一种从植物甘草中分离提取甘草西定的方法技术

本发明专利技术公开了一种从植物甘草中分离提取甘草西定的方法，包括步骤为：甘草渣水提后乙醇浸泡浓缩；浓缩液上大孔树脂柱进行吸附后，浓缩洗脱液获得黄酮粗品粉末；使用溶剂Ⅰ和溶剂Ⅱ处理黄酮粗品粉末，搅拌得到浑浊液，过滤，加热滤液以挥发溶剂Ⅰ，然后将滤液以1～3℃/min的速度降温至低温条件，待结晶完全，过滤得到甘草西定产品。加热温度为30℃～60℃，溶剂Ⅰ与溶剂Ⅱ比例为1:2～1:15。本发明专利技术为一种工艺条件简单、设备要求低、用料成本低、产品质量高、易于工业化的高纯度甘草西定分离提取方法。法。法。

【技术实现步骤摘要】
一种从植物甘草中分离提取甘草西定的方法


[0001]本专利技术涉及植物天然活性物质分离纯化
，具体为一种从植物甘草中分离提取黄酮化合物甘草西定的方法。

技术介绍

[0002]甘草西定(Licoricidin)是甘草中的一种黄酮类活性成分，分子式为C
26
H
32
O5，分子量为424.53，结构式如下：
[0003][0004]研究表明，甘草西定对牙龈卟啉菌、变异链球菌等口腔疾病病原菌表现出显著抗菌活性，同时对口腔上皮细胞和牙龈成纤维细胞没有明显的细胞毒性；甘草西定可显著清除ABTS自由基(2,2
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联氮
‑
二(3
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乙基
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苯并噻唑
‑6‑
磺酸)二铵盐)和ROS自由基(活性氧)；甘草西定具有治疗特征性皮炎和牙周炎的潜力。不仅如此，甘草西定还能够抑制小鼠乳腺癌细胞、人前列腺癌细胞、人结直肠腺癌细胞的迁移和表达。最新研究发现，它通过激活cAmp
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PKA信号通路促进能量消耗，诱导白色脂肪米色化；它能够抑制酪氨酸蛋白磷酸酶的活性，通过蛋白酶抑制的方式对新冠病毒COVID
‑
19起到一定的对抗作用。
[0005]甘草西定在药品领域和保健品领域具有很大的市场潜力和发展前景。但甘草的成分复杂，存在多种与甘草西定物理性质相似的活性成分，分离难度大，使得甘草西定难以被高效分离；甘草西定在甘草中的含量很低，大概在0.08％左右，杂质含量多，需要复杂的步骤或设备来分离甘草西定。市面上纯度＞95％的甘草西定提取物价格大约为数十万元每克，价格昂贵，因此以成本低廉的甘草渣为原料制备的高纯度甘草西定提取物具有较大的市场需求。
[0006]经过检索，目前关于高纯度甘草西定制备的文献和专利较少，大多采用硅胶柱分离法，步骤复杂。例如申请号为CN201910379619.0的中国专利《一种利用离子液体提取甘草中异戊烯基黄酮类化合物的方法》，将甘草与纯离子液体混合后超声提取，在上清中得到甘草西定，含量为224.5μg/g。此工艺要求的反应温度较高，且合成离子液体的工艺较复杂，成本较高，后续回收流程较为复杂。申请号为CN201510918824.1的中国专利《甘草中一类异戊烯基异黄酮类化合物的医药新用途》中使用乙醇提取和乙酸乙酯萃取后，经硅胶柱色谱分离、乙醇
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水梯度洗脱、聚酰胺柱色谱分离、二氯甲烷
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甲醇梯度洗脱后得到甘草西定，所得甘草西定量为900mg/35kg。制备工艺繁琐，成本高，得率低。文献《乌拉尔甘草根异戊烯基黄酮类成分的研究》中使用乙酸乙酯和石油醚萃取，然后进行硅胶柱梯度分离，然后再进行聚酰胺色谱柱分离和半制备分离。硅胶柱层析法在产品质量上难以满足市场需求，且收率较低，步骤复杂；半制备型液相色谱制备量较小，难以达到工业化需求。申请号为CN200880023333.9的中国专利《甘草提取物的抗微生物和抗炎分离物》中使用超临界CO2提
取法提取甘草西定。这种方法是将CO2加载至超临界状态后进行甘草的萃取，具有CO2可循环的特点，但是对提取条件要求较高，设备昂贵，高温或高压的实验条件存在一定的安全隐患。
[0007]而且现有技术中获得的甘草西定产品的得率都不高。例如中国专利CN201910379619.0《一种利用离子液体提取甘草中异戊烯基黄酮类化合物的方法》，总得率为0.02％；中国专利CN201510918824.1《甘草中一类异戊烯基异黄酮类化合物的医药新用途》，总得率为0.005％；文献《光果甘草根中黄酮类化学成分研究》，总得率为0.0004％。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于充分利用甘草渣，提供一种工艺条件简单、设备要求低、用料成本低、产品得率高、易于工业化的高纯度甘草西定分离提取方法。
[0009]本专利技术首先对甘草渣进行醇提，通过使用大孔树脂处理去除醇提物中的部分杂质，得到黄酮粗品。然后使用一种改良的结晶方法分离出高纯度的甘草西定，控制反应条件以提升结晶效果，最终通过一次结晶即可得到纯度95％以上的产品。本专利技术具体技术方案如下：
[0010]一种从植物甘草中分离提取甘草西定的方法，包括以下步骤：
[0011]步骤1)：称量甘草渣，在常温下用去离子水浸泡，抽滤得到水提后的甘草渣；使用无水乙醇常温浸泡水提后的甘草渣，甘草渣(未浸泡前)与无水乙醇的料液比为1:10～1:15(g/mL)，提取时间为10～16h；收集浸泡液，减压浓缩，得无水乙醇浓缩液；
[0012]步骤2)：将步骤1)所得的无水乙醇浓缩液用去离子水稀释，上大孔树脂柱进行吸附，上样流速为1BV/h，所述大孔树脂为非极性或弱极性的树脂；上柱完成后，用50％～85％乙醇水溶液进行梯度洗脱，乙醇水溶液梯度洗脱的洗脱量为8～10BV，流速为1～1.5BV/h；浓缩最后一次的洗脱液得到黄酮粗品粉末；
[0013]步骤3)：使用溶剂Ⅰ和溶剂Ⅱ处理步骤2)获得的黄酮粗品粉末，搅拌得到浑浊液；过滤浑浊液，加热滤液以使溶剂Ⅰ挥发，然后将滤液以1～3℃/min的速度降温至低温条件，待结晶完全，过滤得到甘草西定产品；所述溶剂Ⅰ为丙酮、乙醚、二氯甲烷中任意一种，溶剂Ⅱ为环己烷、正己烷、石油醚、四氯化碳中任意一种；加热温度为30℃～60℃，溶剂Ⅰ与溶剂Ⅱ体积比例为1:2～1:15；所述低温条件为4℃～
‑
15℃。
[0014]作为优化使用溶剂Ⅰ和溶剂Ⅱ处理步骤2)获得的黄酮粗品粉末，具有两种方案：
[0015]①
溶剂Ⅰ和溶剂Ⅱ以一定比例混合，然后溶解黄酮粗品粉末，充分搅拌后过滤浑浊液，在一定温度下加热滤液以使溶剂Ⅰ挥发，然后将溶液以1～3℃/min的速度降温至低温条件，待结晶完全，过滤得到甘草西定产品。
[0016]②
先使用溶剂Ⅰ溶解黄酮粗品粉末，然后加入溶剂Ⅱ，充分搅拌得到浑浊液。过滤浑浊液，在一定温度下加热溶液以挥发溶剂Ⅰ，将溶液以1～3℃/min的速度降温至低温条件，待结晶完全，过滤得到甘草西定产品。
[0017]进一步的优化，步骤1)中所述的去离子水浸泡料液比为1:5～1:15(g/mL)，浸泡时间为5～14小时。
[0018]进一步的，所述常温为18～25℃。
[0019]进一步的，步骤2)中所述非极性或弱极性的树脂，型号为LSA
‑
10、D101、LX
‑
T28、
D101B或AB
‑
8，树脂量为200～300g。
[0020]进一步的，步骤2)中无水乙醇浓缩液用去离子水稀释至乙醇的体积分数为45％～55％，再上大孔树脂柱进行吸附。
[0021]进一步的，步骤3)中黄酮粗品粉末在溶剂Ⅰ中的浓度为80～400mg/mL。
[0022]进一步的，步骤3)中溶液的降温速度为1℃/min。
[0023]本专利技术的有益效果：
[0024]1)本专利技术将本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从植物甘草中分离提取甘草西定的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)：称量甘草渣，在常温下用去离子水浸泡，抽滤得到水提后的甘草渣；使用无水乙醇常温浸泡水提后的甘草渣，甘草渣与无水乙醇的料液比为1:10～1:15，提取时间为10～16h；收集浸泡液，减压浓缩，得无水乙醇浓缩液；步骤2)：将步骤1)所得的无水乙醇浓缩液用去离子水稀释，上大孔树脂柱进行吸附，上样流速为1BV/h，所述大孔树脂为非极性或弱极性的树脂；上柱完成后，用50％～85％乙醇水溶液进行梯度洗脱，乙醇水溶液梯度洗脱的洗脱量为8～10BV，流速为1～1.5BV/h；浓缩最后一次的洗脱液得到黄酮粗品粉末；步骤3)：使用溶剂Ⅰ和溶剂Ⅱ处理步骤2)获得的黄酮粗品粉末，搅拌得到浑浊液；过滤浑浊液，加热滤液以使溶剂Ⅰ挥发，然后将滤液以1～3℃/min的速度降温至低温条件，待结晶完全，过滤得到甘草西定产品；所述溶剂Ⅰ为丙酮、乙醚和二氯甲烷中任意一种，溶剂Ⅱ为环己烷、正己烷、石油醚和四氯化碳中任意一种；加热温度为30℃～60℃，溶剂Ⅰ与溶剂Ⅱ体积比例为1:2～1:15；所述低温条件为4℃～
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15℃。2.根据权利要求1所述的从植物甘草中分离提取甘草西定的方法，其特征在于：步骤1)中所述的去离子水浸泡料液比为1:5～1:...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁浩，吴逸涵，李奕杉，魏斌，尹泰安，
申请(专利权)人：北京化工大学，
类型：发明
国别省市：