末端脱氧核苷酸转移酶及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种末端脱氧核苷酸转移酶及其制备方法，制备方法包括步骤：提供野生型末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)，其具有N端和C端；选取野生型TdT Loop区域的氨基酸位点作为切割位点进行切割，生成两段氨基酸序列；利用柔性氨基酸连接子将所述两段氨基酸序列连接起来，并使得柔性氨基酸连接子的一端与野生型TdT原有的N端相连，另一端与野生型TdT原有的C端相连，得到具有新的N端和C端的末端脱氧核苷酸转移酶突变体。本发明专利技术中通过不同切割位点的选择，可以获得一系列不同的具有新的N端和C端的TdT突变体，为TdT的蛋白质工程提供了更加丰富的C端和N端选择，进而丰富了TdT上实现的蛋白质修饰操作和效果。质修饰操作和效果。质修饰操作和效果。

【技术实现步骤摘要】
末端脱氧核苷酸转移酶及其制备方法


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，尤其涉及一种末端脱氧核苷酸转移酶及其制备方法。

技术介绍

[0002]人工DNA合成技术是现代基因技术的重要基础。DNA人工合成的关键方法包括：柱式化学寡核苷酸合成、芯片化学寡核苷酸合成、寡核苷酸纯化、寡核苷酸拼装、基因合成纠错与克隆筛选、大片段基因合成组装以及DNA的新一代酶法合成。DNA人工合成的传统方法大多依赖亚磷酰胺化学完成反应，近年来以酶促合成为原理的第三代DNA人工合成逐渐崛起，成为前景广阔的DNA人工合成方法，其中以末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)为核心的酶促合成技术是极具前景的DNA合成策略。
[0003]新型核苷酸酶促合成法是利用非模版依赖性的TdT进行体外的寡核苷酸片段合成，即TdT是生物酶促法合成寡聚核苷酸的重要工具。TdT最先由Bollum发现并提出该酶可用于单链寡核苷酸的合成，随后Schott和Schrade研究发现，TdT对四种核苷酸的偏好性差异小、偶联效率高，持续合成和延伸单链DNA可产生长达8000nt的均聚物。为了实现TdT催化的可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种末端脱氧核苷酸转移酶突变体的制备方法，其特征在于，包括步骤：提供野生型末端脱氧核苷酸转移酶，其具有N端和C端；选取所述野生型末端脱氧核苷酸转移酶Loop区域的氨基酸位点作为切割位点进行切割，生成两段氨基酸序列；利用柔性氨基酸连接子将所述两段氨基酸序列连接起来，并使得所述柔性氨基酸连接子的一端与所述野生型末端脱氧核苷酸转移酶原有的N端相连，另一端与所述野生型末端脱氧核苷酸转移酶原有的C端相连，得到具有新的N端和C端的末端脱氧核苷酸转移酶突变体。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述柔性氨基酸连接子的氨基酸序列由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列重复构建而成的8
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10个氨基酸残基构成。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述柔性氨基酸连接子的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述选取所述野生型末端脱氧核苷酸转移酶Loop区域的氨基酸位点作为切割位点进行切割的步骤具体包括：删除所述野生型末端脱氧核苷酸转移酶中没有催化功能的氨基酸后，确定所述野生型末端脱氧核苷酸转移酶三维结构中的若干个Loop区域，从原有的N端开始，依次在若干个Loop区域中选取氨基酸位点作为切割位点进行切割。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述野生型末端脱氧核苷酸转移酶选自小鼠来源的野生型末端脱氧核苷酸转移酶、...

【专利技术属性】
技术研发人员：阮华明，陈柳青，於邱黎阳，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：