免疫刺激IL-2类似物的新型缀合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及对白细胞介素

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫刺激IL
‑
2类似物的新型缀合物及其制备方法


[0001]本专利技术涉及白细胞介素
‑
2类似物的新型缀合物、其制备方法及其用途。

技术介绍

[0002]白细胞介素
‑
2是一种重要的免疫刺激剂，分子量约为15kDa，由总共133个氨基酸残基组成，并激活免疫系统的各种细胞，包括T细胞和B细胞。白细胞介素
‑
2作为免疫刺激物的高功效可用于治疗各种免疫相关状况，包括癌症和AIDS(韩国专利申请公开号10
‑
2017
‑
0070091)。目前，白细胞介素
‑
2(商标名：Proleukin)是FDA批准的用于治疗转移性肾细胞癌和转移性黑素瘤的药物。然而，由于高剂量白细胞介素
‑
2疗法的严重毒性，适用的患者有限。事实上，这种疗法仅适用于少数合格患者。与白细胞介素
‑
2相关的毒性包括严重发热、恶心、呕吐、血管渗漏、严重低血压、肺水肿和血管渗漏综合征，导致肝损伤。
[0003]白细胞介素
‑
2受体有三种亚基受体。该亚基由α链(IL
‑
2Rα，CD25)、β链(IL
‑
2Rβ或CD122)和γ链(IL
‑
2Rγ或CD132)组成。白细胞介素
‑
2可以通过与各种组合的受体亚基结合而表现出各种功能。单个白细胞介素
‑
2α受体被称为低亲和力白细胞介素
‑r/>2受体，并且其不参与信号传导。白细胞介素
‑
2β和白细胞介素
‑
2γ受体的复合物以中等亲和力结合白细胞介素
‑
2。白细胞介素
‑
2α、白细胞介素
‑
2β和白细胞介素
‑
2γ受体的复合物以高亲和力结合白细胞介素
‑
2。白细胞介素
‑
2β和白细胞介素
‑
2γ受体的复合物是多条信号传导通路中通过激酶活化进行有效的信号转换所必需的。具体地，白细胞介素
‑
2β和白细胞介素
‑
2γ结合受体在CD8
+
细胞和自然杀伤(NK)细胞中非常突出。此外，高亲和力白细胞介素
‑
2α、白细胞介素
‑
2β和白细胞介素
‑
2γ受体的复合物通常发现于CD4
+
T调节细胞(Treg)，而最近它们也在活化的T细胞中发现。由于白细胞介素
‑
2β受体分布在CD8
+
T细胞或自然杀伤细胞(NK细胞)中并参与体内的免疫反应，因此已经进行了研究，通过增加β受体对于免疫活化的活性来开发治疗剂。
[0004]同时，尽管白细胞介素
‑
2作为各种免疫相关状况的治疗剂具有潜力，但仍然没有很多药物能够在降低毒性和副作用的同时减少其剂量，因此对新的和改进的药物的研究需求越来越大。

技术实现思路

[0005][技术问题][0006]作为免疫相关疾病用治疗剂开发的一部分，需要开发包括白细胞介素
‑
2类似物并且具有优异的耐久性和药理作用的药物。
[0007][技术方案][0008]本专利技术的目的是提供长效缀合物，其包括白细胞介素
‑
2类似物。
[0009]本专利技术的另一个目的是提供用于制备所述长效缀合物的方法。
[0010]本专利技术的又一个目的是提供用于预防或治疗癌症的药物组合物，所述药物组合物包括白细胞介素
‑
2类似物或其长效缀合物。
[0011]本专利技术的再又一个目的是提供用于预防或治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的个体施用所述白细胞介素
‑
2类似物、其长效缀合物或包括其的组合物。
[0012]本专利技术的又另一个目的是提供所述白细胞介素
‑
2类似物、其长效缀合物或包括其的组合物在预防或治疗癌症中的用途。
[0013]本专利技术的再另一个目的是提供用于提供预防或治疗癌症的药物的用途，所述药物包括所述白细胞介素
‑
2类似物或其长效缀合物，或包括其的组合物。
[0014][有利效果][0015]所述白细胞介素
‑
2类似物或包括其的长效缀合物是在体内对白细胞介素
‑
2β受体具有增加的结合亲和力并且具有改善施用便利性和抗癌治疗目的副作用的效果的类似物。
附图说明
[0016]图1是白细胞介素
‑
2类似物(类似物21、41和52)的长效缀合物的SDS
‑
PAGE的结果。
[0017]图2是分析白细胞介素
‑
2类似物(类似物21、41和52)的长效缀合物的纯度的结果。
[0018]图3显示了分析白细胞介素
‑
2类似物的长效缀合物在ICR和C57BL/6小鼠中的药代动力学的结果。A是分析白细胞介素
‑
2类似物缀合物41和白细胞介素
‑
2类似物缀合物52在ICR小鼠中的药代动力学的结果，而B是分析白细胞介素
‑
2类似物缀合物21、白细胞介素
‑
2类似物缀合物86、白细胞介素
‑
2类似物缀合物104和白细胞介素
‑
2类似物缀合物105在C57BL/6小鼠中的药代动力学的结果。在图3中，显示的是仅基于整个长效缀合物中白细胞介素
‑
2类似物区域占据的重量的缀合物剂量和血清浓度。
[0019]图4显示了证实白细胞介素
‑
2类似物缀合物21、白细胞介素
‑
2类似物缀合物41和白细胞介素
‑
2类似物缀合物52在小鼠中的动物模型中的抗癌效果的结果。在图4中，长效缀合物的剂量是仅基于整个缀合物中白细胞介素
‑
2类似物区域占据的重量所表示的值。
[0020]图5是证实白细胞介素
‑
2类似物的长效缀合物的动物模型中记忆T细胞变化的结果。A显示了白细胞介素
‑
2类似物缀合物21、白细胞介素
‑
2类似物缀合物41和白细胞介素
‑
2类似物缀合物52的肿瘤生长抑制效果，而B是分析白细胞介素
‑
2类似物缀合物21、白细胞介素
‑
2类似物缀合物41和白细胞介素
‑
2类似物缀合物52的记忆T细胞数的结果。在图5中，长效缀合物的剂量是仅基于整个缀合物中白细胞介素
‑
2类似物区域占据的重量所表示的值。
[0021]图6是评价白细胞介素
‑
2类似物的长效缀合物在恶性黑素瘤的动物模型中的抗肿瘤功效的结果。A显示了阿地白介素(ald本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.由下列化学式1表示的长效缀合物，其包括白细胞介素
‑
2类似物：[化学式1]X
‑
L
a
‑
F其中，X是相比于阿地白介素具有对白细胞介素
‑
2β受体增加的结合亲和力的白细胞介素
‑
2类似物；L是聚乙二醇连接体；a是0或自然数，前提是当a是2或更大时，每个L彼此独立；F是二聚体形式的免疫球蛋白Fc区；并且
‑
表示X和L之间以及L和F之间的共价键合；其中所述白细胞介素
‑
2类似物包括对应于天然白细胞介素
‑
2中第1、12、18、19、20、22、32、35、38、42、43、45、48、49、61、68、69、74、76、80、81、82、84、85、86、87、88、89、91、92、94、95、96、125、126和133位的一个或多个氨基酸被修饰的序列。2.根据权利要求1所述的长效缀合物，其中所述白细胞介素
‑
2类似物相比于阿地白介素具有对白细胞介素
‑
2α受体改变的结合亲和力。3.根据权利要求1所述的长效缀合物，其中一个或多个氨基酸被添加到对应于第133位的氨基酸。4.根据权利要求1所述的长效缀合物，其中所述白细胞介素
‑
2类似物是天然白细胞介素
‑
2类似物中第1位的氨基酸被去除并且第125位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物。5.根据权利要求4所述的长效缀合物，其中所述白细胞介素
‑
2类似物还包括1至10个氨基酸取代。6.根据权利要求5所述的长效缀合物，其中所述白细胞介素
‑
2类似物包括第18、19、20、22、38、42、43、45、61、68、69、74、80、81、84、85、86、88、89、91、92、94和96位的一个或多个氨基酸进一步被不同的氨基酸取代的取代。7.根据权利要求5所述的长效缀合物，其中所述白细胞介素
‑
2类似物包括第18、22、38、42、61、68、80、81、85、86和92位的一个或多个氨基酸进一步被不同的氨基酸取代的取代。8.根据权利要求1所述的长效缀合物，其中所述白细胞介素
‑
2类似物是下列类似物中的任一种：(a)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125和32位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(b)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125和35位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(c)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125和38位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(d)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125和42位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(e)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125和43位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(f)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125和48位的氨基酸被不同的氨
基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(g)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125和49位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(h)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125和76位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(i)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、81、92、94和96位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(j)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125和87位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(k)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38和42位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(l)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38和80位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(m)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38和84位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(n)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、19、38和42位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(o)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、12、38和42位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(p)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42和61位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(q)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42和84位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(r)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42和88位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(s)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42和89位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(t)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42和91位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(u)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42和94位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(v)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42和126位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(w)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、80和84位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(x)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、94和96位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(y)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；
(z)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、61、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(aa)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ab)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、80、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ac)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、81、84和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ad)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、20、38、42、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ae)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、80、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(af)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、74、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ag)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、81、84和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ah)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、81、88和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ai)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(aj)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、80、81、85和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ak)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、80、81、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(al)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(am)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、45、74、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(an)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、74、80、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ao)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、80、81、84和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ap)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、45、80、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(aq)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ar)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、42、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(as)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、61、80、81、85、86和92位的
氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(at)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、69、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(au)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、80、81、85、86、91和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(av)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、18、22、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(aw)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ax)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、45、74、80、81和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ay)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、68、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(az)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、69、74、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(ba)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、80、81、84、85、86、91和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bb)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、80、81、85、86、92、94和96位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bc)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、18、19、22、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bd)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、18、22、38、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(be)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、18、22、61、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bf)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、18、22、68、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bg)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、35、38、42、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bh)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、45、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bi)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、80、81、85、86、91和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bj)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、80、81、85、86、92和95位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bk)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、35、38、42、74、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bl)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、43、61、80、81、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；
(bm)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、38、42、80、81、85、86、91、92和95位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bn)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、35、38、42、74、80、81、82、85、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；(bo)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、80、81、86和92位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
‑
2类似物；和(bp)天然白细胞介素
‑
2中第1位的氨基酸被去除并且第125、80、81、85和86位的氨基酸被不同的氨基酸取代的白细胞介素
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2类似物。9.根据权利要求8所述的长效缀合物，其中所述氨基酸取代是选自下列氨基酸取代的任一种：(a)第12位的氨基酸被缬氨酸或苯丙氨酸取代的取代；(b)第18位的氨基酸被精氨酸取代的取代；(c)第19位的氨基酸被酪氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸或精氨酸取代的取代；(d)第20位的氨基酸被缬氨酸或苯丙氨酸取代的取代；(e)第22位的氨基酸被谷氨酸取代的取代；(f)第32位的氨基酸被半胱氨酸取代的取代；(g)第35位的氨基酸被半胱氨酸或谷氨酸取代的取代；(h)第38位的氨基酸被丙氨酸或天冬氨酸取代的取代；(i)第42位的氨基酸被赖氨酸、丙氨酸或色氨酸取代的取代；(j)第43位的氨基酸被半胱氨酸、谷氨酸或谷氨酰胺取代的取代；(k)第45位的氨基酸被丙氨酸取代的取代；(l)第48位的氨基酸被半胱氨酸取代的取代；(m)第49位的氨基酸被半胱氨酸取代的取代；(n)第61位的氨基酸被谷氨酰胺、精氨酸或天冬氨酸取代的取代；(o)第68位的氨基酸被天冬氨酸或谷氨酰胺取代的取代；(p)第69位的氨基酸被甘氨酸取代的取代；(q)第74位的氨基酸被组氨酸或丙氨酸取代的取代；(r)第76位的氨基酸被半胱氨酸取代的取代；(s)第80位的氨基酸被苯丙氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬氨酸或色氨酸取代的取代；(t)第81位的氨基酸被天冬氨酸、谷氨酸或天冬酰胺取代的取代；(u)第82位的氨基酸被甘氨酸或缬氨酸取代的取代；(v)第84位的氨基酸被谷氨酸、缬氨酸或苯丙氨酸取代的取代；(w)第85位的氨基酸被缬氨酸、丙氨酸、甘氨酸、色氨酸、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、谷氨酸或苯丙氨酸取代的取代；(x)第86位的氨基酸被缬氨酸、丙氨酸、甘氨酸或亮氨酸取代的取代；(y)第87位的氨基酸被半胱氨酸取代的取代；(z)第88位的氨基酸被谷氨酰胺、缬氨酸或苯丙氨酸取代的取代；(aa)第89位的氨基酸被苯丙氨酸取代的取代；(ab)第91位的氨基酸被苏氨酸、苯丙氨酸或谷氨酸取代的取代；
(ac)第92位的氨基酸被苯丙氨酸、亮氨酸、酪氨酸或色氨酸取代的取代；(ad)第94位的氨基酸被苯基丙氨酸或缬氨酸取代的取代；(ae)第95位的氨基酸被天冬氨酸取...

【专利技术属性】
技术研发人员：许容豪，吴宜林，朴多炫，金真英，朴浚燮，金惟软，李雅揽，金尚允，
申请(专利权)人：韩美药品株式会社，
类型：发明
国别省市：