一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用制造技术

本发明专利技术涉及蛋白检测技术领域，具体涉及一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用。本发明专利技术提供的用于蛋白检测的封闭液包含十二烷基类化合物，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。本发明专利技术的封闭液具有封闭时间短、封闭效果好、背景和本底低、信噪比高、检测信号灵敏，适用检测实验广泛，且成本低等优势。且成本低等优势。

【技术实现步骤摘要】
一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用


[0001]本专利技术涉及蛋白检测
，尤其涉及一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用。

技术介绍

[0002]目前常用的蛋白检测技术，例如蛋白质印迹法（Western Blot）和酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）涉及目标蛋白与固相载体的结合，以及固相载体未与蛋白结合的空白位点的封闭步骤，封闭步骤通常采用封闭液进行。
[0003]以Western Blot为例，其是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种蛋白检测技术，通过将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相载体（例如NC膜或PVDF膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，并作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素等标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的蛋白成分。Western Blot已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个领域。
[0004]总蛋白质通过电转从凝胶转移到固相载体（例如NC膜或PVDF膜）上，蛋白以机械填补（堆积）和吸附的方式结合于固相载体表面。然而，吸附的蛋白并不是连续的，有很多空隙，这些空隙并没有填补蛋白，而抗体也是蛋白，也会被吸附在上述空隙里，导致非特异性信号的产生。因而需要采用封闭液来封闭所有未与目标蛋白结合的位点，从而避免固相载体与抗体或检测试剂发生交叉反应，降低非特异性吸附导致的结果干扰和误差。封闭液中的大分子物质可以与固相载体表面上的空白位置结合，以机械填补（堆积）和吸附覆盖的方式结合在固相载体表面，有效覆盖蛋白结合位点，避免样品中非特异性蛋白或者一抗结合到固相载体表面，导致检测蛋白/抗体与其非特异性结合，出现干扰背景。封闭液应封闭所有未结合位点而不影响固相载体表面的靶蛋白，同时也不结合靶蛋白表位、不与抗体或检测蛋白发生交叉反应，还可起到洗脱膜上杂蛋白的作用。
[0005]传统的封闭液中通常含有BSA、脱脂奶粉、明胶或酪蛋白，含动物源成分，封闭效果差、封闭时间过长、效率低，容易产生较多的杂带，对某些特殊要求的实验，会有严重的背景干扰，如：BSA和酪蛋白中均有少量抗体残留，会导致抗原/抗体之间的交叉反应，产生高背景，杂带较多或导致本底水平增高。脱脂奶粉中含有少量的生物素和碱性磷酸酶残留，在使用生物素亲和素系统和碱性磷酸酶标记的二抗时，也会导致高背景或本底水平增高。
[0006]现有技术中的无动物源成分封闭液多采用聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇等高聚物，封闭效果不佳、背景高、信噪比低，无法较好地显示出实验真实结果。因此，亟需开发具有较好封闭时间短且封闭效果好的封闭液。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用。
[0008]本专利技术在进行用于蛋白检测的封闭液的研发过程中意外地发现，特定的十二烷基
类化合物能够在不依赖于BSA、脱脂奶粉、明胶、酪蛋白等蛋白类物质存在的情况下，发挥封闭固相载体未与蛋白结合的空白位点的功能，具有较好的封闭效果和较高的封闭效率，能够在较短时间内对固相载体的空白位点进行高效封闭，显著降低蛋白检测的背景和本底水平，提高信噪比。
[0009]基于上述发现，本专利技术提供以下技术方案：第一方面，本专利技术提供十二烷基类化合物在制备用于蛋白检测的封闭液中的应用，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。
[0010]本专利技术中，用于蛋白检测的封闭液是指用于封闭蛋白检测用固相载体未与蛋白结合的空白位点的封闭液。
[0011]其中，蛋白检测可为任意涉及目标蛋白与固相载体结合的检测技术。固相载体包括包被板、能够吸附蛋白的膜材料（例如NC膜、PVDF膜、尼龙膜）等。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述蛋白检测为Western blot或ELISA。基于涉及目标蛋白与固相载体结合的不同蛋白检测技术在蛋白与固相载体结合的作用机理以及封闭液发挥封闭作用机理的相似性，本领域技术人员可以理解，本专利技术的封闭液适用的蛋白检测技术不局限于Western blot、ELISA。
[0013]本专利技术所述的十二烷基类化合物的分子式和结构式具体如下：月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠（C
12
H
26
Na2O5S）：
[0014]十二烷基硫酸钠（C
12
H
25
NaO4S）：
[0015]十二烷基磺酸钠（C
12
H
25
NaO3S）：
[0016]十二烷基肌氨酸钠（C
15
H
28
NO3Na）：
[0017]本专利技术所述的封闭液以上述十二烷基类化合物为主体，这些十二烷基类化合物分子呈中性，无特异性吸附，性质稳定，用于封闭蛋白检测的固相载体的封闭时间较BSA、脱脂奶粉等蛋白类物质更短，而且能够达到降低本底和背景且稳定封闭的效果。
[0018]本专利技术通过验证发现，十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中的任意一种或至少两种的混合物均能够发挥较好的封闭效果。因此，本专利技术中，十二烷基类化合物可选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种的混合物。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述十二烷基类化合物为十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠或月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中的任意两种、三种或四种。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述十二烷基类化合物为十二烷基肌氨酸钠和十二烷基磺酸钠、十二烷基磺酸钠和十二烷基硫酸钠、十二烷基肌氨酸钠和十二烷基磺酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠和十二烷基磺酸钠，或者为月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠和十二烷基肌氨酸钠。
[0022]在使用十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中的任意两种的组合时，两种十二烷基类化合物的浓度比为1：5
‑
5：1。
[0023]上述应用中，所述封闭液中，十二烷基类化合物的浓度优选为10
‑
60g/L，更优选为15
‑
50g/L。
[0024]第二方面，本专利技术提供十二烷基类化合物在封闭蛋白检测用固相载体未与蛋白结合的空白位点中的应用，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。
[0025]上述应用中，十二烷基类化合物在进行封闭时的使用浓度优选为10
‑
60g/L，更优选为15
‑
50g/L。
[0026]第本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.十二烷基类化合物在制备用于蛋白检测的封闭液中的应用，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述封闭液中，十二烷基类化合物的浓度为10
‑
60g/L。3.十二烷基类化合物在封闭蛋白检测用固相载体未与蛋白结合的空白位点中的应用，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。4.一种用于蛋白检测的封闭液，其特征在于，所述封闭液包含十二烷基类化合物，所述十二烷基类化合物为选自十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠中一种或多种。5.根据权利要求4所述的封闭液，其特征在于，所述封闭液中，十二烷基类化合物的浓度为10
‑
60g/L。6.根据权利要求4所述的封闭液，其特征在于，所述封闭液不包含蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭俊佩，赵海龙，王芳，魏彦辉，马玉岭，
申请(专利权)人：北京索莱宝科技有限公司，
类型：发明
国别省市：