一种马亚罗病毒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体涉及一种马亚罗病毒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本发明专利技术提供的引物探针组合物检测马亚罗病毒，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。本发明专利技术利用一体化芯片上微流控的方式集成了核酸提取、纯化、扩增和检测，解决病原体快速检测的问题，实现“样本进

【技术实现步骤摘要】
一种马亚罗病毒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种马亚罗病毒核酸检测引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。

技术介绍

[0002]马亚罗病毒病是一种由蚊子传播的人畜共患病，可持续3～5天的急性非致命发热性疾病，以头痛、眶后痛、关节痛、关节炎、肌痛、呕吐、腹泻和皮疹为特征。马亚罗病毒病的症状包括远端关节痛、肌痛和伴关节痛的皮疹可持续数月，也有报道称感染后再次出现关节痛。马亚罗病毒病的临床症状与登革病毒(DENV)病和基孔肯雅病毒(CHIKV)疾病的临床症状非常相似。这也经常会导致马亚罗病毒病的误诊，进而导致病毒的漏报。
[0003]马亚罗病毒是一种包膜病毒，具有直径70纳米的二十面体衣壳。该病毒基因组由一个线性的单链RNA 组成，包含5
’
非翻译区、3
’
非编码区和两个开放阅读框(ORF)。5
’
近端ORF编码蛋白，切割后形成非结构蛋白(nsP1,nsP2,nsP3,nsP4)，3
’
近端ORF编码蛋白，切割成结构蛋白，生成衣壳蛋白和包膜表面糖蛋白。
[0004]实时荧光定量PCR技术是目前应用最广泛的病原体分子检测法，该技术不仅实现了对病毒核酸的定性和定量，而且具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高等特点。但对于病毒的核酸检测，现有检测系统或方法通常需要在检测前进行样品处理提取核酸，本申请人基于该问题，经过数年研发，与在先申请 CN202110057507.0中公开了一种新型现场化快速核酸检测设备CarryOn P1000Q，该设备为“手持全自动封闭式核酸qPCR分析系统”，能够实现“样品进，结果出”的快速检测。本申请即在该技术的基础上，进一步研发出的，能够更好的配合该设备的试剂类专利技术，即马亚罗病毒检测的一体化微流控芯片试剂盒，该试剂盒在一体化芯片上进行样本的核酸提取、纯化、扩增和检测，实现了快速的POCT检测。
[0005]现有的检测试剂盒及方法较操作时间长，且操作步骤繁琐，因此，亟需提供一种灵敏度高、特异性强、覆盖面广、操作简便、省时且节约成本的马亚罗病毒核酸检测试剂盒及其使用方法。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中的上述问题，本申请提供了一种马亚罗病毒检测的引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒。采用本专利技术所述的引物探针组合物及一体化微流控芯片试剂盒检测马亚罗病毒，集成了核酸提取、纯化、扩增和检测，具有较好的灵敏度和准确度，扩增效率高，且操作简便，快速省时。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]一方面，本专利技术提供了一种检测马亚罗病毒的引物探针组合物，所述的引物探针组合物包括检测马亚罗病毒的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物。
[0009]具体地，所述的检测马亚罗病毒的引物探针组合物为MAYV引物探针组合物；
[0010]具体地，所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物。
[0011]进一步具体地，
[0012](1)所述的MAYV引物探针组合物为：
[0013]MAYV
‑
F(SEQ ID NO:1)：5'
‑
CGGACCTTTTGCCTTCACA
‑
3'；
[0014]MAYV
‑
R(SEQ ID NO:2)：5'
‑
GGACCGCATAGACGTCCTGA
‑
3'；
[0015]MAYV
‑
P(SEQ ID NO:3)：5'
‑
AGACTGCCACCTCTGCTTGAGTCCT
‑
3'；
[0016](2)所述的IPC引物探针组合物为：
[0017]F(SEQ ID NO:4)：5'
‑
AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA
‑
3'；
[0018]R(SEQ ID NO:5)：5'
‑
TCGACGAGACTCTGCTGTTAA
‑
3'；
[0019]P(SEQ ID NO:6)：5'
‑
CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA
‑
3'。
[0020]具体地，所述的马亚罗病毒的引物探针组合物用于检测马亚罗病毒的nsP1基因。
[0021]具体地，所述探针的5'端标记有荧光报告基团，所述探针的3'端标记有淬灭基团；所述荧光报告基团为CY3、CY5、CY5.5、FAM、HEX、VIC、JOE或ROX中的一种或多种，所述淬灭基团为荧光淬灭基团。
[0022]进一步具体地，所述的检测内参IPC的探针用CY5标记。
[0023]另一方面，本专利技术提供了上述引物探针组合物在制备检测马亚罗病毒产品中的应用。
[0024]具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。
[0025]又一方面，本专利技术提供了一种检测马亚罗病毒的产品，所述的产品包括上述引物探针组合物。
[0026]具体地，所述的产品包括但不限于独立试剂、芯片或试剂盒。
[0027]具体地，所述的产品还包括纯化试剂、风干RT
‑
qPCR反应试剂和冻干IPC质控品。
[0028]进一步具体地，所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和TritonX
‑
100，所述的洗脱液包括Tris
‑
HCl，所述的裂解液和洗脱液的体积比为1:2
‑
2.5，所述的磁珠为干化磁珠。
[0029]进一步具体地，所述的裂解液包括6M盐酸胍、0.4M醋酸钠(pH4.7)和2％Triton X
‑
100，所述的洗脱液包括10mM Tris
‑
HCl(pH8.5)。
[0030]进一步具体地，所述的冻干IPC过程质控品的序列为SEQ ID NO:7。
[0031]进一步具体地，所述的冻干IPC过程质控品是RNA假病毒。
[0032]进一步具体地，所述的冻干IPC过程质控品的冻干体系包括甘露醇、海藻糖、牛血清白蛋白、消泡剂、 2
‑
羟丙基
‑
β
‑
环糊精、Tris
‑
HCl(pH 8.0)、NaCl、Tween20。
[0033]进一步具体地，所述的冻干IPC过程质控品以冻干球的形式封装在一体化微流控芯片中。
[0034]又一方面，本专利技术还提供了一种检测马亚罗病毒的微流控芯片试剂盒，所述的试剂盒包括上述引物探针组合物。
[0035]具体地，所述的试剂盒还包括纯化试剂、风干RT
‑
qPCR反应试剂和冻干IPC质控品。
[0036]进一步具体地，所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测马亚罗病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述的引物探针组合物包括检测马亚罗病毒的引物探针组合物和检测内参的引物探针组合物；所述的检测马亚罗病毒的引物探针组合物为MAYV引物探针组合物；所述的检测内参的引物探针组合物为IPC引物探针组合物；所述的MAYV引物探针组合物为：MAYV
‑
F：SEQ ID NO:1：5'
‑
CGGACCTTTTGCCTTCACA
‑
3'；MAYV
‑
R：SEQ ID NO:2：5'
‑
GGACCGCATAGACGTCCTGA
‑
3'；MAYV
‑
P：SEQ ID NO:3：5'
‑
AGACTGCCACCTCTGCTTGAGTCCT
‑
3'；所述的IPC引物探针组合物为：F：SEQ ID NO:4：5'
‑
AGTTGCAGTGTAACCGTCATGTA
‑
3'；R：SEQ ID NO:5：5'
‑
TCGACGAGACTCTGCTGTTAA
‑
3'；P：SEQ ID NO:6：5'
‑
CAGTAATCTGCGTCGCACGTGTGCA
‑
3'。2.权利要求1所述的引物探针组合物在制备检测马亚罗病毒产品中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的产品包括独立试剂、芯片或试剂盒。4.一种检测马亚罗的产品，其特征在于：所述的产品包括权利要求1所述的引物探针组合物。5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于：所述的产品还包括纯化试剂、风干RT
‑
qPCR反应试剂和冻干IPC质控品。6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于：所述的纯化试剂包括裂解液、洗脱液和磁珠，所述的裂解液包括盐酸胍、醋酸钠和Triton X
‑
100，所述的洗脱液包括Tris
‑
HCl，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖利力，高静，刘建礼，康洁，金鑫浩，贾欣月，张瑜，蔡亦梅，范东雨，任鲁风，
申请(专利权)人：海关总署北京国际旅行卫生保健中心，
类型：发明
国别省市：