一种检测外泌体lncRNA的试剂在制备检测肾损伤的诊断剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测外泌体lncRNA的试剂在制备检测肾损伤的诊断剂中的应用，其中，所述lncRNA包括NONCODE TRANSCRIPT ID为NONRATT004088.2的lncRNA。本发明专利技术公开了能够将lncRNA应用于肾损伤生物标志物的制备，尤其是用来检测外源性化合物（例如庆大霉素硫酸盐）引起的肾损伤，检测的敏感度高且检测方法和试剂简单，能够被广泛应用于检测药物性肾损伤，其检测结果可靠，可以单独检测或者联合其他指标共同评价肾损伤。他指标共同评价肾损伤。他指标共同评价肾损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种检测外泌体lncRNA的试剂在制备检测肾损伤的诊断剂中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测外泌体lncRNA的试剂在制备检测肾损伤的诊断剂中的用途。

技术介绍

[0002]药物诱导的肾损伤是目前导致药物开发失败或者市售药品撤市的主要因素之一。肾脏容易受到药物损伤，原因如下：1）肾脏接受20
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25%的静息心输出量，这使其比其他器官系统暴露于更多的循环药物，2）肾小管浓缩滤液，从而暴露于更高浓度的药物，3）转运体可进一步增加药物的细胞内浓度，4）肾小管具有较高的能量需求，使其容易受到肾毒性损伤。因此，药物引起的肾损伤在药物开发过程中很常见。不幸的是，传统的肾损伤血清标志物，如肌酐或尿素氮等，敏感性或特异性不高。比如肌酐的测定受非肌酐物质的影响，包括葡萄糖、尿酸、酮体、血红蛋白等，这可能导致血清肌酐值出现假阳性升高。血清肌酐还可能因独立于肾功能的非肾性因素而改变，如年龄、性别、肌肉质量、营养状况等。摄入肌酸补充剂或熟肉可导致血清肌酐升高，限制蛋白质饮食可导致血清肌酐降低。剧烈运动可以通过增加肌肉分解增加肌酐。此外，血清肌酐对肾脏储备的丧失不敏感，一个肾脏丧失或捐赠后，血清肌酐变化很小。BUN也会被非肾因素改变，如蛋白质摄入、分解代谢状态、上消化道出血、血容量状态等。
[0003]为了解决传统生物标志物灵敏性和特异性不足的问题，预测安全测试联盟（PSTC）组织了药物诱导肾损伤生物标志物研究，PSTC肾毒性工作组向FDA和欧洲药品管理局（EMEA）提交药物毒性研究和生物标志物性能分析后，7种肾脏损伤生物标志物已被限定用于非临床和临床药物开发，以帮助指导安全性评估。肾损伤分子
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1（KIM
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1）、白蛋白、总蛋白、B2M、Clusterin、TFF
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3和胱抑素C被FDA和EMEA视为高度敏感和特异的尿生物标志物，用于在临床前研究和临床试验中监测药物诱导的肾损伤。然而，上述肾脏生物标志物均是在脏器出现损伤后才会有较明显的升高，进而达到诊断损伤的作用，但是，有时损伤较重时可能导致非常严重事件发生，尤其是对于心肌损伤而言，很多损伤是不可逆的，因此探索新的灵敏度和特异性更高，且能早期发现肾脏损伤的生物标志物尤为关键。
[0004]外泌体是细胞外囊泡的一种，细胞外囊泡分为三种：凋亡小体、微泡和外泌体。外泌体的产生过程涉及质膜的双重内陷和含有腔内小泡（ILV）的细胞内多泡体（MVB）的形成。ILV最终通过MVB融合到质膜，经过胞吐作用，以直径为40~160nm的外泌体形式分泌。外泌体的密度为1.15
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1.19 g/mL。在其表面发现的四聚体跨膜蛋白CD63、CD9和CD81通常作为外泌体的表面生物标志物。同时，大多数细胞可分泌外泌体，它广泛存在于各种体液中，如血液、唾液、尿液、脑脊液等。外泌体将各种分子从亲代细胞运送到其他细胞，包括蛋白质、DNA、mRNA/miRNA、lncRNA等。外泌体的组成类似于亲代细胞，因此能够提供可追踪的亲本细胞的特异信息。扫描电子显微镜（SEM）、透射电子显微镜、动态光散射和纳米粒子跟踪分析广泛用于测量外泌体的物理特征，如囊泡的大小、分布和浓度。
[0005]长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度超过200个核糖核苷酸的缺乏开放阅读框的非编码RNA分子，没有编码蛋白质的能力，或者编码功能有限。最初发现时被认为是基因组转录的“噪音”，是RNA聚合酶Ⅱ转录的副产物，没有生物学作用。经过深入研究发现，lncRNA在细胞中参与了重要的调控过程，如：调节细胞分化、衰老、增殖、凋亡、坏死以及肿瘤的发生发展。研究发现，尽管与信使RNA相比，lncRNA比较倾向于以低水平表达，但是lncRNA表达比mRNA表达更具有细胞特异性，表明lncRNA可能是细胞命运的关键调节因子。同时有研究显示，lncRNA与肾脏相关疾病和损伤密切相关。但lncRNA数据库非常庞大（迄今共有172,216个），临床检测上尚未开发出与肾损伤尤其是外源性化合物（例如庆大霉素硫酸盐）引起的肾损伤密切相关的lncRNA。
[0006]目前已有大量研究报道，在病理条件下，许多外泌体lncRNA的表达水平与正常对照组显著不同，表明外泌体可以选择性地包装、分泌和运输lncRNA，并特异性地发挥生物学功能。外泌体可以保护lncRNA免受RNA酶的降解，因此它们可以稳定地存在于体液中。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术中药物性肾损伤生物标志物存在敏感度不高、检测方法过于复杂、试剂昂贵、需要联合其他指标共同评价肾损伤以及不能及时准确地预测药物性肾损伤等缺陷，提供了一种外泌体来源的长链非编码RNA（lncRNA）在制备检测肾损伤诊断剂中的用途及含其的试剂盒，以及检测外泌体来源的长链非编码RNA（lncRNA）的试剂在制备检测肾损伤诊断剂中的用途，及包含所述试剂的试剂盒或芯片的应用。所述的用途能够将lncRNA作为肾损伤生物标志物，尤其是用来检测外源性化合物（例如庆大霉素硫酸盐）引起的肾损伤，检测的敏感度高且检测方法和试剂简单，能够被广泛应用于及时检测药物性肾损伤，能在早期及时发现药物性肾损伤，其检测结果可靠，可以单独检测或者联合其他指标共同评价肾损伤。
[0008]本专利技术人对肾损伤进行长期研究，并经过大量实验，意外地发现一些外泌体来源的lncRNA可以作为外源性化合物（例如庆大霉素硫酸盐）引起的药物性肾损伤的特异性的生物标志物，在外源性化合物引起的药物性肾损伤的血浆中高表达，能够发挥其在制备肾损伤生物标志物中用途，从而检测由外源性化合物引起的肾损伤。
[0009]为了解决上述技术问题，本专利技术的一方面提供了一种血浆来源的外泌体lncRNA在制备检测肾损伤的诊断剂中的应用，所述lncRNA包括NONCODE TRANSCRIPT ID为NONRATT004088.2的lncRNA。
[0010]在某些实施方案中，所述lncRNA作为唯一的肾损伤的生物标志物，或者所述lncRNA和常规的肾损伤的生物标志物联合使用。
[0011]在某些实施方案中，所述常规的肾损伤的生物标志物选自血清肌酐（CREA）、尿素氮（BUN）、肾损伤分子
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1（Kim
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1）。
[0012]在某些实施方案中，所述生物标志物通过检测样本中所述lncRNA的转录水平来定性和/或定量。
[0013]按照本领域常规，本专利技术所述转录水平的检测可以为RNA全转录组测序、实时荧光定量PCR检测或表达谱芯片。
[0014]在某些实施方案中，所述检测使用RNA全转录组测序；和/或，所述样本为血浆。
[0015]在某些实施方案中，所述肾损伤为外源性化合物引起的肾损伤。
[0016]在某些实施方案中，所述外源性化合物是庆大霉素硫酸盐。
[0017]本专利技术的另一方面提供一种试剂盒，所述试剂盒包括检测lncRNA的试剂；所述lncRNA包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测外泌体lncRNA的试剂在制备检测肾损伤的诊断剂中的应用，其特征在于，所述lncRNA包括NONCODE TRANSCRIPT ID为NONRATT004088.2的lncRNA，所述肾损伤为庆大霉素硫酸盐引起的肾损伤。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述lncRNA作为唯一的肾损伤的生物标志物，或者所述lncRNA和常规的肾损伤的生物标志物联合使用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述常规的检测肾损伤生物标志物选自血清肌酐、尿素氮、肾损伤分子
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1中的至少一个。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测生物标志物通过样本中所述lncRNA的转录水平来定性和/或定量。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测使用RNA全转录组测序；和/或，所述样本为血浆。6. 如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂为特异性扩增所述外泌体lncRNA的引物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示。7.一种试剂盒在制备用于检测肾损伤的产品中的应用，其特征在于，所述肾损伤为庆大霉素硫酸盐引起的肾损伤，所述试剂盒包括如权利要求1
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6任一项中所定义的检测外泌体lncRNA的试剂。8.一种芯片在制备用于检测肾损伤的产品中的应用，其特征在于，所述肾损伤为庆大霉素硫酸盐引起的肾损伤，所述芯片上设置如权利要求1
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6任一项中所定义的检测外泌体lncRNA的试剂。9.一种用于肾损伤风险的预测系统，其特征在于，所述预测系统包括检测模块和分析判断模块；所述检测模块检测待测样本...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤纳平，郑敏慧，杨紫轩，石磊，赵利媛，顾梦芸，卢言新，尤延飞，
申请(专利权)人：上海益诺思生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：