗叶色变深、叶片变厚，揭去覆盖的薄膜，根据成活苗的生长情况进行正常的水肥管理即可。
[0019]具体地，育苗基质为市售的蔬菜育苗基质或100％蛭石，厚度不小于10cm，浇透但不积水；将苗的根茎部埋入基质但叶片保留在基质上部，株行距为4cm左右，栽植后在植株周围淋少量的水，促使根部与基质紧密接触。
[0020]具体地，所述的多菌灵溶液由有效成分含量为50wt％的多菌灵可湿性粉剂与水按照1:500～800的质量比稀释得到；所述的NAA或IBA溶液为100～1000ppm。
[0021]具体地，步骤(3)中，胚状体苗苗高超过2cm直接进行移栽炼苗。
[0022]具体地，步骤(4)中，所述的分株方法为：分株后根系发达的植株直接移栽到基质中，放在培养箱中保温保湿1周后，成活植株可移栽至田间；分株后底部无根的植株，按照组培苗出瓶移栽的方法进行移栽。
[0023]具体地，步骤(5)中，所述的各分枝自交方法为：各分枝上的花朵进行同花自交，或同一分枝上的花朵间授粉自交，不同分枝上的花朵之间不能互相授粉；如果因分枝过多而不能同时获得所有分枝上的自交种果，则需要分批自交，即待前期自交坐果枝条上的种果成熟采收后，再对其余枝条上的花蕾进行自交留种。
[0024]优选同花自交方式，单花自交过程为：在气温不超过32℃的晴天进行，将每个枝条上第2天或第3天将开放的大花蕾的花瓣前端用嫁接夹夹住，注意夹住花瓣但不能夹到柱
头，第2d或第3d，找到花瓣开展但顶端被夹子固定在一起的花朵，用小型奶粉搅拌器的前端贴近花柄，打开电源开关，通电震动花朵约10s，挂牌标记；待花瓣干缩后连同嫁接夹一起脱落，而果实已经长出花萼，说明自交成功。
[0025]有益效果：
[0026]应用本专利技术方法，自发或分离产生的独立胚状体，转入生根萌芽培养基，胚状体萌芽率可达到40％
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60％，每花药可分离出几个至几十个甚至上百个胚状体，；生根的健壮胚状体苗移栽成活率达到或超过93％；统计的39个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)胚状体单个分离，转入胚状体萌发培养基成苗；(2)胚状体二次成苗：将发育健壮的无根苗或寄生胚状体苗剪下，转入生根萌芽培养基诱导生根后，形成完整的植株再移栽炼苗；(3)发育健壮的生根胚状体苗直接移栽：将生根萌芽培养基上生根且发育出1个及以上枝条的胚状体苗，直接进行移栽炼苗；(4)移栽成活的丛生苗分株栽植：生长健壮的丛生苗，顺着分枝向根部撕开，分成数个植株，有根的苗直接栽植，无根的枝条则按照组培苗炼苗方法，进行移栽和保湿保温管理，待成活后再移至田间；(5)移栽田间成活的多分枝苗，分枝条进行自交留种，或者是分枝条进行扦插/嫁接保存。2.根据权利要求1所述的提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法，其特征在于，步骤(1)中，在肉眼观察胚状体出现后10d内进行分离和转接，方法是单个独立的胚状体直接转接，紧密靠在一起的胚状体用刀片或解剖针分离成单个独立的胚状体后转接，所有的花药全部转接；所述的分离单个胚状体的时期和方法为：花药接种后40
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50天，产生肉眼可见的绿白色胚状体且胚状体未愈伤化，此时将靠在一起的、大小差异明显、生长方向不一致的胚状体，利用解剖针和刀片，在超净工作台上，无菌条件下进行分离。3.根据权利要求1所述的提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的胚状体萌发培养基为含有少量生长素和/或分裂素类物质的B5或NLN固体培养基，且生长素类物质浓度高于分裂素类物质浓度；优选生长素类物质浓度为0.2mg/L，分裂素类物质浓度为0.1mg/L。4.根据权利要求1所述的提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的生根萌芽培养基为B5/NLN固体培养基添加或不添加0.1
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0.2mg/L的植物生长素。5.根据权利要求1所述的提高茄子花药培养胚状体成苗率的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔群香，徐匆，王人天，崔瑞香，蒋炎，韩梦文，徐佳佳，黄苏玲，陈洋，孙荣欢，
申请(专利权)人：金陵科技学院，
类型：发明
国别省市：