一种PBMC分离置换方法技术

本申请公开了一种PBMC分离置换方法，涉及细胞分离技术领域。包括分离阶段与置换阶段，所述分离阶段和所述置换阶段均采用一进两出的离心杯，所述离心杯设有内口、外口和中心口；所述分离阶段包括以下步骤：将梯度液从所述外口泵入所述离心杯内，再从所述外口泵入血液样本，所述离心杯旋转并从所述中心口排出内层血浆；进行离心分离，同时从所述外口持续泵入梯度液；离心分离后，从所述内口排出红细胞，后再从所述外口排出红细胞；收集产品液和梯度液并从所述内口排出至产品袋，得到待置换液，再从所述外口排废液；将所述待置换液从所述内口泵入所述离心杯内，开始所述置换阶段，置换结束后，排出洗涤废液，即得PBMC产品液。即得PBMC产品液。即得PBMC产品液。

【技术实现步骤摘要】
一种PBMC分离置换方法


[0001]本申请涉及细胞分离
，特别涉及一种PBMC分离置换方法。

技术介绍

[0002]PBMC是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。PBMC主要的分离方法是Ficoll
‑
hypaque(聚蔗糖
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泛影葡胺)密度梯度离心法，利用外周血单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同，红细胞和多核白细胞的比重在1.092左右，单个核细胞的比重为1.075
‑
1.090，血小板为1.030
‑
1.035，通过一种介于1.075
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1.092之间而近于等渗的溶液(ficoll梯度液)作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，可将各种血细胞与单个核细胞分离。操作者一般基于密度梯度分布原理，使用人工或者自动化设备，把血液(外周血、脐带血或者单采血)添加到分离液中进行离心分离。
[0003]目前对于自动化细胞分离设备制备PBMC，主要基于活塞式离心杯或是1进1出的离心杯实现，但在进行PBMC分离时往本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PBMC分离置换方法，包括分离阶段与置换阶段，其特征在于，所述分离阶段和所述置换阶段均采用一进两出的离心杯，所述离心杯设有内口、外口和中心口；所述分离阶段包括以下步骤：S11、将梯度液从所述外口泵入所述离心杯内，再从所述外口泵入血液样本，所述离心杯旋转并从所述中心口排出内层血浆；S12、进行离心分离，同时从所述外口持续泵入梯度液；S13、离心分离后，从所述内口排出红细胞，后再从所述外口排出红细胞；S14、收集产品液和梯度液并从所述内口排出至产品袋，得到待置换液，再从所述外口排废液；S15、将所述待置换液从所述内口泵入所述离心杯内，开始所述置换阶段，置换结束后，排出洗涤废液，即得PBMC产品液。2.根据权利要求1所述的PBMC分离置换方法，其特征在于，所述将梯度液从所述外口泵入所述离心杯内，再从所述外口泵入血液样本，所述离心杯旋转并从所述中心口排出内层血浆的步骤，包括：将梯度液从所述外口泵入所述离心杯内，所述离心杯旋转并在所述离心杯内形成梯度液柱面层；形成梯度液柱面层后，再将样品袋内的血液样本从所述外口泵入所述离心杯内，所述离心杯持续旋转，使血浆向所述离心杯中心层移动，所述离心杯填满后，从所述中心口排出内层血浆。3.根据权利要求2所述的PBMC分离置换方法，其特征在于，所述离心分离后，从所述内口排出红细胞，后再从所述外口排出红细胞的步骤，包括：先从所述内口排出红细胞至废液袋，并通过管路探测器探测从所述离心杯排出液体的状态，当内口层以内的红细胞排完，开始排梯度液时，结束从所述内口排废液；再从所述外口排出部分红细胞至废液袋。4.根据权利要求3所述的PBMC分离置换方法，其特征在于，所述步骤S13之后、所述步骤S14之前，还包括：通过梯度液将所述样品袋、所述废液袋与所述产品袋之间的公共管路中残留的红细胞清洗至废液袋；再通过梯度液将与所述离心杯连接的公共管路中残留的红细胞清洗至废液袋。5.根据权利要求1所述的PBMC分离置换方法，其特征在于，所述收集产品液和梯度液并从所述内口排出至产品袋，得到待置换液，再从所述外口排废液的步骤，包括：通过管路探测器探...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏东兵，
申请(专利权)人：中博瑞康上海生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：