一种伊藤杂种制造技术

一种伊藤杂种

【技术实现步骤摘要】
一种伊藤杂种
‘
和谐
’
组培快繁方法


[0001]本专利技术属于植物培育
，尤其涉及一种伊藤杂种
‘
和谐
’
组培快繁方法。

技术介绍

[0002]伊藤杂种（Itoh hybrids）是牡丹（Paeonia suffruticosa）与芍药（Paeonia lactiflora）杂交得到的组间远缘杂种，兼具牡丹与芍药的共同特征和优点，是芍药属一个独特的类群。伊藤杂种是三倍体，具有极强的杂种优势，具备茎杆挺拔、花头直立、花色奇特、抗逆性更强等特点。尤其是伊藤牡丹花色、花形丰富，花期较长，于牡丹与芍药之间开花，适宜作鲜切花，也可在园林绿化中的专类观赏园、盆栽种植，以及会议或展览的布置等，值得大力推广和应用。
[0003]‘
和谐
’
（Itoh hybrids 'He Xie'）是国内首个伊藤杂种，如图1所示，
‘
和谐
’
花单瓣，浅紫红色，基部有黑紫花斑，花青素和类黄酮等含量较高，是芍药属重要的花色发育研究的模式材料；同时
‘
和谐
’
的花粉亲和力达4.1%，是珍贵的育种亲本材料，具有一定的可育性；此外，
‘
和谐
’
根茎叶的生物含量高，其中，茎叶具较高单萜苷、酚类和黄酮类物质，抗氧化能力强，根部含有较高的没食子酸、肉桂酸和丹皮酚，药用价值高，应用前景非常广阔。
[0004]然而，目前伊藤杂种只能采用分株或嫁接进行繁殖，传统繁殖效率低，育种时间长，导致其价格非常昂贵，严重制约了产业发展。

技术实现思路

[0005]鉴于现有技术的上述缺点、不足，本专利技术提供一种伊藤杂种
‘
和谐
’
组培快繁方法，以伊藤杂种
‘
和谐
’
鳞芽为外植体，通过合理的灭菌时间、激素浓度、根诱导时间对
‘
和谐
’
组培苗启动、增殖、生根的培养构建了
‘
和谐
’
的快繁技术体系。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术采用的主要技术方案包括：一种伊藤杂种
‘
和谐
’
组培快繁方法，包括如下步骤：步骤S01、鳞芽消毒培养将伊藤杂种的鳞芽放置于装有2%次氯酸钠溶液的试管中，消毒8~12 min，培养7天，得到无菌且健壮的萌发芽；步骤S02、鳞芽初代培养将步骤S01消毒后的鳞芽置于初代培养基中培养，培养30~35天，得到长势优良的单芽，启动培养基为MS+0.5~1.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L GA3+0.5 mg/L AgNO3；步骤S03、鳞芽增殖培养将步骤S02得到的单芽置于增殖培养基中，以30~35天为继代周期，继代培养4~5代得到成倍数量的单芽；所述增殖培养基为MS+450 mg/L CaCl2+0.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L IBA+0.2~0.8 mg/L GA3+0.5 mg/L AgNO3；步骤S04、鳞芽生根培养将步骤S03得到的健壮单芽置于生根诱导培养基中，暗培养30~50天，获得长有不
定根的生根苗；所述生根诱导培养基为1/2 MS+1.0 mg/L腐胺+0.5~2.5 mg/L IBA；将得到的生根苗置于根伸长的培养基中，光下培养20天，获得生根苗幼苗；所述的根伸长培养基为1/2 MS+1.0 g/L AC；步骤S05、生根苗训化、移栽将步骤S04得到的根伸长的生根苗幼苗置于4℃冰箱暗培养30天后置于光下闭瓶培养7天，再开盖培养3~5天，移栽至基质中进行培养。
[0007]进一步地，所述步骤S01中，培养所用的培养基为MS+1.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L NAA+0.3 mg/L GA3。
[0008]进一步地，所述步骤S01中的灭菌处理为采用2%次氯酸钠溶液对鳞芽灭菌时间为12 min。
[0009]进一步地，所述步骤S02中的培养基为MS+1.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L GA3+0.5 mg/L AgNO3。
[0010]进一步地，所述步骤S03中的增殖培养基的增殖配方为MS+450 mg/L CaCl2+0.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L IBA+0.2 mg/L GA3+0.5 mg/L AgNO3。
[0011]进一步地，所述步骤S04中的生根诱导培养基为1/2 MS+1.0 mg/L腐胺+2.0 mg/L IBA。
[0012]进一步地，所述步骤S04中的基质包括：珍珠岩、蛭石和草炭土，珍珠岩：蛭石：草炭土体积比为1：1：1。
[0013]进一步地，所述步骤S05还包括移栽苗在光照培养箱培养，进行水肥管理，培养箱的培养条件为温度（20
ꢀ±
１）℃，湿度为60%，光照强度4000lx，光照周期：14ｈ/d黑暗。
[0014]本专利技术进一步提供所述方法在伊藤杂种育种中的应用。
[0015]本专利技术的有益效果是：（1）本专利技术以伊藤杂种
‘
和谐
’
鳞芽为外植体，首次通过外植体离体快繁培养获得国内首个伊藤杂种
‘
和谐
’
的完整植株，并驯化成活，为伊藤杂种离体快繁、再生提供新技术。
[0016]（2）本专利技术研究发现2%次氯酸钠溶液对鳞芽消毒具有促进作用，筛选得出鳞芽外植体消毒的最佳时间为12 min，污染率最低为9.09%。
[0017]（3）本专利技术研究发现生长素与细胞分裂素组合对于鳞芽初代培养具有促进作用，筛选得出鳞芽的最佳启动培养基为MS+1.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L GA3+0.5 mg/L AgNO3。在此培养基中，鳞芽启动诱导率最高为100%，增殖系数最高为2.93，单株茎长最长为3.05。
[0018]（4）本专利技术研究发现生长素与细胞分裂素组合对于丛生芽增殖培养具有促进作用，筛选得出丛生芽的最佳增殖培养基为MS+450 mg/L CaCl2+0.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L IBA+0.2 mg/L GA3 +0.5 mg/L AgNO3。在此培养基中，丛生芽增殖系数最高为3.3，褐化率最低为0.04%；继代次数最佳为5次，增殖率最高为64.75%。
[0019]（5）本专利技术研究发现生长素与有机化合物组合对于丛生芽生根诱导培养具有促进作用，筛选得出丛生芽的最佳生根诱导培养基为1/2 MS+1.0 mg/L腐胺+2.0 mg/L IBA，最佳生根诱导时间为30天。在此处理下，丛生芽不定根诱导率为66.67%，平均生根数最高为3.33，根数最多为7条；（6）本专利技术研究发现生根数与生根质量对于生根苗成活具有促进作用，得出生根
苗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种伊藤杂种
‘
和谐
’
组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S01、鳞芽消毒培养将伊藤杂种的鳞芽放置于装有2%次氯酸钠溶液的试管中，消毒8~12 min，培养7天，得到无菌且健壮的萌发芽；步骤S02、鳞芽初代培养将步骤S01消毒后的鳞芽置于初代培养基中培养，培养30~35天，得到长势优良的单芽，启动培养基为MS+0.5~1.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L GA3+0.5 mg/L AgNO3；步骤S03、鳞芽增殖培养将步骤S02得到的单芽置于增殖培养基中，以30~35天为继代周期，继代培养4~5代得到成倍数量的单芽；所述增殖培养基为MS+450 mg/L CaCl2+0.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L IBA+0.2~0.8 mg/L GA
3 +0.5 mg/L AgNO3；步骤S04、鳞芽生根培养将步骤S03得到的健壮单芽置于生根诱导培养基中，暗培养30~50天，获得长有不定根的生根苗；所述生根诱导培养基为1/2 MS+1.0 mg/L腐胺+0.5~2.5 mg/L IBA；将得到的生根苗置于根伸长的培养基中，光下培养20天，获得生根苗幼苗；所述的根伸长培养基为1/2 MS+1.0 g/L AC；步骤S05、生根苗训化、移栽将步骤S04得到的根伸长的生根苗幼苗置于4℃冰箱暗培养30天后置于光下闭瓶培养7天，再开盖培养3~5天，移栽至基质中进行培养。2.根据权利要求1所述的一种伊藤杂种
‘
和谐
’
组培快繁方法，其特征在于：所述步骤S01中，培养所用的培养基为MS+1.5 mg/L 6
‑
BA+0.2 mg/L NAA+0.3 mg/L GA3...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭丽平，刘政安，任立民，舒庆艳，齐秀双，康敏，李旸，夏忠海，刘福振，
申请(专利权)人：天香源辽宁生物科技有限责任公司北京九绿科技有限公司，
类型：发明
国别省市：