一种围产期心肌病小鼠模型的构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种围产期心肌病小鼠模型的构建方法与应用，涉及动物模型构建技术领域。本发明专利技术提供一种围产期心肌病小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：(1)将雌鼠与雄鼠合笼，第二天观察到阴道栓确定该雌鼠怀孕并定为怀孕0.5天；(2)于孕中期开始对步骤(1)孕鼠进行油酰乙醇胺给药至妊娠结束，得所述围产期心肌病小鼠模型。本发明专利技术通过对孕中期的小鼠施加一定剂量的OEA构建围产期心肌病小鼠模型，建立得到的围产期心肌病小鼠模型呈现左心室扩张、心功能损伤、肺

【技术实现步骤摘要】
一种围产期心肌病小鼠模型的构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及动物模型构建
，具体涉及一种围产期心肌病小鼠模型的构建方法与应用。

技术介绍

[0002]围产期心肌病(PPCM)是一种病因不明，既往没有心肌病病史，发生在生产前3个月或生产后半年内的心肌病，其特征为左心室收缩功能失常和充血性心力衰竭。PPCM的发病率因地域和人种不同，据统计，国外发病率为0.025
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0.334％，我国发病率约为0.289％(1/346)。PPCM是孕产期女性死亡的重要原因，死因大多为难治性心衰、心律失常、并发肺栓塞或系统性栓塞。PPCM的主要危险因素有多胎多产、家族史、种族(非洲裔高发)、吸烟、糖尿病、高血压、子痫前期、营养不良、高龄妊娠、长时间使用β受体兴奋剂类的保胎药等。
[0003]由于医学伦理限制，动物模型是研究PPCM发病机制以及探索预防治疗措施的重要工具。灵长类动物在妊娠和心脏发育方面与人类有很多相似性，作为人类心脏疾病研究的模型具有无可比拟的优势，但由于价格高昂、操作复杂、实验周期久，目前小鼠和大鼠仍是常规用来构建心脏疾病模型的首选实验动物。
[0004]目前已有的PPCM的动物模型较少，出现在研究论文中的PPCM动物模型为基因改变PPCM动物模型，即PPCM基因缺陷模型，采用基因打靶技术敲除单个基因，检测基因缺陷动物孕期是否出现PPCM样症状。例如，在心肌细胞中特异性敲除STAT3基因的小鼠模型(αMHC
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Cretg/+；Stat3fl/fl；CKO)和全身性突变Hsp20基因的小鼠模型(Hsp20
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S10F)，表现出了孕期心脏左室扩张，心功能损伤的PPCM特征。然而两种动物模型各自代表了不同的PPCM发病机制如心肌细胞凋亡和自噬。单个基因仅能改变其调控的下游信号通路，不能体现PPCM多病因的特点，且基因缺陷动物模型构建周期久，操作复杂，价格较高。因此，开发一种简易操作且模拟PPCM发生发展的动物模型十分必要。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种围产期心肌病小鼠模型的构建方法与应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种围产期心肌病小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：
[0007](1)将雌鼠与雄鼠合笼，第二天观察到阴道栓确定该雌鼠怀孕并定为怀孕0.5天；
[0008](2)于孕中期开始对步骤(1)孕鼠进行油酰乙醇胺给药至妊娠结束，得所述围产期心肌病小鼠模型。
[0009]油酰乙醇胺(N
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oleoylethanolamine，OEA)是一种由脂肪酸为底物转化而成的人体内源性大麻醇类物质。OEA通过大麻醇受体CB1和CB2，抑制下游cAMP、p38、和ERK1/2信号通路，调控配子形成、早孕期胚胎着床和胎盘发育。在不孕症病人的卵泡液和异位妊娠病人的血清中OEA水平升高，参与调控输卵管上皮细胞的纤维摆动，致使孕卵异位妊娠和不孕症
的发生。本专利技术专利技术人经过大量的实验研究发现，从子痫前期伴发的围产期心肌病孕妇的代谢组中筛选到的水平异常升高的代谢物OEA，发现OEA可诱导孕鼠具有PPCM的表型，表明这一筛选自临床样本的代谢物OEA与PPCM发生相关。因此，本申请专利技术人对妊娠孕中期小鼠灌胃施加OEA，构建得到围产期心肌病小鼠模型。
[0010]作为本专利技术所述围产期心肌病小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤(1)中的雌鼠与雄鼠周龄为10
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12周。
[0011]作为本专利技术所述围产期心肌病小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤(1)中的雌鼠与雄鼠的比例为雌鼠：雄鼠＝2：1。
[0012]作为本专利技术所述围产期心肌病小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述油酰乙醇胺的给药方式包括灌胃。
[0013]作为本专利技术所述围产期心肌病小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述油酰乙醇胺的给药剂量为40mg/kg/day。
[0014]作为本专利技术所述围产期心肌病小鼠模型的构建方法的优选实施方式，所述步骤(2)孕中期为怀孕第7.5天。
[0015]作为本专利技术所述围产期心肌病小鼠模型的构建方法的优选实施方式，还包括持续监测给药后的孕鼠的血压、检测孕18.5天孕鼠的心功能、心脏组织形态、胎鼠和胎盘重量。本专利技术的围产期心肌病小鼠模型的构建方法对给药后的孕鼠的血压、孕18.5天孕鼠的心功能、心脏组织形态、胎鼠和胎盘重量进行检测，能客观反映干预后实验孕鼠的围产期心肌病相关特征的变化，使得实验结果真实可信。
[0016]本专利技术还提供所述的构建方法构建得到的围产期心肌病小鼠模型。
[0017]本专利技术还提供所述围产期心肌病小鼠模型在筛选或制备治疗围产期心肌病的药物中的应用。
[0018]本专利技术还提供油酰乙醇胺在构建围产期心肌病小鼠模型中的应用。
[0019]本专利技术的有益效果：本专利技术提供一种围产期心肌病小鼠模型的构建方法，本专利技术通过对孕中期的小鼠施加一定剂量的OEA构建围产期心肌病小鼠模型，建立得到的围产期心肌病小鼠模型呈现左心室扩张、心功能损伤、肺
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心比值升高的PPCM特点，可用于PPCM病因、PPCM发生发展机制和相关治疗药物的开发研究。本专利技术的围产期心肌病小鼠模型的构建方法操作简单，构建成功率高，构建周期短。
附图说明
[0020]图1为N
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Oleoylethanolamine定量标准曲线图。
[0021]图2为利用靶向质谱技术检测正常孕妇胎盘与子痫前期伴发PPCM孕妇的胎盘中OEA的含量；其中A为靶向质谱检测正常孕妇与患者孕妇胎盘样品中OEA的含量；B为15例正常孕妇胎盘与20例PPCM孕妇胎盘中OEA浓度。
[0022]图3为OEA诱导PPCM小鼠模型构建策略图。
[0023]图4为实施例2中对四组小鼠进行围产期心肌病(PPCM)相关特征检测结果；其中A为小鼠心脏B超影像测量心功能及室壁厚度；B为小鼠心脏左室后壁厚度(LVPW)、左室内径(LVID)和左室壁与内径比值；C为小鼠心功能射血分数与心脏输出量数值；D为怀孕组小鼠的肺组织代表性照片，以及各组小鼠肺重与心重比值；E为小鼠心脏组织切片H&E染色结果；
F为怀孕组小鼠心脏组织切片WGA染色结果，绿色荧光为WGA标识的细胞膜，蓝色荧光为DAPI；G为怀孕组母鼠血压监测结果；H为孕第18.5天胎鼠与胎盘重量。
具体实施方式
[0024]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
[0025]实验材料：
[0026](1)C57BL/6小鼠：购自优达(广州)生物技术有限公司。
[0027](2)OEA溶液配制：将OEA溶于含10％ DMSO的生理盐水配制成100本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种围产期心肌病小鼠模型的构建方法，其特征在，包括以下步骤：(1)将雌鼠与雄鼠合笼，第二天观察到阴道栓确定该雌鼠怀孕并定为怀孕0.5天；(2)于孕中期开始对步骤(1)孕鼠进行油酰乙醇胺给药至妊娠结束，得所述围产期心肌病小鼠模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在，所述步骤(1)中的雌鼠与雄鼠周龄为10
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12周。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在，所述步骤(1)中的雌鼠与雄鼠的比例为雌鼠：雄鼠＝2：1。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在，所述油酰乙醇胺的给药方式包括灌胃。5.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳晓婧，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：