一种重组蛋白A及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种重组蛋白A及其应用。本发明专利技术提供的重组蛋白A的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，可以与F(ab

【技术实现步骤摘要】
一种重组蛋白A及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种重组蛋白A及其应用。

技术介绍

[0002]20世纪中期，Jensen发现有一种蛋白可以与人和兔血清抗体广泛结合，该蛋白于1964年首次被称为金黄色葡萄球菌蛋白A（Staphylococcus aureus Protein A，SPA），以下简称“蛋白A”。 蛋白A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，分子量42KDa，它能够特异性地结合多种免疫球蛋白的Fc区域，可与人类和其他哺乳动物的多种免疫球蛋白发生特异性结合，因此被广泛用作免疫学试剂、抗体的分离纯化、治疗抗体相关性疾病的血液净化吸附剂等，市场需求量很大。
[0003]蛋白A的获取一开始是从金黄色葡萄球菌中直接提取天然蛋白A，天然的蛋白A包含5个高度同源的结构域E、D、A、B、C和未知功能的非Fc结合域。5个结构域均包括由两个环连接的三个螺旋结构（Helix
ꢀⅠ
、Helix
ꢀⅡ
和Helix
ꢀⅢ
），其中Helix
ꢀⅠ
和Helix
ꢀⅡ
（除Ｃ端部分氨基酸）可与IgG的Fc片段特异性结合，而Helix
ꢀⅢ
和Helix
ꢀⅡ
的C端部分氨基酸可与IgG的Fab片段结合。蛋白Ａ可通过疏水相互作用特异性结合IgG的Fc片段，主要涉及两个结合位点：Helix Ｉ结构中苯丙氨酸和酪氨酸组成的二肽所形成的疏水内核与IgG的CH2
‑
CH3区域之间；Helix
ꢀⅡ
与IgG的CH3区域之间。此外，5个结构域都可通过Helix
ꢀⅡ
的C端部分残基和Helix
ꢀⅢ
与VH3区域相互作用，从而结合IgG的Fab片段。相较于D、E结构域，A、B和C结构域与Fab片段相互作用较弱。
[0004]Fab片段（Antigen
‑
binding fragment）是抗体结构中可以与抗原结合的区域，由完整的轻链（可变区和恒定区）和部分重链结构（可变区和一个恒定区片段）组成，轻链与重链通过一个二硫键连接，体积较小，分子量为47
‑
48 kDa。Fab片段与完整的IgG相比，它缺少Fc段，虽然能与抗原选择性结合但不会发生沉淀反应；由于自身免疫原性低，不能被活体的免疫细胞识别，因此能显著降低超敏性反应发生的概率，提高产品的安全性。Fab类抗体片段具有分子质量小、组织分布特异性强、免疫原性低、可基因工程操作等特点，使Fab成为了医药研究领域的重要成员之一，Fab类药物在临床诊断和治疗上发挥巨大的作用。例如：已经上市的赛妥珠单抗酯（一种Fab片段），可以有效地针对类风湿性关节炎；作为Fab片段的美妥昔单抗I也已经用于治疗肺癌等。
[0005]天然蛋白A结构稳定，能够特异性地结合多种免疫球蛋白的Fc区，但与Fab区或轻链结合很弱。获取天然蛋白A的方法也比较复杂，金黄色葡萄球菌还属于致病菌，大规模生产危险性较大。因此，近些年人们开始研究通过基因工程的方法来生产重组蛋白A，简化蛋白A的生产流程，提高生产安全性。目前市面上大部分的商用重组蛋白A主要是针对B结构域进行优化的，这种方法优化的蛋白A虽然耐碱性和载量显著优于天然蛋白A，但是与Fab片段结合被降低。
[0006]VHH是已知最小的自然产生的抗原结合域，通常由噬菌体展示法获得其序列。通过适当的筛选，可以确保选择到最佳的VHH片段。小分子的VHH具有较好的组织穿透能力，在癌
症治疗中能够很好的到达靶点位置，从而进行有效治疗。
[0007]VHH、Fab抗体片段均可用于癌症的研究与治疗，这两个片段的纯化过程也至关重要。但现有技术中大部分商业蛋白A及其偶联制备的介质对VHH、Fab片段进行纯化的能力较弱，因此开发对VHH和Fab高结合活性的蛋白A有较大意义。

技术实现思路

[0008]基于此，本专利技术提供了一种重组蛋白A及其应用。本专利技术提供的重组蛋白A能与Fab和VHH结合，且重组蛋白A偶联的亲和层析介质可以实现对IgG抗体、F(ab
’
)2片段以及VHH的纯化。
[0009]为了达到上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种重组蛋白A，所述重组蛋白A的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0010]MADNKFNKEQQNAFYEILHLPNLNEEQRNGFIQSLKDDPSQSANLLAEAKKLNDAQAPKAQHDEAQQNAFYQVLNMPNLNADQRNGFIQSLKDDPSQSANVLGEAQKLNDSQAPKADAQQNNFNKDQQSAFYEILNMPNLNEAQRNGFIQSLKDDPSQSTNVLGEAKKLNESQAPKADNKFNKEQQNAFYEILHLPNLNEEQRNGFIQSLKDDPSQSANLLAEAKKLNDAQAPK（SEQ ID NO.1）；优选地，编码所述氨基酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0011]ATGGCAGACAACAAATTCAACAAAGAACAGCAGAACGCTTTTTACGAAATCCTGCACCTGCCGAACCTGAACGAAGAACAGCGCAACGGCTTCATCCAGTCCCTGAAAGACGACCCGTCTCAGTCTGCGAACCTGCTGGCTGAAGCGAAAAAGCTGAACGACGCGCAGGCCCCGAAAGCTCAGCACGACGAAGCTCAGCAGAACGCTTTCTACCAGGTTCTGAACATGCCGAACCTGAACGCTGACCAGCGTAACGGTTTTATCCAGTCCCTGAAAGACGACCCGTCTCAGTCTGCGAACGTTCTGGGTGAAGCACAGAAACTGAACGACTCCCAGGCTCCGAAAGCTGACGCTCAGCAGAACAACTTTAACAAAGACCAGCAGTCCGCATTCTACGAAATCCTGAACATGCCGAACCTGAACGAAGCGCAGCGTAACGGTTTCATTCAGTCTCTGAAAGACGATCCGTCTCAGTCCACCAACGTTCTGGGTGAAGCAAAAAAACTGAACGAATCTCAGGCGCCGAAAGCGGACAACAAATTCAACAAAGAACAGCAGAACGCTTTTTACGAAATCCTGCACCTGCCGAACCTGAACGAAGAACAGCGTAACGGTTTCATCCAGTCTCTGAAAGACGACCCGTCTCAGTCTGCGAACCTGCTGGCGGAAGCGAAAAAACTGAACGACGCGCAGGCGCCGAAATAATGA（SEQ ID NO.2）。
[0012]本专利技术还提供了一种重组表达载体，包含所述的编码重组蛋白A的核苷酸序列。
[0013]优选地，所述重组表达载体是将权利要求2所述的核苷酸序列克隆到pET28a质粒中的NdeI/Xho本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种重组蛋白A，其特征在于，所述重组蛋白A的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2. 如权利要求1所述的重组蛋白A，其特征在于，编码所述氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求2所述的编码重组蛋白A的核苷酸序列。4.如权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑飞剑，牛泽洁，周清瑞，何建佳，陈昊，张景辉，
申请(专利权)人：江苏百英生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：