流感嗜血杆菌疫苗和使用方法技术

本公开涉及包含选自由Omp26、P6、P4、PD和PF组成的组的两种或更多种流感嗜血杆菌(Hi)蛋白的全部或部分的融合蛋白，其中其Hi蛋白中的至少一种Hi蛋白包含脂质部分，并且涉及包含此类融合蛋白的疫苗和免疫原性组合物。还提供了治疗或预防受试者中与Hi感染相关联的疾病的方法。的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】流感嗜血杆菌疫苗和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年9月10日提交的美国临时专利申请号63/076,461的优先权，该申请据此全文以引用方式并入。


[0003]本公开属于流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)疫苗领域。
[0004]序列表以引用方式的并入
[0005]本申请包含计算机可读形式的序列表(文件名称：55894PCT_SeqListing.txt；83,018字节
–
ASCII文本文件；于2021年9月8日创建)，其全文以引用方式并入本文并且形成本公开的一部分。

技术介绍

[0006]流感嗜血杆菌(Hi)是一种革兰氏阴性球杆菌，并且是严格的人共生细菌。Hi菌株被包封在多糖胶囊中或未被包封，并因此被分类为可分型(包封)和不可分型(未包封)菌株。
[0007]多糖包封的Hi具有血清型a、b、c、d、e和f。在专利技术Hib疫苗之前，Hi包封的b型是侵入性Hi感染的主要原因。由于成本和施用挑战，Hib疫苗无法在世界范围内获得。近年来出现了侵入性Hi表达胶囊类型a、c、d、e和f。不可分型的流感嗜血杆菌(Hi)代表大部分定殖菌株，并且尽管很少是侵入性的，但导致显著比例的粘膜疾病，包括中耳炎、窦炎、慢性结膜炎和慢性下呼吸道感染或下呼吸道感染的恶化。目前，约30％和多达62％的Hi对青霉素具有抗性。据估计，儿童携带率为44％，并且成人携带率为约5％，并且可持续数月。由Hi引起的中耳炎的发病机制和宿主免疫应答均未完全确定。
[0008]中耳炎是小于2岁的儿童中的常见病。其定义为中耳中存在液体，伴有急性局部或全身疾病的病征。急性病征包括耳痛、耳流脓和听力丧失，而全身病征包括发热、嗜睡、易怒、厌食、呕吐或腹泻。肺炎链球菌和Hi是引起该病症的最主要的细菌，分别占培养菌种的25％
‑
50％和15％
‑
30％。此外，Hi导致53％的复发性中耳炎。约60％和80％的儿童分别在1岁和3岁时至少有一次疾病发作(峰值在10个月左右)。
[0009]不可分型的Hi是慢性支气管炎急性恶化(AECB)的最常见原因，并且来自慢性支气管炎患者的痰的新Hi菌株的存在使恶化的相对危险增加两倍(Sethi等人，N.Engl.J.Med.，第347卷，第464
‑
471页，2002年)。
[0010]细菌感染(包括Hi感染)也被发现与慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关联。(Albertson等人，J.Am.Geriat.Soc.，第58卷，第570
‑
579页，2010年)。COPD的综合征由慢性支气管炎(CB)、支气管扩张、肺气肿和可逆性气道疾病组成，其在个体患者中独特地组合。老年患者有患COPD及其并发症(肺气肿、慢性支气管炎(CB)和支气管扩张)的风险。细菌和病毒感染在没有COPD特征的情况下在COPD的急性恶化(AECOPD)和CB的急性恶化(AECB)中起作用。老年患者在AECOPD和AECB的发作期间有细菌感染(包括不可分型的Hi感染)的风险。
[0011]CB是特征在于慢性痰产生的进行性疾病，并且定义为在肺结核、肺癌和其他咳嗽原因消除后连续2年中每一年中至少3个月的咳嗽和痰(Balter等人，Can.Respir.J.，第10卷，第3B
‑
32B页，2003年；Bronton等人，Am.J.Manage Care，第10卷，第689
‑
696页，2004年)。据报道，大多数COPD患者出现CB(Balter，见上文)。AECB导致这些患者反复发作，伴有恶化的支气管炎症。
[0012]有证据表明确实存在对Hi的保护性免疫，然而在感染中天然涉及的表位(外膜蛋白P2、P4、P6)中的抗原漂移在Hi逃避宿主免疫防御的能力中起主要作用。

技术实现思路

[0013]在一个方面，本文描述了包含选自由Omp26、P6、P4、PD和PF组成的组的两种或更多种流感嗜血杆菌(Hi)蛋白的全部或部分的融合蛋白，其中Hi蛋白中的至少一种Hi蛋白是脂化的。在一些实施方案中，融合蛋白包含Omp26和P6，其中Omp26蛋白是脂化的。在一些实施方案中，融合蛋白包含Omp26和P6，其中P6蛋白是脂化的。在一些实施方案中，融合蛋白包含两种脂化的Hi蛋白。
[0014]在各种实施方案中，构建体是(SEQ ID NO:31)、LP6φOmp26(SEQ ID NO:29)、(SEQ ID NO:39)、NO:39)、(SEQ ID NO:40)、(SEQ ID NO:41)、NO:41)、(SEQ ID NO:42)、(SEQ ID NO:43)、NO:43)、(SEQ ID NO:44)或(SEQ ID NO:45)。示例性序列是粗体信号序列，下划线的接头。
[0015][0016]在各种实施方案中，融合蛋白可包含选自由以下组成的组的信号序列：SS1：天然P6信号序列，MNKFVKSLLVAGSVAALAAC(SEQ ID NO:36)；SS2：Pal蛋白的大肠杆菌(E.coli)天然信号序列，MQLNKVLKGLMIALPVMAIAAC(SEQ ID NO:37)以及SSP4：P4蛋白的流感嗜血杆菌
(H.influenzae)信号序列，MKTTLKMTALAALSAFVLAGC(SEQ ID NO:38)。可以想到，当信号序列用于融合蛋白序列中时，信号序列可以在C残基处被切割并且脂质部分被连接。
[0017]在一些实施方案中，至少一种Hi蛋白包含脂质部分，其包含C18、C16、C14、C12和C10脂肪酸中的一者或多者。在一些实施方案中，至少一种Hi蛋白包含选自二酰基和/或三酰基脂肪酸或它们的组合的脂质部分。在一些实施方案中，至少一种Hi蛋白包含选自N
‑
酰化或O
‑
酰化脂肪酸的脂质部分。在一些实施方案中，Hi蛋白在蛋白质的N末端处包含脂质部分。在一些实施方案中，融合蛋白中的两个Hi蛋白是脂化的。
[0018]在一些实施方案中，融合蛋白包含脂化Omp26和非脂化P6，其中脂质包含C16脂肪酸。在一些实施方案中，融合蛋白包含脂化P6和非脂化Omp26，其中脂质包含C16脂肪酸。
[0019]在一些实施方案中，Omp26包含SEQ ID NO:2中列出的氨基酸序列的全部或部分。在一些实施方案中，P6包含SEQ ID NO:4中列出的氨基酸序列的全部或部分。在一些实施方案中，P4蛋白包含SEQ ID NO:6中列出的氨基酸序列。在一些实施方案中，PD蛋白包含SEQ ID NO:8中列出的氨基酸序列。在一些实施方案中，PF蛋白包含SEQ ID NO:10中列出的氨基酸序列。
[0020]在各种实施方案中，融合蛋白任选地包含接头。在一些实施方案中，接头是肽接头。在一些实施方案中，肽接头是Gly
‑
Ser接头。在一些实施方案中，肽接头是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含选自由Omp26、P6、P4、PD和PF组成的组的两种或更多种流感嗜血杆菌(Hi)蛋白的全部或部分的融合蛋白，其中所述Hi蛋白中的至少一种Hi蛋白是脂化的。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其包含Omp26和P6，其中所述Omp26蛋白或其片段是脂化的。3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其包含Omp26和P6，其中所述P6蛋白或其片段是脂化的。4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述至少一种Hi蛋白包含选自C18、C16、C14、C12或C10脂肪酸的脂质部分。5.根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述至少一种Hi蛋白包含选自二酰基和/或三酰基脂肪酸的脂质部分。6.根据权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白，其中所述至少一种Hi蛋白包含选自N
‑
酰化或O
‑
酰化脂肪酸的脂质部分。7.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白中的两种Hi蛋白是脂化的。8.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其包含脂化Omp26和非脂化P6，其中所述脂质包含C16脂肪酸。9.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其包含脂化P6和非脂化Omp26，其中所述脂质是C16脂肪酸。10.根据权利要求1至9中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白选自由以下组成的组：(SEQ ID NO:31)、LP6φOmp26(SEQ ID NO:29)、(SEQ ID NO:39)、NO:39)、(SEQ ID NO:40)、(SEQ ID NO:41)、NO:41)、(SEQ ID NO:42)、(SEQ ID NO:43)、NO:43)、(SEQ ID NO:44)或(SEQ ID NO:45)。11.根据权利要求8至10中任一项所述的融合蛋白，其中Omp26包含SEQ ID NO:2中列出的氨基酸序列的全部或部分。12.根据权利要求8至10中任一项所述的融合蛋白，其中P6包含SEQID NO:4中列出的氨基酸序列的全部或部分。13.根据权利要求1至12中任一项所述的融合蛋白，其中所述至少一种Hi蛋白在所述蛋白质的N末端处包含脂质部分。14.根据权利要求1至13中任一项所述的融合蛋白，其中所述Hi蛋白通过肽接头连接。15.根据权利要求14所述的融合蛋白，其中所述肽接头是GlySerGlyGlyGlyGly(SEQ ID NO:12)。16.根据权利要求1至15中任一项所述的融合蛋白，其包含SEQ ID NO:29或31中列出的氨基酸序列。17.根据权利要求1至16中任一项所述的融合蛋白，还包含药学上可接受的载体或赋形剂。18.一种包含根据权利要求1至17中任一项所述的融合蛋白的疫苗。
19.根据权利要求18所述的疫苗，其中所述疫苗中的所述融合蛋白引发针对脂化Hi蛋白和至少一种非脂化Hi蛋白的抗体应答。20.根据权利要求18或权利要求19所述的疫苗，其中所述疫苗中至少10％的所述融合蛋白包含二酰基脂肪酸。21.根据权利要求18至20中任一项所述的疫苗，其中所述疫苗中至少10％的所述融合蛋白包含三酰基脂肪酸。22.一种包含根据权利要求1至17中任一项所述的融合蛋白的免疫原性组合物。23.根据权利要求22所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物中至少10％的所述融合蛋白包含二酰基脂肪酸。24.根据权利要求22或权利要求23所述的免疫原性组合物，其中所述免疫原性组合物中至少10％的所述融合蛋白包含三酰基脂肪酸。25.一种治疗或预防受试者中与流感嗜血杆菌(Hi)感染相关联的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求18至20中任一项所述的疫苗或根据权利要求22至24中任一项所述的免疫原性组合物。26.根据权利要求25所述的方法，其中与Hi感染相关联的所述疾病是中耳炎、支气管炎、肺炎、窦炎、败血病、心内膜炎、会厌炎、脓毒性关节炎、脑膜炎、产后和新生儿感染、产后和新生儿败血症、急性和慢性输卵管炎、会厌、心包炎、蜂窝组织炎、骨髄炎、心内膜炎、胆囊炎、腹内感染、尿路感染、乳突炎、主动脉移植感染、结膜炎、巴西紫癜性热、隐匿性菌血症、以及潜在肺疾病诸如慢性支气管炎、支气管扩张或囊性纤维化的恶化、慢性阻塞性肺疾病(COPD)和COPD的急性恶化(AECOPD)。27.根据权利要求25或权利要求26所述的方法，其中所述疫苗或所述免疫原性组合物通过口服、静脉内给药、肌内给药、鼻内给药或皮下给药施用。28.根据权利要求25至27中任一项所述的方法，其中所述疫苗或所述免疫原性组合物减少或防止在窦、肺和耳中的一者或多者中的定殖。29.根据权利要求25至28中任一项所述的方法，其中所述疫苗或所述免疫原性组合物包含或LP6φOmp26。30.一种制备包含选自由Omp26、P6、P4、PD和PF组成的组的两种或更多种流感嗜血杆菌(Hi)蛋白的全部或部分的融合蛋白的方法，其中所述Hi蛋白中的至少一种Hi蛋白是脂化的，所述方法包括：i)将在编码流感嗜血杆菌(Hi)蛋白Omp26、P6、P4、PD或PF的全部或部分的第一核酸的上游的编码脂质部分信号序列区的核酸插入质粒载体中；ii)将编码流感嗜血杆菌(Hi)蛋白Omp26、P6、P4、PD或PF的全部或部分的第二核酸插入所述质粒载体中；iii)任选地插入编码选自由Omp26、P6、P4、PD和PF...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：罗切斯特综合医院，
类型：发明
国别省市：