一种点击化学反应的催化体系组合物及其制备方法和在生物检测中的应用技术

本发明专利技术属于生物分析检测技术领域，本发明专利技术公开了一种包含还原糖、2,2

【技术实现步骤摘要】
的组合的催化体系组合物，及其制备方法。
[0006]本专利技术要解决的又一个技术问题是，提供包含还原糖、2,2
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二辛可宁酸、CuSO4的组合的催化体系组合物作为点击化学反应的催化剂的用途。
[0007]本专利技术要解决的又一个技术问题是，提供基于包含还原糖、2,2
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二辛可宁酸、CuSO4的组合的催化体系组合物的点击化学反应催化体系在生物标记检测中的应用。
[0008]为了解决本专利技术的技术问题，本专利技术采取如下的技术方案:本专利技术第一方面涉及一种包含由还原糖、2,2
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二辛可宁酸、CuSO4按照一定比例混合而成的组合的催化体系组合物，其制备方法为：由于催化效率一定程度上取决于形成的2,2
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二辛可宁酸与Cu(I)螯合物的浓度，因此，本专利技术配制了不同比例的还原糖、2,2
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二辛可宁酸、CuSO4的组合体系，80℃孵育5分钟，冰水冷却后检测560 nm的吸光值，也即2,2
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二辛可宁酸与Cu(I)螯合物的浓度。组合体系中设定CuSO4的含量为1.25 mM，2,2
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二辛可宁酸的含量为1.25 mM，加入不同浓度（0、0.315、0.625、1.25、2.5、5.0 mM）的还原糖。
[0009]进一步优选组合物的制备方法如下：组合体系中设定CuSO4的含量为1.25 mM，还原糖的含量为1.25 mM，加入不同浓度的2,2
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二辛可宁酸（0.315、0.625、1.25、2.5、5.0 mM）。
[0010]进一步优选组合物的制备方法如下：组合体系中设定CuSO4的含量为1.25 mM，2,2
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二辛可宁酸的含量为1.25 mM，还原糖的含量为1.25 mM。其中还原糖选自但不限于葡萄糖、甘露糖、乳糖。
[0011]本专利技术第二方面涉及上述第一方面所述的点击化学的催化体系组合物用于在室温下催化点击化学反应的用途。具体研究中，评估不同的还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4组合体系催化点击化学反应的效率。制备并且比较不同浓度的还原糖对于组合体系催化活性的影响，即还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4浓度分别为（1.25 mM/1.25 mM/1.25 mM）和（5.0 mM/1.25 mM/1.25 mM）的催化体系对于点击化学反应的催化效率。
[0012]进一步优选，制备并且比较了不同浓度的2, 2
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二辛可宁酸对于组合体系催化活性的影响，即还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4浓度分别为（1.25 mM/1.25 mM/1.25 mM）和（1.25 mM/2.5 mM/1.25 mM）的催化体系对于点击化学的催化效率。
[0013]进一步优化，比较不同制备时间（0、1、3、5、10、15、20、30、60天）的1.25 mM还原糖/1.25 mM2,2
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二辛可宁酸/1.25 mM CuSO4的催化体系对于点击化学反应的催化效率。
[0014]进一步优化，比较不同制备时间（0、1、3、5、10、15、20、30、60天）的1.25 mM还原糖/1.25 mM 2, 2
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二辛可宁酸/1.25 mM CuSO4的催化体系中H2O2的含量，从而评估其是否比经典的基于抗坏血酸建立的点击化学催化体系具有优势。
[0015]本专利技术第三方面涉及上述第一方面所述的点击化学的催化体系组合物用于基于点击化学反应而建立的生物检测中的用途。具体研究中，本研究采用还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4的催化体系催化含有EdU（5
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乙炔基
‑2‑
脱氧尿苷）的细胞核与含有叠氮的荧光染料之间的生物标记检测反应。
[0016]本专利技术相对于现有技术，具有以下有益效果：本专利技术开发了一种新型点击化学的催化体系组合物，相较于经典的基于抗坏血酸钠建立的点击化学反应催化体系，本专利技术所述催化体系组合物的优势在于，放置10天以上的催化体系溶液中几乎不含有包括H2O2在内
的活性氧分子。
附图说明
[0017]图1：各种不同比率的还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4的组合体系的吸光值
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时间变化。
[0018]图2：含有不同浓度2,2
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二辛可宁酸的还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4催化体系的吸光值。
[0019]图3：由3
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叠氮基
‑7‑
羟基香豆素和盐酸丙炔胺参与的点击化学反应。
[0020]图4：比较不同比率葡萄糖或2, 2
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二辛可宁酸对于葡萄糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4的组合体系催化点击化学反应的活性。
[0021]图5：比较不同比率甘露糖或2, 2
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二辛可宁酸对于甘露糖/2, 2
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二辛可宁酸/CuSO4的组合体系催化点击化学反应的活性。
[0022]图6：比较不同比率乳糖或2, 2
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二辛可宁酸对于乳糖/2, 2
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二辛可宁酸/CuSO4的组合体系催化点击化学反应的活性。
[0023]图7：各种不同制备天数的还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4的组合体系催化点击化学反应的活性。
[0024]图8：各种不同制备天数的还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4的组合体系中H2O2的含量。
[0025]图9：还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4的催化体系用于含有叠氮的荧光染料标记EdU掺入的细胞增殖测定实验。图中，第一行为使用葡萄糖的实验结果，第二行为使用甘露糖的实验结果，第三行为使用乳糖的实验结果。
具体实施方式
[0026]下面参照具体的实施例对本专利技术做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术的范围。
[0027]实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
[0028]下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
[0029]实施例1：还原糖/2,2
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二辛可宁酸/CuSO4催化体系的制备及560 nm吸光值的检测实验方法：配制溶液A含有512 mM碳酸钠、288 mM碳酸氢钠和5.0 mM 2,2
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二辛可宁酸。配制溶液B含有5.0 mM CuSO4、12.0 mM L
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种点击化学反应的催化体系组合物，其特征在于：所述催化体系组合物含有还原糖、2,2
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二辛可宁酸（Bicinchoninic acid, BCA）和CuSO4的组合。2.根据权利要求1所述的一种点击化学反应的催化体系组合物，其特征在于：所述还原糖代表一类在碱性环境中可以暴露出醛基的碳水化合物，所述还原糖选自以下一种或多种：葡萄糖、甘露糖、乳糖、麦芽糖或果糖。3.权利要求1或权利要求2所述的一种点击化学反应的催化体系组合物的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：将0.315
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5.0 mM还原糖混合于含有1.25 mM CuSO4、0.315
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5.0 mM 2,2
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二辛可宁酸的BCA检测缓冲液中，80℃孵育5
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60分钟，冰水冷却后室温保存并使用。4.根据权利要求3所述的一种点击化学反应的催化体系组合物的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：将1.25 mM还原糖混合于含有1.25 mM CuSO4、1.25 mM 2,2
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二辛可宁酸的BCA检测缓冲液中，80℃孵育5分钟，冰水冷却后室温保存并使用。5.根据权利要求4所述的一种点击化学反应的催化体系组合物的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：将1.25 mM还原糖混合于含有1.25 mM CuSO4、1.25 mM 2,2
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二辛可宁酸的BCA检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜燕飞，
申请(专利权)人：北京青颜博识健康管理有限公司，
类型：发明
国别省市：