一种宫颈细胞基因甲基化检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及生物医学检验技术领域，具体涉及一种宫颈细胞基因甲基化检测试剂盒及检测方法。本发明专利技术通过检测样本中MTHFR、PAX1、SGSH三基因的启动子区域甲基化水平，用于判断样本是否发生癌前病变，其操作方便简易，检测灵敏度高，特异性好，对宫颈癌的检测具有十分积极的意义。的意义。的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种宫颈细胞基因甲基化检测试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术涉及生物医学检验
，具体涉及一种基于荧光定量PCR技术的宫颈细胞基因甲基化检测试剂盒及检测方法。

技术介绍

[0002]在我国，子宫颈癌是威胁女性健康常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率居于第二位。2018年全球新发子宫颈癌 病例超过56.9万例，死亡病例超过31.1万例。其中85%的病例发生于发展中国家。我国2015年约有新发病例11.1万，死亡病例 3.4万。我国子宫颈癌死亡分布情况总体上农村略高于城市，中西部地区约为东部地区的两倍。我国子宫颈癌患者中位发病年龄是51 岁，但主要好发于2个年龄段，以40～50岁为最多，60～70岁又有一高峰出现，20岁以前少见。然而值得关注的是近年来子宫颈癌的平均发病年龄在逐渐降低，有年轻化趋势。因此，十分有必要在全国范围内规范宫颈癌的诊断与治疗。另一方面，宫颈癌的发生可通过对癌前病变的检查和处理得以有效控制。
[0003]目前临床上所用的细胞学TCT及病毒学HPV检测存在局限性，无法完全满足临床需求。宫颈癌基因甲基化检测具有高本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种宫颈细胞基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，试剂盒内包括：用于检测MTHFR基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的MTHFR PCR反应液；用于检测PAX1基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的PAX1 PCR反应液；用于检测SGSH基因启动子区域中至少一个靶区域内的甲基化程度的SGSH PCR反应液； 还包括阳性对照品和阴性对照品；所述启动子区域并非严格限定为位于启动子片段内的区域，而是启动子附近区域的基因片段。2.根据权利要求1所述的一种宫颈细胞基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述的MTHFR PCR反应液包括MTHFR正、反向引物，MTHFR探针，内参ACTB正、反向引物，内参ACTB探针；所述的PAX1 PCR反应液包括PAX1正、反向引物，PAX1探针，内参ACTB正、反向引物；内参ACTB探针；所述的SGSH PCR反应液包括SGSH正、反向引物，SGSH探针，内参ACTB正、反向引物，内参ACTB探针。3.根据权利要求2所述的一种宫颈细胞基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述的MTHFR、PAX1、SGSH PCR反应液中，还包括10
×
缓冲液，10mM dNTP混合液和酶混合液，所述的酶混合液包括Taq酶和UNG酶，所述的Taq酶为热启动Taq酶，所述的UNG酶为尿嘧啶
‑
N
‑
糖基化酶。4.根据权利要求2所述的一种宫颈细胞基因甲基化检测试剂盒，其特征在于，所述MTHFR正向引物的碱基序列为tcggtttttattggtcgcgg（SEQ ID No .1），THFR反向引物的碱基序列为tacctcgaaacaaaacgc（SEQ ID No .2），MTHFR探针的碱基序列为accgcgaaaccaac（SEQ ID No .3）；所述的PAX1正向引物的碱基序列为tcgacgttgtagtttttcggttagacgaat（SEQ ID No .4），PAX1反向引物的碱基序列为tacccctccaaaacctcccac（SEQ ID No .5），PAX1探针的碱基序列为cccgaccccaacccaaataacttcat（SEQ ID No .6）；所述SGSH正向引物的碱基序列为gtttcgcgtcgcgttt（SEQ ID No .7），SGSH反向引物的碱基序列为acgacgacgaaccacc（SEQ ID No .8），SGS...

【专利技术属性】
技术研发人员：张炳强，陈梦梦，于俊梅，周阳，孙允东，赵云雪，韩丽辉，刘世利，栾延松，
申请(专利权)人：青岛瑞思德医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：