一种检测马尔堡病毒的引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测马尔堡病毒的引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明专利技术提供的引物探针组合物检测马尔堡病毒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。本发明专利技术利用一体化芯片上微流控的方式集成了核酸提取、纯化、扩增和检测，解决病原体快速检测的问题，实现“样本进

【技术实现步骤摘要】
一种检测马尔堡病毒的引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种检测马尔堡病毒的引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。

技术介绍

[0002]马尔堡病毒是马尔堡出血热的致病菌，而马尔堡出血热是一种严重的人类疾病，其平均死亡率约为50％。在以往的疫情中，病死率从24％至88％不等，取决于病毒株和病例管理情况。狐蝠科的北非果蝠被认为是马尔堡病毒的天然宿主。马尔堡病毒由果蝠传播给人类，并在人际间传播。疾病潜伏期(从获得感染到出现症状的时间间隔)从2天到21天不等。
[0003]随着全球化发展，方便、快捷的交通工具使得不同国家和地区的人员以及动物产品流动日益频繁，也给传染病的传播和流行创造了有利条件。如何在边境检验检疫中快速筛查相关病原体变得越来越重要。传统检测方法如病毒分离培养，其操作复杂，检测周期长；抗原检测和血清学检测等免疫法的特异性高，但灵敏度较低，且不能用于疾病的早期诊断。实时荧光定量PCR技术是目前应用最广泛的分子检测法，该技术具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高等特点。但是许多设备体积较大，并且样本通常需要前处理，对实验条件要求相对较高，不适合现场检测。
[0004]本申请人基于以上问题，经过数年研发，于在先申请CN202110057507.0中公开了一种新型现场化快速核酸检测设备CarryOn P1000Q，该设备为“手持全自动封闭式核酸qPCR分析系统”，可在60分钟内完成相关病原体的现场自动化核酸检测，能够实现“样品进，结果出”的快速检测。本申请即在该技术的基础上进一步研发出的，能够更好的配合该设备的试剂类专利技术，即检测马尔堡病毒的一体化微流控芯片试剂盒。
[0005]现有的检测试剂盒及方法操作时间长，且操作步骤繁琐，因此，亟需提供一种灵敏度高、特异性强、覆盖面广、操作简便、省时且节约成本的检测马尔堡病毒的试剂盒及其使用方法。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中的上述问题，本申请提供了一种检测马尔堡病毒的引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本专利技术所述的引物探针组合物可检测马尔堡病毒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一方面，本专利技术提供了一种检测马尔堡病毒的引物探针组合物，所述的引物探针组合物包括检测马尔堡病毒的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物。
[0009]具体地，所述的检测马尔堡病毒的引物探针组合物包括MARV引物探针组合物。
[0010]具体地，所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物。
[0011]进一步具体地，
[0012](1)所述的MARV引物探针组合物为：
[0013]F：SEQ ID NO:1：5'
‑
GATTCACACTGAGTGGGCAA
‑
3'；
[0014]R：SEQ ID NO:2：5'
‑
CCTGTCCTGAAAGCCCATC
‑
3'；
[0015]P：SEQ ID NO:3：5'
‑
ATGCCTCCAAAGGGGAATCAGC
‑
3'；
[0016](2)所述的IPC引物探针组合物为：
[0017]F：SEQ ID NO:4：5'
‑
AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA
‑
3'；
[0018]R：SEQ ID NO:5：5'
‑
TCGACGAGACTCTGCTGTTAA
‑
3'；
[0019]P：SEQ ID NO:6：5'
‑
CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA
‑
3'。
[0020]具体地，所述的检测马尔堡病毒的引物探针组合物用于检测马尔堡病毒的GP基因。
[0021]具体地，所述探针的5'端标记有荧光报告基团，所述探针的3'端标记有淬灭基团；所述荧光报告基团为CY3、CY5、CY5.5、FAM、HEX、VIC、JOE或ROX中的一种或多种，所述淬灭基团为荧光淬灭基团。
[0022]进一步具体地，所述的检测马尔堡病毒的探针5
’
端荧光报告基团为FAM，3
’
端淬灭基团为BHQ1；所述的检测内参IPC的探针5
’
端荧光报告基团为CY5，3
’
端淬灭基团为BHQ3。
[0023]另一方面，本专利技术提供了上述引物探针组合物在制备检测马尔堡病毒产品中的应用。
[0024]具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。
[0025]又一方面，本专利技术提供了一种检测马尔堡病毒的产品，所述的产品包括上述引物探针组合物。
[0026]具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。
[0027]具体地，所述的产品还包括纯化试剂、风干RT
‑
qPCR反应试剂和冻干IPC过程质控品。
[0028]进一步具体地，所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X
‑
100，所述的洗脱液包括Tris
‑
HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2
‑
2.5，所述的磁珠为干化磁珠。
[0029]进一步具体地，所述的裂解液包括6M盐酸胍、0.4M醋酸钠(pH 4.7)和2％Triton X
‑
100，所述的洗脱液包括10mM Tris
‑
HCl(pH 8.5)。
[0030]进一步具体地，所述的冻干IPC过程质控品的序列为SEQ ID NO:7。
[0031]进一步具体地，所述的冻干IPC过程质控品是RNA假病毒。
[0032]进一步具体地，所述的冻干IPC过程质控品还包括甘露醇、海藻糖、牛血清白蛋白、消泡剂、2
‑
羟丙基
‑
β
‑
环糊精、Tris
‑
HCl(pH 8.0)、NaCl和Tween20。
[0033]进一步具体地，所述的冻干IPC过程质控品以冻干球的形式封装在一体化微流控芯片中。
[0034]又一方面，本专利技术还提供了一种检测马尔堡病毒的一体化微流控芯片试剂盒，所述的试剂盒包括上述引物探针组合物。
[0035]具体地，所述的产品还包括纯化试剂、风干RT
‑
qPCR反应试剂和冻干IPC过程质控品。
[0036]进一步具体地，所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X
‑
100，所述的洗脱液包括Tris
‑
HCl，所述的裂解液和洗脱液的体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测马尔堡病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述的引物探针组合物包括检测马尔堡病毒的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物；所述的检测马尔堡病毒的引物探针组合物包括MARV引物探针组合物；所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物；所述的MARV引物探针组合物为：F：SEQ ID NO:1：5'
‑
GATTCACACTGAGTGGGCAA
‑
3'；R：SEQ ID NO:2：5'
‑
CCTGTCCTGAAAGCCCATC
‑
3'；P：SEQ ID NO:3：5'
‑
ATGCCTCCAAAGGGGAATCAGC
‑
3'；所述的IPC引物探针组合物为：F：SEQ ID NO:4：5'
‑
AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA
‑
3'；R：SEQ ID NO:5：5'
‑
TCGACGAGACTCTGCTGTTAA
‑
3'；P：SEQ ID NO:6：5'
‑
CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA
‑
3'。2.权利要求1所述的引物探针组合物在制备检测马尔堡病毒产品中应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的产品包括独立试剂、芯片或试剂盒。4.一种检测马尔堡病毒的产品，其特征在于：所述的产品包括权利要求1所述的引物探针组合物。5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于：所述的产品还包括纯化试剂、风干RT
‑
qPCR反应试剂和冻干IPC过程质控品。6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X
‑
100，所述的洗脱液包括Tris
‑
HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：肖利力，金鑫浩，刘翌，康洁，贾欣月，张瑜，高静，蔡亦梅，范东雨，任鲁风，
申请(专利权)人：海关总署北京国际旅行卫生保健中心，
类型：发明
国别省市：