一种重组类胶原蛋白的水解肽、其制备方法及其用途技术

本公开提供了一种重组类胶原蛋白的水解肽及其应用，本公开的水解肽是氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白的水解肽，该水解肽能够促进细胞迁移和黏附，还具有修复、抗氧化、补水保湿和抗衰的功效。将水解肽与适宜的原、辅料配合使用时，可制成保健品、化妆品、医美产品和生物医学产品。医美产品和生物医学产品。

【技术实现步骤摘要】
一种重组类胶原蛋白的水解肽、其制备方法及其用途


[0001]本公开属于基因工程
，具体地涉及一种氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白的水解肽、其制备方法及其用途。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是哺乳动物体内最常见的蛋白，其含量约占总蛋白量30％左右。迄今为止，各国科学家至少发现和鉴定了28种胶原蛋白。作为一种结构蛋白，胶原蛋白广泛存在于皮肤、结缔组织和骨骼中，它在保持细胞外环境、维持组织和器官生理功能，以及修复损伤等方面发挥重要的作用。与人工合成的高分子材料相比，胶原蛋白具有良好的生物相容性和可降解性。因此，胶原蛋白被广泛地应用于保健品、化妆品和医疗美容等行业。
[0003]天然胶原蛋白具有一种复杂的、特征性的三螺旋结构，该结构由三条多肽链通过链间氢键连接形成。该三螺旋结构是以3个氨基酸残基为基本重复序列的左手螺旋，这3个氨基酸通常为Gly
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Y。同时，生物体通过复杂的酶促体系对胶原蛋白进行复杂的修饰，未经修饰的多肽链将无法形成正确的三螺旋结构，从而缺乏胶原蛋白应有的生物学功能。然而，作为拥有较为复杂结构的高分子物质，天然胶原蛋白通常不溶于水，也不易透过皮肤表层到达其发挥生物学功能的部位——皮肤基底层；通常需要利用化学手段处理后才能被人体利用。生产胶原蛋白的传统方法是利用酸碱消化猪、马、牛、鸡或鱼的骨骼和皮肤等组织，获得水解胶原蛋白肽。水解胶原蛋白肽分子量一般小于10kDa，其水溶性和渗透性相较于天然胶原蛋白显著改善。同时，少部分保留功能区段的水解胶原蛋白肽依然具有天然胶原蛋白的生物学功能。
[0004]但是，利用上述方法获得的水解胶原蛋白肽也有较为明显的技术缺陷。大部分片断已经失活，无法发挥其生物学功能，造成大量的物料浪费。其次，化学消解法一般是随机水解肽键，导致所得产物的氨基酸序列和长度不固定，无法准确控制。加之动物批次间的不固定，加剧了批次间水解胶原蛋白肽质量的波动性，导致无法大规范工业化生产。第三，提取自其他动物的胶原蛋白无法与人体相容，具有较大的致敏性甚至免疫排斥的风险。最后，动物源提取物的病毒携带风险也难以避免。总之，提取自动物组织的水解胶原蛋白肽的应用也相对有限。
[0005]蛋白酶是一类能够催化蛋白肽键水解的酶的总称。根据识别位点和作用方式，可以将蛋白酶分为外肽酶和内肽酶。外肽酶对氨基酸残基选择性较低，可以从蛋白酶的游离氨基末端或游离羧基末端将肽键逐个水解，释放出游离氨基酸。而内肽酶具有较高的底物选择性，可以识别并水解一种或一类特定氨基酸所形成的肽键。利用特定的内肽酶催化已知序列的胶原蛋白水解，可以得到特定序列的水解胶原蛋白肽，这保证了水解胶原蛋白肽氨基酸序列和长度的可重复性。因此，本领域需要基于蛋白酶生物催化的手段制备具有生物活性的水解胶原蛋白肽的技术方案。

技术实现思路

[0006]本公开以氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白为底物，采用蛋白酶对其进行水解，得到水解肽。水解肽能够促进细胞增殖和迁移，还具有修复、抗氧化、补水保湿的功效。将水解肽与适宜的原、辅料配合使用时，可制成保健品、化妆品和医美产品等。
[0007]本公开提供一种重组类胶原蛋白的水解肽，所述重组类胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。
[0008]本公开还提供一种多核苷酸，其编码本公开所述的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白。在一些实施方案中，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO：2所示。
[0009]本公开还提供一种重组类胶原蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0010]在一些实施方案中，所述水解肽为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白在蛋白酶作用下水解得到的。在一些实施方案中，所述蛋白酶为胞内蛋白酶。在一些实施方案中，所述胞内蛋白酶为重组赖氨酰内切酶。在一些实施方案中，所述水解肽为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白在胞内蛋白酶作用下水解得到的，水解反应起始时底物与胞内蛋白酶的质量浓度选自1：50
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2000，优选1：100、1：200、1：300、1：400、1：500、1：600、1：700、1：800、1：900、1：1000、1：1100、1：1200、1：1300、1：1400、1：1500、1：1600、1：1700、1：1800、1：1900、1：2000。
[0011]在一些实施方案中，所述水解肽为LC1，其为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白和胞内蛋白酶按照蛋白质量浓度比1:100混合，于28℃、pH＝7.0(50mM Tris
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HCl)下水解16h，95℃灭活得到。在一些实施方案中，所述水解肽为LC2，其为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白和胞内蛋白酶按照蛋白质量浓度比1:500混合，于30℃、pH＝8.0(100mM Tris
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HCl)下水解12h，95℃灭活得到。在一些实施方案中，所述水解肽为LC3，其为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白和胞内蛋白酶按照蛋白质量浓度比1:800混合，于37℃、pH＝8.5(100mM Tris
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HCl)下水解8h，95℃灭活得到。在一些实施方案中，所述水解肽为LC4，其为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白和胞内蛋白酶按照蛋白质量浓度比1:1500混合，于42℃、pH＝7.5(50mM Tris
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HCl)下水解2h，95℃灭活得到。
[0012]本公开还提供氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白的水解肽在制备抗衰产品中的用途。本公开还提供氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白的水解肽在制备修复产品中的用途。本公开还提供氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白的水解肽在制备抗氧化产品中的用途。本公开还提供氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白的水解肽在制备补水保湿产品中的用途。
[0013]本公开还提供氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白的水解肽的制备方法，包括底物氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白与蛋白酶混合，于合适温度、合适pH条件下反应，灭活。在一些实施方案中，所述蛋白酶为胞内蛋白酶。在一些实施方案中，所述胞内蛋白酶为重组赖氨酰内切酶蛋白酶。在一些实施方案中，所述合适温度选自20℃～45℃，优选25℃～45℃，更优选25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃、41℃、42℃。在一些实施方案中，所述合适pH选自6.5～9.0，优选7.0～8.5，更优选7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5。在一些实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组类胶原蛋白的水解肽，所述重组类胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.根据权利要求1所述的水解肽，其为氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的重组类胶原蛋白在蛋白酶作用下水解得到的，所述蛋白酶优选胞内蛋白酶。3.根据权利要求1所述的水解肽，其为氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的重组类胶原蛋白在胞内蛋白酶作用下水解得到的，水解反应起始时底物与胞内蛋白酶的质量浓度选自1：50
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2000，优选1：100、1：200、1：300、1：400、1：500、1：600、1：700、1：800、1：900、1：1000、1：1100、1：1200、1：1300、1：1400、1：1500、1：1600、1：1700、1：1800、1：1900、1：2000。4.根据权利要求1所述的水解肽，选自：水解肽LC1，其为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白和胞内蛋白酶按照蛋白质量浓度比1:100混合，于28℃、pH＝7.0(50mMTris
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HCl)下水解16h，95℃灭活得到；或水解肽LC2，其为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重组类胶原蛋白和胞内蛋白酶按照蛋白质量浓度比1:500混合，于30℃、pH＝8.0(100mMTris
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HCl)下水解12h，95℃灭活得到；或水解肽LC3，其为氨基酸序列如SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂俊伟，谢佳荣，孙璞，曹泽彧，李治林，朱莉，闻鹏，冯速，
申请(专利权)人：南京诺唯赞生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：