【技术实现步骤摘要】
一株产己二酸的重组大肠杆菌的构建及其应用
[0001]本专利技术涉及一株产己二酸的重组大肠杆菌的构建及其应用,属于生物
技术介绍
[0002]己二酸别名肥酸,是一种重要的有机二元酸。白色结晶体,结构式为HOOC(CH2)4COOH。能够发生成盐反应、酯化反应、酰胺化反应等,特别是能与二元胺或二元醇缩聚形成高分子聚合物。
[0003]己二酸最重要的应用价值主要体现在其可作为尼龙6,6的关键前体。例如,尼龙6,6纤维和树脂的生产是由己二酸与乙二胺缩合反应而成;聚氨酯类树脂和发泡塑料的化学生产需要己二酸作为前体与多元醇缩合而成。此外,己二酸也可作为化工原料和中间体,用于杀虫剂、粘合剂、增塑剂、润滑剂、合成革、合成染料、香料以及食品添加剂等的生产。
[0004]利用化学合成法是当前工业生产己二酸的主要方法。美国杜邦公司首创化学生产己二酸的方法,又在原有生产工艺的基础上进一步改进,逐步用环己烷氧化法取代原有生产方法进行己二酸的大规模生产。化学合成法合成己二酸的反应条件为高温加压以及强酸强碱,反应过程较为恶劣。同时,生产原料和中间产物不够安全环保,对人体有明显的危害。生产过程中的一氧化氮和二氧化氮等气体会造成严重的环境污染。在日益重视环境保护的时代背景下,利用苯或环己烷等传统化工原料生产己二酸已经不能完全满足时代发展对环保经济的需要。因此,探索一种己二酸的绿色生产方法具有重要的研究意义。
[0005]通过化学加氢方法,顺,顺
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粘康酸很容易转化为己二酸。利用生物酶催化法也有报道 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种产己二酸的重组大肠杆菌,其特征在于:所述重组大肠杆菌敲除了3
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脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE、负调控转录抑制因子tyrR、乙酸激酶基因ackA、丙酮酸脱氢酶基因poxB和奎尼酸脱氢酶基因YdiB,过表达了DHQ合酶基因aroB、3
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脱氢奎尼酸脱水酶基因aroD、3
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脱氧
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D
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阿拉伯庚酮糖
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磷酸合成酶基因aroG
FBR
、磷酸烯醇式丙酮酸合酶基因ppsA、转酮醇酶基因tktA、转醛缩酶基因talA、烯酸还原酶基因GsQOR和葡萄糖脱氢酶基因gdh,且所述烯酸还原酶基因GsQOR和葡萄糖脱氢酶基因gdh由含有SEQ ID NO.7
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9所示的RBS序列调控表达。2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于:所述重组大肠杆菌还过表达了3
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脱氢莽草酸脱水酶基因aroZ、原儿茶酸脱羧酶基因aroY和儿茶酚1,2
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双加氧酶基因catA。3.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于:以E.coli MG1655为出发菌株。4.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于:所述3
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脱氢莽草酸脱水酶基因aroZ的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,原儿茶酸脱羧酶基因aroY的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,儿茶酚1,2
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双加氧酶基因catA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,烯酸还原酶基因GsQOR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示,3
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脱氧
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D
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阿拉伯庚酮糖
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磷酸合成酶基因aroG
FBR
的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示,葡萄糖脱氢酶基因gdh的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示,磷酸烯醇式丙酮酸合酶基因ppsA的NCBI编号为NP_416217.1,转酮醇酶基因tktA的NCBI编号为YP_026188.1,转醛醇酶基因talA的NCBI编号为NP_414549.1,DHQ合酶基因aroB的NCBI编号为NP_417848.1,3
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脱氢奎尼酸脱水酶的基因aroD的NCBI编号为NP_416208.1。5.权利要求1
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4任一项所述的重组大肠杆菌的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、敲除3
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脱氢莽草酸脱氢酶基因aroE,敲除负调控转录抑制因子tyrR并在该位点过表达DHQ合酶aroB和3
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脱氢奎尼酸脱水酶aroD,敲除乙酸激酶基因ackA并在该位点过表达3
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脱氧
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D
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阿拉伯庚酮糖
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【专利技术属性】
技术研发人员:刘立明,袁炜佳,高聪,陈修来,刘佳,李晓敏,宋伟,魏婉清,吴静,
申请(专利权)人:江南大学,
类型:发明
国别省市:
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