一种抑制硫酸盐还原菌的抑制菌及其防腐蚀应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制硫酸盐还原菌的抑制菌及其防腐蚀应用，属于油田回注水的微生物防腐技术与应用，所述抑制菌为类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)NRB

【技术实现步骤摘要】
一种抑制硫酸盐还原菌的抑制菌及其防腐蚀应用


[0001]本专利技术属于油田回注水的微生物防腐技术与应用，具体涉及一种抑制硫酸 盐还原菌的抑制菌及其防腐蚀应用。

技术介绍

[0002]微生物腐蚀(Microbiological influenced corrosion,MIC)是指由各种微生物 的生命活动及其代谢产物直接或者间接对金属所造成的腐蚀。自然界中微生物 在多种材料上形成生物膜，为微生物腐蚀提供环境。生物膜的防御机制保护微 生物免受环境伤害，使得一般的杀菌剂等难以深入达到杀菌效果。
[0003]在石油和天然气系统中，氧化性杀菌剂和非氧化性杀菌剂被广泛应用。虽 然杀菌剂使用简单，维护方便，但杀菌剂无法穿透微生物产生的多糖胶膜，而 硫酸盐还原菌(Sulfate Reducing Bacteria，SRB)有时共存于其他微生物产生的多 糖胶膜中，从而使杀菌变得困难。长期处于H2S的还原性环境中，氧化性杀菌 剂的杀菌效率会降低，无法达标。另外大量长期使用杀菌剂，微生物本身会产 生抗药性，只能不断提高杀菌剂浓度才能达到杀菌效果，使处理成本增加。杀 菌剂本身毒性也会造成环境污染。生物竞争排斥技术具备环境友好、价格低廉、 处理范围大、操作简单的特点，是油田注水系统与油藏治理硫酸盐还原菌的重 要方法。因此利用生物竞争方法来抑制硫酸盐还原菌生长越来越普遍。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于：针对上述现象存在的问题，本专利技术提供一种抑制硫酸 盐还原菌活性的抑制菌及其在抑制油田回注水中硫酸盐还原菌引起的腐蚀中的 应用，达到油田回注水与采油安全生产的目的。
[0005]本专利技术采用的技术方案如下：一种抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌，所述 抑制菌为地衣芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)NRB
‑
7，保藏编号为CGMCC No. 24530，或类芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)NRB
‑
12，保藏编号为CGMCCNo.24531。
[0006]一种抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌的筛选方法，包括以下步骤：
[0007]S1：对接种物进行富集培养，并对产物进行分离、纯化；
[0008]S2：从分离与纯化的培养物中筛选出具有NO3‑
还原特性的菌；
[0009]S3：通过绘制具有NO3‑
还原特性的菌的生长曲线筛选出生长快、生长期短 的菌；
[0010]S4：利用与硫酸盐还原菌(SRB)的拮抗抑制作用进一步筛选步骤S3筛选 出来的菌，即得到抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌；
[0011]S5：利用静态腐蚀挂片实验预测步骤S4中筛选出来的抑制硫酸盐还原菌活 性的抑制菌对硫酸盐还原菌引起的腐蚀的抑制率。
[0012]优选地，步骤S1中的接种物为油田回注水；步骤S1中的富集培养的方法 为：将重量百分含量为NRB和SRB混合培养基的5
‑
15％的接种物投加进无菌 NRB和SRB混合培养基中，在30
‑
35℃，常压条件下培养3
‑
5d；然后吸取混合 培养基中未变黑5
‑
15％的培养液，接
入新的NRB培养基中，进行富集培养，重复上述培养步骤2
‑
4次；步骤S1中的分离、纯化采用稀释涂布分离单菌落的方法。
[0013]优选地，步骤S2中筛选出具有NO3‑
还原特性的菌的方法为采用硝酸试剂检验法，硝酸试剂检验法为依次将步骤S1分离、纯化筛选得到的菌接种于NRB培养基中培养，后通过格里斯氏Griess试剂对NRB培养基中的NO2‑
进行检测、通过二苯胺试剂对NRB培养基中的NO3‑
进行检测，筛选出测定结果为阳性的菌，即具有NO3‑
还原特性的菌。其中NRB和SRB混合培养基(g/L)：NaCl5、MgCl21.8、CaCl20.02、NH4Cl0.3、K2HPO40.2、KCl0.5、KNO33、NaSO44、乳酸钠6ml、酵母粉1，调节pH值至7.0
‑
7.4；硝酸盐还原菌(NRB)培养基(g/L)：NaCl5、MgCl21.8、CaCl20.02、NH4Cl0.3、K2HPO40.2、KCl0.5、KNO33、乳酸钠6ml、酵母粉1，调节pH值至7.0
‑
7.4。
[0014]优选地，步骤S3中生长曲线的绘制方法为：将步骤S2中筛选出具有NO3‑
还原特性的菌接种到新NRB培养基中，培养过程中，每10
‑
14小时取一次样，将取出的NRB培养液进行离心并清洗，后用紫外可见分光光度计测定其光密度值(OD
600
)并对其生长曲线进行绘制。
[0015]优选地，步骤S4利用硝酸盐还原菌与硫酸盐还原菌的拮抗抑制作用进一步筛选步骤S3筛选出来的菌方法的具体步骤为：S4
‑
1：确定抑制硫酸盐还原菌的营养评价体系；
[0016]S4
‑
2：将步骤S3筛选出来的菌经过活化培养后，分别以相同的量接种到S4
‑
1确定的硫酸盐还原菌的营养评价体系中，设置平行及空白实验，于30
‑
35℃恒温培养箱中培养，每天定期取样测定S2‑
的浓度变化，筛选出抑制硫酸盐还原菌效果好的菌。
[0017]优选地，所述抑制硫酸盐还原菌的营养评价体系的确定的具体的方法为：S4
‑
11：通过在硫酸盐还原菌培养基中按照重量比为(9:1)
‑
(1:9)添加油田回注水水样，设计多组实验组和相应的对照组；S4
‑
12：每天分别测实验组和对照组中S2‑
含量，且在培养的第1天和第5天，分别以重量比(1
‑
3):20在实验组添加生物激活剂；S4
‑
13：绘制S2‑
含量随培养时间的变化曲线，确定对照组硫酸盐还原菌稳定生且实验组抑制效果明显作为抑制硫酸盐还原菌的营养评价体系。硫酸盐还原菌(SRB)富集培养基(g/L)：NaCl5、MgCl21.8、CaCl20.02、NH4Cl0.3、K2HPO40.2、KCl0.5、NaSO44、乳酸钠6ml、酵母粉1，调节pH值至7.0
‑
7.4。
[0018]优选地，所述生物激活剂由重量比为(0
‑
9):(1
‑
10):(0
‑
15)的NO3‑
、NO2‑
及MoO4‑
组成。
[0019]上文所述的一种抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌地衣芽孢杆菌(Paenibacillussp.)NRB
‑
7，或/和类芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)NRB
‑
12，在抑制油田回注水中硫酸盐还原菌引起的腐蚀中的应用。地衣芽孢杆菌(Paenibacillussp.)NR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌，其特征在于，所述抑制菌为地衣芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)NRB
‑
7，保藏编号为CGMCC No.24530，或类芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)NRB
‑
12，保藏编号为CGMCC No.24531。2.根据权利要求1所述的一种抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：对接种物进行富集培养，并对产物进行分离、纯化；S2：从分离与纯化的培养物中筛选出具有NO3‑
还原特性的菌；S3：通过绘制具有NO3‑
还原特性的菌的生长曲线筛选出生长快、生长期短的菌；S4：利用与硫酸盐还原菌的拮抗抑制作用进一步筛选步骤S3筛选出来的菌，即得到抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌；S5：利用静态腐蚀挂片实验预测步骤S4中筛选出来的抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌对硫酸盐还原菌引起的腐蚀的抑制率。3.根据权利要求2所述的一种抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌的筛选方法，其特征在于，步骤S1中的接种物为油田回注水；步骤S1中的富集培养的方法为：将重量百分含量为NRB和SRB混合培养基的5
‑
15％的接种物投加进无菌NRB和SRB混合培养基中，在30
‑
35℃，常压条件下培养3
‑
5d；然后吸取混合培养基中未变黑5
‑
15％的培养液，接入新的NRB培养基中，进行富集培养，重复上述培养步骤2～4次；步骤S1中的分离、纯化采用稀释涂布分离单菌落的方法。4.根据权利要求2所述的一种抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌的筛选方法，其特征在于，步骤S2中筛选出具有NO3‑
还原特性的菌的方法为采用硝酸试剂检验法，硝酸试剂检验法为依次将步骤S1分离、纯化筛选得到的菌接种于NRB培养基中培养，后通过格里斯氏Griess试剂对NRB培养基中的NO2‑
进行检测、通过二苯胺试剂对NRB培养基中的NO3‑
进行检测，筛选出测定结果为阳性的菌，即具有NO3‑
还原特性的菌。5.根据权利要求2所述的一种抑制硫酸盐还原菌活性的抑制菌的筛选方法，其特征在于，步骤S3中生长曲线的绘制方法为：将步骤S2中筛选出具有NO3‑
还原特性的菌接种到新N...

【专利技术属性】
技术研发人员：李强，苏楠，程长坤，李星国，林海，沈慧，李为，付鉴，扈福堂，邢政才，薛成，张玉冰，
申请(专利权)人：中国石油天然气股份有限公司，
类型：发明
国别省市：