一种可供冻存的细胞保存制剂制造技术

本发明专利技术提供一种可供冻存的细胞保存制剂，包括5.0％～10.0％(v/v)的丙三醇、0.1％

【技术实现步骤摘要】
一种可供冻存的细胞保存制剂


[0001]本专利技术属于细胞培养及保存领域，具体为一种可供冻存的细胞保存制剂。

技术介绍

[0002]随着对干细胞和免疫细胞功能作用的开发和疾病治疗的研究，干细胞或免疫细胞等活细胞的临床应用也日趋广泛。干细胞疗法是当今医学研究最前沿也是最热门的方向之一，不同来源的干细胞在国外已有上市药物，例如在加拿大和新西兰等地获得批准用于治疗儿童急性移植物抗宿主病的Prochymal，在韩国获批的用于治疗急性心梗的Hearticellgram
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AMI、用于治疗肛门瘘的Cupistem，以及用于治疗退行性关节炎和关节软骨损伤的Cartistem。细胞制剂经常涉及到到活细胞的长途运输，在运输过程中细胞活性下降快，细胞容易结团，因此，细胞在回输前的保存运输至关重要。因此细胞保存制剂需要既能保持活细胞的活率和稳定性，又能安全的用于人体静脉回输，是细胞治疗效果的关键。现有的细胞保存以冻存浓度的二甲基亚砜(DMS O)溶液冷冻保存细胞，另外还有以生理盐水、DMEM培养基作为主要成分的处方。
[0003](一)二甲基亚砜(DMSO)溶液冷冻保存细胞
[0004]目前最常用的细胞制剂类型主要是使用DMSO溶液冷冻保存，常用于免疫细胞药物，解冻后静脉注射给药。这种方法虽然可以保证细胞在保存和运输中的活力，预留充足的时间用于产品的质量检测以保证安全性，但仍有较大缺陷。冻存浓度的DMSO溶液(约10％)直接输注到血液等渗环境中，可导致注入的细胞显著吸收水分，使得细胞死亡率增加，缩短药物的半衰期，导致细胞药物的药效显著降低。另外，已有证据表明，DMSO对人体有一定毒性，最常见的是恶心、呕吐、高血压或低血压、镇静或头痛。高浓度或长期注射则会引起更严重的并发症，如心律失常，脑病，急性肾功能衰竭，支气管痉挛和神经系统疾病等。这种方式保存细胞对人体静脉回输存在安全问题。
[0005](二)生理盐水与白蛋白混合溶液保存细胞
[0006]采用生理盐水与白蛋白混合溶液保存细胞的方法，此种方式的制剂成分简单，不会对人体静脉回输造成不良反应，但是不能提供细胞必须的维持存活的营养成分，保存时间短，细胞在经长途运输之后，细胞活率很低，由于活细胞自身代谢活动，产生的自由基无法被清除，且代谢造成的制剂酸碱变化无法调节，进而导致细胞大量死亡，严重影响临床治疗效果。
[0007]故需要开发新的处方，满足细胞保存和临床使用的要求。

技术实现思路

[0008]本专利技术目的在于提供一种可供冻存的细胞保存制剂，针对上述缺点和问题进行改善，使得细胞制剂在回输前的较长时间内保持高活率，保证细胞制剂治疗效果的同时，对人体无毒副作用。此种细胞制剂处方安全性高、稳定性强，适于推广应用。
[0009]本专利技术技术方案如下：
[0010]本专利技术的第一个目的是提供一种可供冻存的细胞保存组合物，所述可供冻存的细胞保存组合物包括5.0％～10.0％(v/v)的丙三醇、0.1％
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3.4％(m/v)的琥珀酰明胶、小于1％(m/v)的泊洛沙姆188、1.0％
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10.0％(m/v)的羟乙基淀粉、1.0％～10.0％(m/v)的人血白蛋白，采用复方电解质注射液加至处方量。
[0011]进一步的，所述可供冻存的细胞保存组合物包括8.0％的丙三醇、3.0％的琥珀酰明胶、0.5％的泊洛沙姆188、5.0％的羟乙基淀粉、5.0％的人血白蛋白，采用复方电解质注射液加至处方量。
[0012]本专利技术的第二个目的是提供前述可供冻存的细胞保存组合物在制备细胞冻存制剂中的应用。
[0013]本专利技术的第三个目的是提供前述可供冻存的细胞保存组合物在提高或保持细胞保存和/或运输过程中细胞活率中的应用。
[0014]本专利技术技术方案相对于现有技术具有以下有益效果
[0015](一)更好的保持细胞活率
[0016]本专利技术的可供冻存的细胞保存组合物和细胞配制成制剂后，分装至冻存管，经程序降温后置于液氮保存，30天后细胞形态、细胞表面标志物正常、克隆形成率等检验结果均良好，细胞活率仍然维持在一个较高的水平。
[0017]细胞冻存30天后，复苏培养，细胞呈现干细胞的典型形态：梭形、旋涡状生长，细胞细长饱满，旋涡状明显，无生长空洞，未见明显的细胞损伤和老化现象。
[0018]细胞冻存30天后，细胞表面标志物符合《Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells.The International Society for Cellular Therapy position statement》(国际细胞治疗协会(ISCT)关于定义人间充质干细胞的最低标准)的相关规定，CD90、CD105和CD73分别为99.86％、98.65％和99.63％，而CD34、CD45、CD11b、CD19、HLA
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DR、CD31、CD326表达率≤2.0％。
[0019]细胞冻存30天后，细胞克隆形成率符合质量标准(≥10％)，其中复苏后直接检测克隆形成率为11％，施加一定外力(重悬清洗)后的克隆形成率为12％，展现出本专利技术对细胞冻存、复苏后的活性、抗性具有极佳的维持功能。
[0020]综上，本专利技术的细胞制剂能使细胞，例如人脐带间充质干细胞在保存和运输过程保持高细胞活率，提高细胞的外力抗性。
[0021](二)成分简单，安全性高，稳定性强
[0022]本专利技术的成分明确、简单，能够减少杂质种类，且均为药用级别，安全风险低。选择已上市药物和CDE备案状态为A(A代表该成分已用于上市药品。具有较高安全性)的原料药和辅料，与试剂相比，毒性小，在体内的安全性更高。本专利技术能给予细胞保持生存的必要营养，使得细胞制剂在回输前能较长时间内保持高活率。
[0023](三)给药方式简单
[0024]本专利技术是一种可供冻存的细胞保存制剂，安全性高、稳定性强，适用于不同的适应症。适用不同的注射方式，可以通过静脉注射或局部注射进行给药，适用广泛，适于推广应用。
附图说明
[0025]图1为冻存后的间充质干细胞的细胞形态。
[0026]图2为冻存后的间充质干细胞表面标志物阳性表型检测结果。
[0027]图3为冻存后的间充质干细胞非目标细胞阴性表型检测结果。
[0028]图4为细胞冻存效果对比。
具体实施方式
[0029]实施例1
[0030]一、可供冻存的细胞保存组合物组成：
[0031]本专利技术可供冻存的细胞保存组合物中含6类成分：丙三醇、泊洛沙姆188、人血白蛋白、羟乙基淀粉、琥珀酰明胶、复方电解质注射液，对于其他种类的细胞尤其是悬浮细胞，亦可增加适量维生素以提供细胞代谢辅酶。
[0032]二、配制方法：
[0033]表1冻存制剂处方成分表
[0034][0035][0036](1)本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可供冻存的细胞保存组合物，其特征在于，所述可供冻存的细胞保存组合物包括5.0％～10.0％(v/v)的丙三醇、0.1％
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3.4％(m/v)的琥珀酰明胶、小于1％的泊洛沙姆188(m/v)、1.0％
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10.0％(m/v)的羟乙基淀粉、1.0％～10.0％(m/v)的人血白蛋白，采用复方电解质注射液加至处方量。2.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：廉云飞，陆晓，张晓欢，
申请(专利权)人：江苏拓弘康恒医药有限公司，
类型：发明
国别省市：