一种大量获得黄精凝集素II的方法技术

本发明专利技术公开了囊丝黄精再生体系的建立方法，其步骤为：Ａ．囊丝黄精（Ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ　　ｃｙｒｔｏｎｅｍａ　　Ｈｕａ）外植体愈伤组织的诱导；Ｂ．将前述愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗；Ｃ．将步骤Ｂ中未生根的幼苗移至生根培养基中诱导生根；Ｄ．将步骤Ｂ和Ｃ中生根的幼苗先炼苗，然后，栽培。采用本发明专利技术方法只需３－４个月即可得到囊丝黄精再生体系，其移栽后的成活率达７０－７５％；其根状茎与药用黄精相比较，甘露糖结合凝集素的含量相近，凝血活性无明显差异。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种具有药用价值的黄精属植物再生体系的建立方法，特别是囊丝黄精再生体系的建立方法。
技术介绍
黄精为百合科植物黄精(Polygonatum sibiricum Redoute)、囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)、热河黄精(Polygonatum macropodiumTurcz.)、滇黄精(Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.)、卷叶黄精(Polygonatum cirrhifolium(Wall.)Royle)等的根茎[1]。黄精入药治病古已有之，《神农本草经》把它列为上品，黄精性甘、味平，归肺、脾、肾、经，具养阴润肺补脾益气的功效，用于滋补强身和治疗肾虚精亏、肺虚燥咳以及脾胃虚之症，是中医常用药物。现代药理学研究证明，黄精具有增强免疫、降低血脂、血糖、延缓衰老、营养神经和解毒功能等多种药理作用，对黄精化学成分的研究表明，黄精含有黄精皂苷、菸酸、糖类、醌类、氨基酸及微量元素。近年来，对黄精多糖的研究已取得一些很有意义的进展，从囊丝黄精中提取的多聚糖(提供组培植物的多聚糖含量)具有增强大鼠免疫系统的活性[2]；其根状茎中的甘露糖结合凝集素-黄精凝集素II(Polygonatumcyrtonema Hua.lectin II，PCL II)具有特异结合甘露糖的活性，作为植物凝集素超家族的一员具有广泛的生物学活性，可作为逆转录病毒的有效抑制剂和用于防止农作物的病虫害等[3，4，5]。目前，黄精主要采用根状茎繁殖。由于根状茎繁殖率低，需3-5年才能长成具药用价值的植株，加之，长期大规模的无序采挖黄精，我国黄精已经面临匮乏的危险。虽然，美国申请号为20030100109的专利技术专利提供了一种新的培养基和一种黄精属植物卷叶黄精离体再生系统的建立方法，该方法将黄精种子分别在三种培养基上进行培养，产生上胚轴、胚芽鞘、根并终止上胚轴的休眠，促进种子萌发，但是，该方法所得幼苗要长成具药用价值的植株所需年限仍然很长。利用组织培养方法快速繁殖营养繁殖系及产生有效药用成分，已渐渐成为药物生产的新方向之一。对于囊丝黄精来说，在组织培养中易发生黄化或玻璃化现象，到目前为止还没有见到通过诱导它的外植体产生愈伤组织，再经组织分化形成再生体系，并在该再生体系根状茎中发现甘露糖结合凝集素的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种囊丝黄精再生体系的建立方法，克服囊丝黄精根状茎繁殖殖率低、生长年限长的缺陷，并使再生体系中的蛋白质成分种类和含量与野生的植株相似。本专利技术对所要解决的技术问题所采用的技术方案为提供一种囊丝黄精再生体系的建立方法，其步骤为a、囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)外植体愈伤组织的诱导；b、将前述愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗；c、将步骤b中未生根的幼苗移至生根培养基中诱导生根；d、将步骤b和c中生根的试管苗先炼苗，然后，栽培。在步骤a中，所述的囊丝黄精外植体为其根、根状茎或叶；将囊丝黄精外植体灭菌后接种到愈伤组织诱导培养基上，于避光条件下诱导培养愈伤组织，培养温度为25±2℃，培养时间为5-8周，所述的愈伤组织的诱导培养基组成为MS基本培养基、0.5-2.0mg/L 6-BA、0.5-4.0mg/L 2，4-D、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；本专利技术愈伤组织诱导培养基优选组成为MS基本培养基、1.0mg/L 6-BA、2.0mg/L 2，4-D、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。以上所述的MS基本培养基的组成为大量元素(1.65g/L NH4NO3，1.9g/L KNO3，0.44g/L CaCl2.2H2O，0.37g/L MgSO4.7H2O，0.17g/L KH2PO4)、微量元素(37.25mg/L Na2EDTA，27.8mg/L FeSO4.7H2O，0.83mg/L KI，6.2mg/L H3BO3，22.3mg/L MnSO4.4H2O，8.6mg/L ZnSO4.7H2O，0.25mg/LNa2MoO4.2H2O，0.025mg/L CuSO4.5H2O，0.025mg/L CoCl2.6H2O)、2mg/L苷氨酸、100mg/L肌醇、0.1mg/L盐酸硫胺素(B1)、0.5mg/L盐酸吡哚醇(B6)、0.5mg/L烟酸。在步骤b中，将愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗，培养温度为25±2℃，光照时间为12-16小时/天，光照强度为1200-2000Lx，培养时间3-4周，所述的分化培养基组成为MS基本培养基、0.5-4.0mg/L 2，4-D、0-2.0mg/L 6-BA、0-0.6mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；本专利技术分化培养基优选组成为MS基本培养基、2.0mg/L 2，4-D、2.0mg/L6-BA、0.3mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8，培养温度为25±2℃，光照时间为12小时/天，光照强度为1200Lx，培养2-3周。在步骤c中，将未生根的幼苗移至生根培养基中诱导根的分化，培养温度为25±2℃，光照时间为12-16小时/天，光照强度为1200-2000Lx，培养3-4周，所述的生根培养基组成为1/2MS基本培养基、0.3-0.5mg/LNAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；本专利技术生根培养基优选组成为1/2MS基本培养基、0.5mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8，光照时间为12小时/天，光照强度为1200Lx，培养3-4周。在步骤c中，本专利技术所述的生根培养基组成也可为1/2MS基本培养基、0.5mg/L 6-BA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，光照时间为12小时/天，光照强度为1200Lx，培养3-4周。以上所述的1/2MS基本培养基的组成为大量元素(0.83g/L NH4NO3，0.95g/L KNO3，0.22g/L CaCl2.2H2O，0.185g/L MgSO4.7H2O，0.085g/LKH2PO4)、微量元素(37.25mg/L Na2EDTA，27.8mg/L FeSO4.7H2O，0.83mg/LKI，6.2mg/L H3BO3，22.3mg/L MnSO4.4H2O，8.6mg/L ZnSO4.7H2O，0.25mg/LNa2MoO4.2H2O，0.025mg/L CuSO4.5H2O，0.025mg/L CoCl2.6H2O)、2mg/L苷氨酸、100mg/L肌醇、0.1mg/L盐酸硫胺素(B1)、0.5mg/L盐酸吡哚醇(B6)、0.5mg/L烟酸。在步骤d中，所述的炼苗和栽培包括将生根的试管苗移至自然光下培养3-4天，打开瓶盖，炼苗2-3天，然后再取出幼苗，洗净琼脂，移入疏松的重量比为1∶1的泥炭土与蛭石中，在温度为27±1℃、自然光下培养。本专利技术的有益效果为本专利技术方法具有较高的分化率，只需3-4个月即可得到囊丝黄精再生体系，其移栽后的成活率达70-75％，有利于大规模的栽培和使用；而且，其根状茎中的蛋白质成分种类和含量与野生的植株相似，特别是甘露糖结合凝集素与野生的植株含量和凝血活力相近，为根状茎中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于：其步骤为：ａ、囊丝黄精（ＰｏｌｙｇｏｎａｔｕｍｃｙｒｔｏｎｅｍａＨｕａ）外植体愈伤组织的诱导；ｂ、将前述愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗；ｃ、将步骤ｂ中未生根的幼苗移 至生根培养基中诱导生根；ｄ、将步骤ｂ和ｃ中生根的幼苗先炼苗，然后，栽培。

【技术特征摘要】
1.囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于其步骤为a、囊丝黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)外植体愈伤组织的诱导；b、将前述愈伤组织接种到分化培养基中诱导生苗；c、将步骤b中未生根的幼苗移至生根培养基中诱导生根；d、将步骤b和c中生根的幼苗先炼苗，然后，栽培。2.根据权利要求1所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于在步骤a中，所述的囊丝黄精外植体为其根、根状茎或叶。3.根据权利要求1所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于在步骤a中，所述的愈伤组织的诱导培养基组成为MS基本培养、0.5-2.0mg/L6-BA、0.5-4.0mg/L2，4-D、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，避光培养，培养时间为5-8周。4.根据权利要求3所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于所述的愈伤组织诱导培养基组成为MS基本培养基、1.0mg/L6-BA、2.0mg/L2，4-D、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8。5.根据权利要求1所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于在步骤b中，所述的分化培养基组成为MS基本培养基、0.5-4.0mg/L2，4-D、0-2.0mg/L6-BA、0-0.6mg/L NAA、8g/L琼脂、30g/L蔗糖，pH5.8；培养温度为25±2℃，光照时间为12-16小时/天，光照强度为1200～2000Lx，培养3-4周。6.根据权利要求5所述的囊丝黄精再生体系的建立方法，其特征在于所述的分化培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲍锦库，吴传芳，安洁，高顺，赵曦，常丽青，荣艳珍，吕鸿周，何小佳，洪志霞，邓洁，刘超，顾莹，陈放，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]