一株高温嗜盐菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株高温嗜盐菌及其应用。所述高温嗜盐菌为LY02，其保藏编号为GDMCC No:63381。本发明专利技术的LY02不仅能适应高温环境（40℃），在高温环境下维持良好的细胞状态，保证细胞稳定性，而且能够在高温条件下高产PHA。本发明专利技术能够利用LY02在高温下进行开放式连续发酵过程中制备大量PHA，进一步降低开放式连续发酵过程中的染菌风险，具备巨大的工业应用潜力。具备巨大的工业应用潜力。具备巨大的工业应用潜力。

【技术实现步骤摘要】
一株高温嗜盐菌及其应用


[0001]本专利技术涉及工业微生物
，特别涉及一株高温嗜盐菌及其应用。

技术介绍

[0002]聚羟基脂肪酸酯（polyhydroxyalkanoates，PHA）是一类生物可降解塑料，许多微生物在碳、氮源失衡条件下以其作为细胞内的碳源和能源储存物。PHA具有生物可降解性。
[0003]现有技术中，微生物发酵是生物合成PHA的主要途径，由于传统工业生物技术存在灭菌成本高、高淡水消耗、不连续发酵易污染等缺点，导致其与化学工艺相比竞争力较低。
[0004]嗜盐菌具有天然合成PHA的优点。然而，在高产量的PHA生产过程中，传统的嗜盐菌在无法在高温环境中生产PHA。因此，目前亟需一株能够在高温条件下高产PHA的嗜盐菌株。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的缺陷，本专利技术提出了一株能够高温条件下高产PHA的嗜盐菌及其应用。
[0006]本专利技术提供一株高温嗜盐菌（）LY02，所述嗜盐菌的保藏编号为GDMCC No:63381。
[0007]本专利技术中使用的LY02菌株已于2023年4月23日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（简称GDMCC地址：广州市先列中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，邮编510070）。保藏号为GDMCC NO:63381。菌株名称为LY02，分类命名为。
[0008]进一步的，所述高温嗜盐菌的16S rDNA的序列如SEQ ID No.3所示。
[0009]本专利技术还提供所述的高温嗜盐菌在制备聚羟基脂肪酸酯中的应用。
[0010]进一步的，所述聚羟基脂肪酸酯为聚β
‑
羟基丁酸酯。
[0011]本专利技术还提供一种制备聚β
‑
羟基丁酸酯的方法，包括如下步骤：发酵所述的高温嗜盐菌，得到聚β
‑
羟基丁酸酯。
[0012]进一步的，发酵的过程为，将高温嗜盐菌（）LY02在培养基上进行菌株的纯化，然后进行一级、二级种子培养，之后接种于发酵培养基中培养。
[0013]进一步的，发酵温度为30~42℃；发酵pH为6.5~11；发酵时间为36~50 h。
[0014]进一步的，发酵使用的发酵培养基组分包括：葡萄糖35 g/L；氯化钠50 g/L，酵母粉1.2 g/L，尿素0.2~3 g/L，无水硫酸镁0.2 g/L，磷酸二氢钾1.5~5.5 g/L，Fe(III)
‑
NH4‑
Citrate 5 g/L、CaCl2·
2H2O 2 g/L、HCl 12 mol/L，ZnSO4·
7H2O 0.1 g/L，MnCl2·
4H2O 0.03 g/L，，CoCl2·
6H2O 0.2 g/L，CuSO4·
5H2O 0.01 g/L，NiCl2·
6H2O 0.02 g/L，NaMoO4·
2H2O 0.03 g/L。
[0015]进一步的，发酵使用的发酵培养基组分中葡萄糖：尿素为（25~35 g/L）：（0.5~1 g/L），优选为30 g/L：0.75 g/L。
[0016]进一步的，发酵使用的发酵培养基组分中磷元素浓度为0.6~2 g/L，优选为1.5 g/
L。
[0017]进一步的，发酵使用的发酵培养基组分中MgSO4浓度为0.05~0.3 g/L，优选为0.2 g/L。
[0018]进一步的，发酵使用的发酵培养基组分中酵母粉浓度为0~2 g/L，优选为1 g/L。
[0019]综上，与现有技术相比，本专利技术达到了以下技术效果：（1）嗜盐菌（）LY02在高温（40℃）下，细胞干重高，长势最好，能够在高温下保持良好的细胞状态。
[0020]（2）嗜盐菌（）LY02在高温（40℃）下，PHA产量高，能够在高温下高产PHA。
[0021]（3）本专利技术对（）LY02发酵合成PHA的条件进行优化，进一步提高PHA的产量。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0023]图1为本专利技术实施例1中LY02菌株的电镜图。
[0024]图2为本专利技术实施例1中LY02菌株与其他菌株16S rDNA序列对比的进化树。
具体实施方式
[0025]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0026]本专利技术第一部分比较不同菌株在40℃环境中的生长情况；第二部分对LY02的生长条件（碳源、氮源、P元素、Mg元素、酵母粉）进行筛选；
[0027]第三部分探究菌株天然合成PHA的含量。
[0028]LY02的培养条件：
[0029]60LB固体培养基：酵母粉3~10 g/L，胰蛋白胨6~20 g/L，氯化钠36~120 g/L，琼脂粉1~2%（w/v），pH 7~9；液体培养基：氯化钠40~60 g/L，酵母粉3~10 g/L，胰蛋白胨6~20 g/L，氢氧化钠调节培养基pH至8.0~10.5，培养基体积为150 mL（500 mL锥形瓶）；发酵培养基（50MM培养基）：葡萄糖35 g/L，氯化钠50 g/L，酵母粉1.2 g/L，尿素0.2~3 g/L，无水硫酸镁0.2 g/L，磷酸二氢钾1.5~5.5 g/L，Fe(III)
‑
NH4‑
Citrate 5 g/L，CaCl2·
2H2O 2 g/L，HCl 12 mol/L，ZnSO4·
7H2O 0.1 g/L，MnCl2·
4H2O 0.03 g/L，
，CoCl2·
6H2O 0.2 g/L，CuSO4·
5H2O 0.01 g/L，NiCl2·
6H2O 0.02 g/L，NaMoO4·
2H2O 0.03 g/L，NaOH调节培养基pH至6.5~11；
[0030]碳源：葡萄糖；碳源浓度：20~35 g/L；发酵温度：30~42℃；pH：6.5~11（采用5M NaOH调节）。
[0031]利用本专利技术的高温嗜盐菌生产PHA的方法如下：（1）将嗜盐菌（LY02）在固体培养基上单克隆培养，然后进行一级，二级种子培养，最后接入发酵培养基，持续发酵36~50 h。
[0032]（2）PHA细胞干重处理：将25~35 mL发酵后菌液置于50 mL离心管中，8000~9000 rpm室温下离心5~7 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株嗜盐菌（）LY02，其特征在于，所述嗜盐菌的保藏编号为GDMCC No:63381。2.根据权利要求1所述的嗜盐菌（）LY02，所述嗜盐菌的16S rDNA的序列如SEQ ID No.3所示。3.根据权利要求1或2所述的嗜盐菌在制备聚羟基脂肪酸酯中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述聚羟基脂肪酸酯为聚β
‑
羟基丁酸酯。5.一种制备聚β
‑
羟基丁酸酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：发酵权利要求1或2所述的嗜盐菌（）LY02，得到聚β
‑
羟基丁酸酯。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，发酵温度为30~42℃；发酵pH为6.5~11；发酵时间为36~50 h。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，发酵使用的发酵培养基组分包括：葡萄糖35 g/L；氯化钠50 g/L，酵母粉1.2 g/L，尿素0.2~3 g/L，无水硫酸镁0.2 g/L，磷酸二氢钾1...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶健文，吕金艳，司徒卫，余柳松，林艺娜，
申请(专利权)人：珠海麦得发生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：