一种少突胶质细胞瘤的恶变标志物及其应用制造技术

本申请涉及生物标志物技术领域，具体公开了一种少突胶质细胞瘤的恶变标志物及其应用。所述生物标志物为人活化t

【技术实现步骤摘要】
一种少突胶质细胞瘤的恶变标志物及其应用


[0001]本申请涉及生物标志物
，尤其是涉及一种少突胶质细胞瘤的恶变标志物及其应用。

技术介绍

[0002]少突胶质细胞瘤(oligodendrogliomas，OG)是低级别胶质瘤(Low
‑
grade gliomas,LGG)的一种，少突胶质细胞瘤发病率在我国占了全部成人脑肿瘤的20％。少突胶质细胞瘤由于预后较好，生存期长，所以在研究上一直不够重视。尽管各种治疗方式能不同程度延长患者的无进展生存期，但很大比例的少突胶质细胞瘤患者最后会发展为恶性度更高的胶质瘤，这是造成患者死亡的主要原因。探寻少突胶质细胞瘤的发生及恶变的原因并找到更有效的解决方法迫切而有现实意义。
[0003]目前，成人低级别胶质瘤中的成人少突胶质细胞瘤是以isocitrate dehydrogenase(IDH1/2)突变联合1p/19q缺失和端粒酶逆转录酶启动子突变发生(1,2)，但少突胶质细胞瘤发展为高级别胶质瘤的恶变机制和标志物尚不明确。
[0004]1.Louis DN,Perry A,Reifenberger G,von Deimling A,Figarella
‑
Branger D,Cavenee WK,et al.The 2016 World Health Organization Classification of Tumors of the Central Nervous System:a summary.Acta Neuropathol.2016；131(6):803
‑
20.
[0005]2.Bready D,Placantonakis DG.Molecular Pathogenesis of Low
‑
Grade Glioma.Neurosurg Clin N Am.2019；30(1):17
‑
25.

技术实现思路

[0006]本申请的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种少突胶质细胞瘤的恶变标志物及其应用。
[0007]为实现上述目的，本申请采取的技术方案为：
[0008]第一目的，本申请提供了一种生物标志物在制备检测或预后少突胶质细胞瘤恶变产品中的应用，所述生物标志物为NFATc3。
[0009]本申请经过大量实验，发现一个针对少突胶质细胞瘤的恶变的标志物NFATc3，以此可以更加快速并且准确的在疾病早期进行治疗，防止其发展为恶性程度更高的胶质瘤。
[0010]本申请利用脑肿瘤原位杂交动物模型(patient
‑
derived orthotopic xenograft，PDOX)技术，将收集到的OG临床样本来源的肿瘤细胞移植到原位的小鼠大脑中，成功建立了OG原位小鼠模型并成功分离出了子代肿瘤细胞并再次移植到下一代小鼠大脑中直至三代，为稳定的OG的脑肿瘤原位杂交动物模型，利用此模型阐明了少突胶质细胞瘤向高级别胶质瘤恶变的一系列相关分子机制并提出可行的临床治疗方案。同时，结合53例不同分期的原发少突胶质细胞瘤的RNA
‑
Seq的分析结果，发现NFATc3在少突胶质细胞瘤中高表达，有文献报导NFATc3通过调节星形胶质瘤细胞的增殖和迁移来控制肿瘤的生长，NFATc3也涉及血管新生的基因的转录，与血管新生能力呈正相关。以此，确定NFATc3为少突
胶质细胞瘤恶变标志物。
[0011]作为本申请所述应用的优选实施方式，所述NFATc3在少突胶质细胞瘤中高表达，与少突胶质细胞瘤的恶性程度呈正相关。
[0012]经过分离原发OG及恶变OG肿瘤的RNA
‑
Seq分析，结合TCGA数据库发现NFATc3在OG及复发恶变OG细胞株中高表达。用Western Blot于蛋白水平进行验证，NFATc3在复发恶变OG细胞株中高表达。用PCR于mRNA进行验证，NFATc3在复发恶变OG细胞株中高表达。经TCGA数据库分析NFATc3在LGG病人组表达较正常对照组更高。经TCGA数据库分析NFATc3表达量与LGG患者预后的关系，NFATc3高表达患者的总生存率低于NFATc3低表达患者。
[0013]作为本申请所述应用的优选实施方式，所述产品为试剂盒或芯片，所述试剂盒或芯片包括用于检测所述生物标志物表达量的试剂。
[0014]检测NFATc3的表达量可以预测或预后少突胶质细胞瘤是否发生恶变，从而进一步提供治疗手段。
[0015]作为本申请所述应用的优选实施方式，所述试剂为引物，所述引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:1～2所示；
[0016]SEQ ID NO:1：5
′‑
GGTGGTCCCAAACCCTTTGAG
‑3′
；
[0017]SEQ ID NO:2：5
′‑
AAAAATTCCCGTTCTGGGTCAT
‑3′
。
[0018]作为本申请所述应用的优选实施方式，所述NFATc3通过激活MMP14基因的启动子，并与MMP14(Matrix metalloproteinases 14)基因的启动子结合，调节少突胶质细胞瘤恶变中的血管新生。
[0019]第二目的，本申请提供了激活MMP14基因的启动子的NFATc3在制备介导少突胶质细胞瘤血管新生促肿瘤恶变试剂中的应用。
[0020]第三目的，本申请提供了敲低NFATc3的试剂在制备抑制少突胶质细胞瘤恶变药物中的应用。
[0021]作为本申请所述应用的优选实施方式，所述敲低NFATc3的试剂为Entranster
‑
R4000。
[0022]EntransterTM
‑
R4000能做到高达90％的转染效率和60
‑
90％的沉默效率，对难转染细胞和原代细胞也非常适用。
[0023]本申请在敲低NFATc3的少突胶质细胞瘤中筛选出血管新生相关因子MMP14及VEGFA，并通过实验验证发现MMP14和VEGFA受到NFATc3的调节。
[0024]本申请通过克隆MMP14的启动子区域，通过酶切连接构建pGL3
‑
MMP14质粒并测序鉴定。并加入转录因子NFATc3，并用荧光报告素酶分别检测荧光素的表达，确认NFATc3可以激活MMP14基因的启动子。CHIP结果显示，加入转录因子NFATc3抗体后可以特异地沉淀基因组DNA，通过PCR反应可以特异性扩增出基因MMP14启动子上的目的片段，而加入IgG的阴性对照未扩增出相应条带。此实验结果在细胞内证实了转录因子NFATc3与基因MMP14启动子区发生了结合，证明转录因子NFATc3与基因MMP14启动子区发生了结合，因此，本申请的NFATc3可以调节血管新生在少突胶质细胞瘤恶变中的信号通路。
[0025]第四目的，本申请提供了一种用于检测或预后少突本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物标志物在制备检测或预后少突胶质细胞瘤恶变产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为NFATc3。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述NFATc3在少突胶质细胞瘤中高表达，与少突胶质细胞瘤的恶性程度呈正相关。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂盒或芯片，所述试剂盒或芯片包括用于检测所述生物标志物表达量的试剂。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂为引物，所述引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:1～2所示；SEQ ID NO:1：5
′‑
GGTGGTCCCAAACCCTTTGAG
‑3′
；SEQ ID NO:2：5
′‑

【专利技术属性】
技术研发人员：齐琳，张幸鼎，刘子譞，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：