白及或其药物制剂的UPLC特征图谱的构建方法及应用技术

本发明专利技术属于药物质量控制领域，涉及一种白及或其药物制剂的UPLC特征图谱的构建方法及应用，包括供试品溶液以及对照溶液的制备；将对照溶液以及供试品溶液分别注入液相色谱中，获取特征图谱；液相色谱采用的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm～2.2μm；以乙腈为流动相A，以0.008%~0.015%磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱；流速为每分钟0.25ml~0.35ml；柱温为15℃~25℃；采用紫外检测器检测，检测波长为265nm~285nm。本发明专利技术具有操作简单、检测成本低、检测效率高等优势，并可为白及药材真伪鉴别提供有效依据。药材真伪鉴别提供有效依据。药材真伪鉴别提供有效依据。

【技术实现步骤摘要】
白及或其药物制剂的UPLC特征图谱的构建方法及应用


[0001]本专利技术属于药物质量控制领域，涉及一种UPLC特征图谱的构建方法及其应用，尤其涉及一种白及或其药物制剂的UPLC特征图谱的构建方法及应用。

技术介绍

[0002]白及为兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.的干燥块茎，味苦、甘、涩，性微寒，归肺、肝、胃经，具收敛止血，消肿生肌之功效，现代临床广泛用于治疗咯血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂、肛肠疾病、妇科肌瘤、肿瘤栓塞及用于前列腺手术等。白及的化学成分主要有联苄类、二氢菲类、联菲类、联菲醚类、菲并吡喃类、联苄葡萄糖苷类、甾体、三萜等(任华忠，何毓敏，杨丽.白及化学成分及其药理活性研究进展[J].亚太传统医药，2009，5(2)：134
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140)。
[0003]现代药理作用与临床应用研究表明，白及在止血(WANG w，MENG H.Cytotoxic，anti
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inflammatory and hemostatic spirostane
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steroidal saponins from the ethanol extract of the roots of Bletilla striata[J].Fitoterapia，2015，101：12
‑
18)、抗菌(GUO JJ，DAI BL，CHEN NP，et al.The anti
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Staphylococcus aureus activity of the phenanthrene fraction from fibrous roots of Bletilla striata [J].BMC Complement Altern Med，2016，16(1)：491)、抗炎(吴梅，田守征，郑永仁，等.白及苦味成分的分离、鉴定及抗炎药效学初研[J].时珍国医国药，2019，30(2)：372
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374)、抗肿瘤(SUNA，LIU J，PANG S，et al.Two novel phenanthraquinones with anti
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cancer activity isolated from Bletilla striata[J].Bioorg Med Chem
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Lett，2016，26(9)：2375
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2379)、促进伤口愈合(WangC，Sun J，LuoY，et al.Apolysaccharideisolatedfrom the medicinal herb Bletilla striata induces endothelial cells proliferation and vascular endothelial growth factor expression in vitro[J].Biotechnology letters，2006，28(8)：539
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543)等方面都有较好的疗效。
[0004]中药配方颗粒是由单味中药饮片经水提、浓缩、干燥、制粒而成，是饮片改革的一种新形式，相比于传统饮片汤剂具有方便携带、使用简单的特性，能够满足现代快节奏工作与生活的要求。白及配方颗粒是白及饮片经过现代工艺提取、浓缩、干燥、制粒而成，保留了白及的临床效果，同时兼顾了使用的便携性。但与药材和饮片相比，白及配方颗粒已失去固有的形态，难以通过简单的性状评价其优劣。目前市场上流通的白及颗粒质量参差不齐，因此制定能够全面、稳定、快速控制白及配方颗粒质量的标准方法显得尤为重要。
[0005]白及现行法定质量标准收录于《中国药典》2020年版一部，主要由性状、显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分、二氧化硫残留量检查项和含量测定(1，4
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二[4
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(葡萄糖氧)苄基]‑2‑
异丁基苹果酸酯)组成。这些检测项目在一定程度上能反映白及药材的质量，但由于中药有效成分多样性及复杂性，单一成分含量测定不足以说明中药材的质量，缺乏专属性，质量控制效果有限。
[0006]中药特征图谱既能全面反映中药个体之间的共性，亦能反映中药种群之间的唯一
性。运用中药特征图谱控制中药质量，比目前沿用的方法提供的信息更为全面、丰富，可以为白及质量控制提供全面的质量控制手段。
[0007]关于白及药材特征图谱或指纹图谱的研究较多，但检测时间多数超过45min。姚玥等人建立了不同产地白及药材的HPLC指纹图谱，以全国11省共60份白及属植物作为样本，确定了8个药材指纹图谱共有峰，其指纹图谱相似度在0.623～0.994之间(姚玥，夏琳颖，黄桑琦，沈徐婷，蒋福升，丁志山，基于UPLC指纹图谱结合薄层色谱的白及药材质量标准讨论[J].药物资讯，2020，9(3)：109
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116)。周海婷等人将militarine作为特征峰，建立了野生和栽培的白及药材的特征图谱，野生药材相似度均达0.94以上，栽培药材相似度达到0.90以上，野生药材与栽培药材比较相似度差异较大(周海婷，陈志敏，李文兵，权亮，张希，胡昌江，赵永峰.野生与栽培白及HPLC指纹图谱建立及天麻素与militarine含量测定[J].中药材，2018，41(11)：2527
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2533)。郑江萍等提取9个指纹图谱共有峰建立了白及的高效液相指纹图谱，通过相似度评价软件对不同产地的白及进行比较和归类，又通过聚类分析比较各产地之间的差异。发现湖北竹溪和湖北竹山的白及样品中militarine含量较高。通过主成分分析对白及的HPLC信号进行特征提取，建立特征信号峰与白及质量间的对应关系，为科学评价与有效控制白及药材质量提供了新方法(郑江萍，雷震，黄良永.白及药材HPLC指纹图谱研究[J].中国药师，2013，16(11)：1611
‑
1614.)。
[0008]关于白及配方颗粒的质量研究主要集中在薄层鉴别和含量测定上，通过薄层色谱，测定白及多糖、肉桂酸、1，4
‑
二[4
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(葡萄糖氧)苄基]‑2‑
异丁基苹果酸酯等的含量对白及配方颗粒、药材进行质量评价，存在无法整体、全面地体现白及配方颗粒质量的问题。在特征图谱或指纹图谱研究方面，目前仅有一篇文献对白及配方颗粒展开了指纹图谱研究。张蕾建立了白及饮片指纹图谱共有模式，标定了13个共有指纹峰，各批次样品平均相似度大于0.902。依据此方法对10批白及配方颗粒(6个厂家)不同批次白及配方颗粒进行HPLC指纹图谱研究，发现其共有指纹峰数量减少为11个，且指纹图谱相似度较低。分别将各批配方颗粒与饮片及水提液的共有模式进行比较，有4批次与饮片相似度较低(小于0.1)，推测可能与白及药材来源、制备工艺差别及制备过程中发生化学成分的损失有关，白及配方颗粒的HPLC指纹图谱需要扩大样品量进一步研究(张蕾.白及配方颗粒质量标准初步研本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种白及或其药物制剂的UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：1）供试品溶液的制备：所述供试品是白及或其药物制剂，所述白及或其药物制剂包括白及药材、白及饮片、白及标准汤剂或白及配方颗粒；2）对照溶液的制备：所述对照溶液包括对照药材参照物溶液以及对照品参照物溶液；所述对照品参照物溶液采用的对照品是1，4
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二[4
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（葡萄糖氧）苄基]
‑2‑
异丁基苹果酸酯以及4
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（葡萄糖氧基）
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肉桂酸葡萄糖氧基苄酯；所述对照药材参照物溶液采用的对照药材是白及对照药材；3）将对照溶液以及供试品溶液分别注入液相色谱中，获取特征图谱；所述液相色谱采用的条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm～2.2μm；以乙腈为流动相A，以0.008%~0.015%磷酸溶液为流动相B，采用梯度洗脱；流速为每分钟0.25ml~0.35ml；柱温为15℃~25℃；采用紫外检测器检测，检测波长为265nm~285nm。2.根据权利要求1所述的白及或其药物制剂的UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤3）中特征图谱中，供试品溶液的色谱中应呈现10个特征峰，并应与对照药材参照物溶液色谱中的10个特征峰的保留时间相对应，其中峰2、峰7的保留时间应分别与相应的对照品参照物峰保留时间相对应；与4
‑
（葡萄糖氧基）
‑
肉桂酸葡萄糖氧基苄酯参照物相对应的峰为S1峰，计算峰1、峰3、峰4、峰5、峰6与S1峰的相对保留时间；与1，4
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二[4
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（葡萄糖氧）苄基]
‑2‑
异丁基苹果酸酯参照物相对应的峰为S2峰，计算特征峰8、峰9、峰10与S2峰的相对保留时间；白及药材、饮片、标准汤剂或配方颗粒的相对保留时间均应在规定值的
±
10%之内，峰1的规定值为0.63、峰3的规定值为1.09、峰4的规定值为1.22、峰5的规定值为1.30、峰6的规定值为1.34、峰8的规定值为1.24、峰9的规定值为1.40以及峰10的规定值为1.61。3.根据权利要求2所述的白及或其药物制剂的UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤3）中液相色谱采用的条件为色谱柱采用Poroshell EC
‑
C18，所述色谱柱的规格是100mm
×
2.1mm，1.9μm；以乙腈为流动相A，以0.01%磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；流速为0.3ml/min；柱温为20℃；检测波长为270nm。4.根据权利要求3所述的白及或其药物制剂的UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤3）中梯度洗脱的方式是：0～4分钟，流动相A的比例是从15%递增至24%，流动相B的比例是从85%降至76%；4～6分钟，流动相A的比例是从24%递增至32%，流动相B的比例是从76%降至68%；6～11分钟，流动相A的比例是从32%递增至38%，流动相B的比例是从68%降至62%；11～13分钟，流动相A的比例是从38%递增至55%，流动相B的比例是从62%降至45%；13～15分钟，流动相A的比例是从55%递增至80%，流动相B的比例是从45%降至20%；15～16分钟，流动相A的比例是80%，流动相B的比例是20%。5.根据权利要求4所述的白及或其药物制剂的UPLC特征图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤3）是采用超高效液相色谱仪进行测定的液相色谱；所述对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液以及供试品...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑谭，袁健，祝倩倩，王协和，李松，陈盛君，张钰萍，翟燕娟，周海琴，
申请(专利权)人：江阴天江药业有限公司，
类型：发明
国别省市：