一种共提取totalDNA、totalRNA和总蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种共提取totalDNA、totalRNA和总蛋白的方法。与AllPrep DNA/RNA/ProteinMiniKit共提取的步骤相比，本发明专利技术提供的方法额外增加了<200nt的RNA片段的提取步骤和样本为细胞、组织或菌源样本时的溶菌酶处理的步骤。该方法在总蛋白提取效果不变的情况下，可以实现包括菌源totalDNA在内的totalDNA以及包括smallRNA在内的totalRNA的提取，完全可以满足下游进行宏基因组和small RNA分析的需求；将<200nt的RNA片段和>200nt的RNA片段混合，也可进行全转录组的建库测序分析。本发明专利技术具有重要的应用价值。具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种共提取total DNA、total RNA和总蛋白的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种共提取total DNA、total RNA和总蛋白的方法。

技术介绍

[0002]目前，对于临床样本的单一多组学分别建库测序技术已经非常成熟，可实现对同一患者的平行样本进行DNA、RNA、蛋白组和代谢组分析。但是单一多组学的样本来源非完全一致，而是通过不同的样本获得DNA、RNA和蛋白等衍生物，由于肿瘤异质性的存在，在多组学关联分析时，不能反映各个组学之间真实的对应信息，且临床样本量经常不能满足单一多组学的研究需求。
[0003]目前市场上已经存在基于过柱法对同一样本进行DNA/RNA/Protein共提取的商业试剂盒，但该商业试剂盒只能共提取得到>200nt的RNA片段，不能回收得到<200nt的RNA片段，因此不能满足下游进行宏基因组和small RNA分析的需求。此外，该商业试剂盒也不能进行菌源DNA的提取。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的为共提取样本中total DNA、total RNA和总蛋白且total RNA中含有<200nt的RNA片段。
[0005]本专利技术首先保护一种共提取样本中total DNA、total RNA和总蛋白的方法，通过AllPrep DNA/RNA/Protein Mini Kit实现total DNA、总蛋白和>200nt的RNA片段的提取，其特征在于：所述方法还包括<200nt的RNA片段的提取；
[0006]所述<200nt的RNA片段的提取包括如下步骤：
[0007](1)将进行总蛋白的提取时获得的flow
‑
through和BufferAPP混匀，孵育，收集上清；
[0008](2)用氯仿/异戊醇抽提步骤(1)收集的上清1次以上，并继续收集上清；
[0009](3)向步骤(2)收集的上清中的加入氯仿/异戊醇和糖原，混匀，收集沉淀；
[0010](4)将步骤(3)收集的沉淀依次进行清洗、干燥、溶解，得到<200nt的RNA片段；
[0011]<200nt的RNA片段和>200nt的RNA片段共同组成total RNA。
[0012]上述方法中，AllPrep DNA/RNA/Protein Mini Kit为QIAGEN公司的产品，产品目录号为80004。
[0013]上述方法中，通过AllPrep DNA/RNA/Protein Mini Kit实现total DNA的提取的步骤如下：
[0014](a1)向20mg样本中加入1颗不锈钢微珠(直径约5mm)和Buffer RLT，然后分装于TissueLyserAdapter Set2
×
24，20Hz处理2min，得到裂解液。
[0015](a2)完成步骤(a1)后，将裂解液离心，将上清转移至放置于EP管(命名为EP
‑
A管)的AllPrep DNA spin column中，离心，得到AllPrep DNA spin column和装有液体flow
‑
through的EP
‑
A管，该液体flow
‑
through用于后续的RNA片段的提取。
[0016](a3)完成步骤(a2)后，将AllPrep DNA spin column置于一个新的EP管(命名为EP
‑
B管)中，放置，用于total DNA的提取。
[0017](a4)完成步骤(a3)后，向放置于EP
‑
B管的AllPrep DNA spin column中加入BufferAW1，离心，清洗AllPrep DNAspin column，丢弃液体flow
‑
through。
[0018](a5)完成步骤(a4)后，将AllPrep DNA spin column放置在EP
‑
B管中，加入BufferAW2，离心，清洗AllPrep DNAspin column，丢弃EP
‑
B管和液体flow
‑
through。
[0019](a6)完成步骤(a5)后，将AllPrep DNA spin column置于EP管，再加入预热至70℃的Buffer EB于膜中央，孵育2min，之后离心，收集洗脱液。
[0020](a7)完成步骤(a6)后，将所述洗脱液再次加入AllPrep DNA spin column的膜中央，孵育2min，离心，收集洗脱液；该洗脱液即为total DNA溶液。
[0021]上述方法中，通过AllPrep DNA/RNA/Protein Mini Kit实现总蛋白的提取的步骤如下：
[0022](b1)向20mg样本中加入1颗不锈钢微珠(直径约5mm)和BufferRLT，然后分装于TissueLyserAdapter Set2
×
24，20Hz处理2min，得到裂解液。
[0023](b2)完成步骤(b1)后，将裂解液离心，将上清转移至放置于EP管(命名为EP
‑
A管)的AllPrep DNA spin column中，离心，得到AllPrep DNAspin column和装有液体flow
‑
through的EP
‑
A管。
[0024](b3)完成步骤(b2)后，取装有液体flow
‑
through的EP
‑
A管，加入无水乙醇，混匀。
[0025](b4)完成步骤(b3)后，将EP
‑
A管中的液体放置于EP管(命名为EP
‑
C管)的RNeasy spin column中，离心，将EP
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C管中的液体flow
‑
through转移到新EP管(命名为EP
‑
D管)中，用于总蛋白提取。
[0026](b5)完成步骤(b4)向EP
‑
D管中的液体flow
‑
through中加入等体积的Buffer APP，震荡混匀，孵育。
[0027](b6)完成步骤(b5)后，离心，收集沉淀。
[0028](b7)完成步骤(b6)后，向沉淀中加入70％(v/v)乙醇水溶液，离心，收集沉淀。
[0029](b8)完成步骤(b7)后，将沉淀室温干燥，直至乙醇完全挥发。
[0030](b9)完成步骤(b8)后，向沉淀中加入BufferALO，溶解蛋白沉淀。
[0031](b10)完成步骤(b9)后，95℃孵育5min，完全溶解蛋白沉淀并使蛋白变性，然后冷却。
[0032](本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种共提取样本中total DNA、total RNA和总蛋白的方法，通过AllPrep DNA/RNA/Protein Mini Kit实现total DNA、总蛋白和>200nt的RNA片段的提取，其特征在于：所述方法还包括<200nt的RNA片段的提取；所述<200nt的RNA片段的提取包括如下步骤：(1)将进行总蛋白的提取时获得的flow
‑
through和BufferAPP混匀，孵育，收集上清；(2)用氯仿/异戊醇抽提步骤(1)收集的上清1次以上，并继续收集上清；(3)向步骤(2)收集的上清中的加入氯仿/异戊醇和糖原，混匀，收集沉淀；(4)将步骤(3)收集的沉淀依次进行清洗、干燥、溶解，得到<200nt的RNA片段；<200nt的RNA片段和>200nt的RNA片段共同组成total RNA。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，flow
‑
through和BufferAPP的体积为1:1。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述收集上清和收集沉淀的方式为离心。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述氯仿/异戊醇中，氯仿和异戊醇的体积比为24:1。5.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：周鑫兰，赵鑫，吴逵，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：