本发明专利技术涉及一种青霉菌(Penicilliummali)的发酵化合物及其制备方法和应用，通过将青霉菌(Penicilliummali)菌丝在发酵培养基中于25℃静态培养30天获得到发酵物，经萃取、分离、纯化，得到发酵化合物。该方法具有环保、步骤简单、制备的产品纯度高的优点；所述发酵化合物为庚基环己烷类化合物，能够有效抑制前列腺癌细胞的迁移和浸润，具有良好的抵抗前列腺癌转移的活性，在制备抗前列腺癌药物方面具有良好的应用前景。的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
青霉菌(Penicillium mali)的发酵化合物及其制备方法和抗肿瘤应用
[0001]本专利技术涉及药物化合物
，具体涉及一种菌(Penicillium mali)的发酵化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一。癌症转移会大大增加前列腺癌患者的死亡率，骨是癌症转移的第二最常见部位，在我国超过80％的前列腺癌患者在确诊时已经发生骨转移，而骨转移是导致前列腺癌患者死亡的重要原因。早期患者的五年生存率高达95％以上，但晚期特别是发生骨转移的患者将降至30％以下。
[0003]目前临床上暂无针对前列腺癌骨转移的特效药物，根据不同的病情可以采用化学药物治疗、外放射治疗、放射性核素内放射治疗以及各种疗法的综合应用等。然而，放化疗药物不仅作用于肿瘤，还可以作用于肿瘤周围健康的组织，因而在杀伤肿瘤的同时，也给机体带来了很大的副作用，最终影响对肿瘤的治疗效果。因此，针对前列腺癌转移药物的开发是本领域的热点和难点。
[0004]海洋微生物能够产生结构新颖且活性显著的次级代谢产物，是开发抗癌药物重要的宝藏。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于提供一种分离自青霉菌(Penicillium mali)的发酵化合物及其制备方法和应用。所述青霉菌(Penicillium mali)的发酵产物为庚基环己烷类化合物，具有显著的抗肿瘤活性，可用于抗癌药物的制备和研发。
[0006]为此，本专利技术的第一方面提供一种青霉菌(Penicillium mali)的发酵化合物，所述发酵化合物为庚基环己烷类化合物，其包括式I～
Ⅶ
所示的化合物中的一种或多种：
[0007][0008]本专利技术的第二方面，提供所述的青霉菌(Penicillium mali)发酵化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0009]S1、将青霉菌(Penicillium mali)菌丝体接到含有PDB的培养液中培养获得种子液，将所述种子液接种到发酵培养基中于25℃静态培养30天，得到发酵物；
[0010]S2、将步骤S1得到的发酵物用乙酸乙酯进行萃取，所得萃取物经分离纯化，得到发酵化合物。
[0011]进一步的，上述步骤S2具体包括如下步骤：
[0012]S21、将步骤S1得到的发酵物进行萃取，发酵物用乙酸乙酯萃取，分别使用石油醚和甲醇对有机萃取物进行分液，浓缩甲醇层，得到粗提物；
[0013]S22、将步骤S21得到的粗提物用正相硅胶柱色谱进行分离，用石油醚
‑
乙酸乙酯体系进行梯度洗脱，依次得到5个粗馏分：Fr.1～Fr.5；
[0014]S23、将步骤S22得到的粗馏分Fr.2先使用ODS柱色谱进行分离，使用水
‑
甲醇体系进行梯度洗脱，依次得到15段粗馏分：Fr.2.1～Fr.2.15；
[0015]S24、将步骤S23得到的粗馏分Fr.2.8用葡聚糖凝胶柱和半制备液相色谱柱分离后得到式I化合物；
[0016]S25、将步骤S23得到的粗馏分Fr.2.6用葡聚糖凝胶柱色谱和半制备液相色谱手性柱分离后得到式Ⅱ化合物和式Ⅲ化合物；
[0017]S26、将步骤S22得到的粗馏分Fr.3用ODS柱色谱分离得到15段粗馏分：Fr.3.1～Fr.3.15；
[0018]S27、将步骤S26得到的粗馏分Fr.3.9用葡聚糖凝胶柱和半制备液相色谱柱分离得到式Ⅳ化合物；
[0019]S28、将步骤S22得到的粗馏分Fr.4用ODS柱色谱进行分离，浓缩得到18段粗馏分：Fr.4.1～Fr.4.18；
[0020]S29、将步骤S28得到的粗馏分Fr.4.15用葡聚糖凝胶柱和半制备液相色谱柱分离得到式
Ⅴ
化合物、式
Ⅵ
化合物和式
Ⅶ
化合物。
[0021]进一步的，上述步骤S22中所用正相硅胶柱色谱的洗脱溶剂为石油醚
‑
乙酸乙酯体系，洗脱梯度为20:1
→
0:1。
[0022]进一步的，上述步骤S23中ODS色谱柱所用流动相为甲醇
‑
水，梯度洗脱比例为：40％
→
100％。
[0023]进一步的，上述步骤S24中葡聚糖凝胶柱所用流动相为甲醇，半制备液相色谱柱所用流动相为甲醇
‑
水，梯度洗脱比例为：60％
→
100％。
[0024]进一步的，上述步骤S25中葡聚糖凝胶柱所用流动相为甲醇半制备液相色谱柱所用流动相为甲醇
‑
水，梯度洗脱比例为：50％
→
70％。
[0025]进一步的，上述步骤S26中ODS柱所用流动相为甲醇
‑
水，梯度洗脱比例为：5％
→
40％
→
100％。
[0026]进一步的，上述步骤27中葡聚糖凝胶柱所用流动相为甲醇，半制备液相色谱柱所用流动相为甲醇
‑
水，梯度洗脱比例为：70％
→
100％，。
[0027]进一步的，上述步骤28中ODS柱所用流动相为甲醇
‑
水，梯度洗脱比例为：5％
→
40％
→
100％。
[0028]进一步的，上述步骤29中葡聚糖凝胶柱所用流动相为甲醇，半制备液相色谱柱所用流动相为甲醇
‑
水，梯度洗脱比例为：90％
→
100％。
[0029]优选的，所述发酵培养基为大米。
[0030]进一步，上述步骤S1中的菌丝体通过以下步骤制备得到：将(Penicilliummali)在PDA平板上于28℃培养3～4天，获得所述菌丝体。
[0031]本专利技术的第三方面，提供青霉菌(Penicillium mali)的发酵化合物在制备肿瘤细胞抑制剂中的应用。
[0032]优选地，所述肿瘤细胞为前列腺癌细胞。
[0033]本专利技术的第四方面，提供青霉菌(Penicillium mali)的发酵化合物在预防和/或治疗肿瘤的药物中应用。
[0034]优选地，所述肿瘤为前列腺癌。
[0035]本专利技术的第五方面，提供一种抗肿瘤的组合物，所述组合物包含本专利技术的第一方面所述的发酵化合物。
[0036]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0037]本专利技术提供了分离自深海青霉菌(Penicillium mali)的发酵化合物，其为庚基环己烷类化合物，结构如式I～
Ⅶ
所示。例式I化合物是庚基苯酚类新化合物。本专利技术提供的从深海青霉菌(Penicillium mali)发酵液中分离化合物I～
Ⅶ
的方法，具有环保、步骤简单、产品纯度高等优点。通过细胞毒活性实验以及细胞侵袭实验(transwell)证明了化合物能够有效抑制肿瘤细胞的迁移和浸润，具有良好的抵抗前列本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种青霉菌(Penicillium mali)的发酵化合物，其特征在于，所述发酵化合物为庚基环己烷类化合物，包括式I～
Ⅶ
所示的化合物中的一种或多种：2.如权利要求1所述的发酵化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将青霉菌(Penicillium mali)菌丝体接到含有PDB的培养液中培养获得种子液，将所述种子液接种到发酵培养基中于25℃静态培养30天，得到发酵物；S2、将步骤S1得到的发酵物用乙酸乙酯进行萃取，所得萃取物经分离纯化，得到发酵化合物。3.如权利要求2所述的发酵化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体步骤包括：S21、将步骤S1得到的发酵物进行萃取，发酵物用乙酸乙酯萃取，分别使用石油醚和甲醇对有机萃取物进行分液，浓缩甲醇层，得到粗提物；S22、将步骤S21得到的粗提物用正相硅胶柱色谱进行分离，用石油醚
‑
乙酸乙酯体系进行梯度洗脱，依次得到5个粗馏分：Fr.1～Fr.5；S23、将步骤S22得到的粗馏分Fr.2先使用ODS柱色谱进行分离，使用水
‑
甲醇体系进行梯度洗脱，依次得到15段粗馏分：Fr.2.1～Fr.2.15；S24、将步骤S23得到的粗馏分Fr.2.8用葡聚糖凝胶柱和半制备液相色谱柱分离后得到式I化合物；S25、将步骤S23得到的粗馏分Fr.2.6用葡聚糖凝胶柱和半制...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨献文，徐琳，邹正彪，谢明敏，张勇，
申请(专利权)人：自然资源部第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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