一种重组人源化纤连蛋白rhFEB及应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，公开了一种重组人源化纤连蛋白rhFEB及应用。本发明专利技术通过对不同的多肽类物质进行分析、筛选、组合，利用基因工程手段，在人源化纤连蛋白EDB片段N端顺序插入人III型胶原促细胞增殖的功能基序，获得一种多肽类融合蛋白rhFEB，其氨基序列如SEQ ID NO:1所示。通过基因工程的方法在体外进行表达纯化，得到具抗衰性能的重组人源化纤连蛋白rhFEB，所述rhFEB具有较高的促细胞恢复能力，可溶性、高吸收性。本发明专利技术的重组人源化纤连蛋白rhFEB具有抗衰，并且有影响细胞粘附、促进微小血管形成、修复受损皮肤细胞的功能，可作为原料应用于化妆品、护肤品及细胞培养基质等领域中。领域中。领域中。

【技术实现步骤摘要】
一种重组人源化纤连蛋白rhFEB及应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种重组人源化纤连蛋白rhFEB及应用。

技术介绍

[0002]抗衰老指抑制、延缓机体的衰老过程。皮肤和其他器官一样，随着年龄不断增加，都逐渐趋向衰老，而抗衰老的意义就是减缓肌肤衰老的脚步，让人的皮肤更光滑细腻，减少皱纹。
[0003]真皮细胞外基质(ECM)在皮肤老化中起着至关重要的作用，它们的损伤与皮肤老化密切有关，胶原蛋白流失会直接导致皮肤下垂、老化、弹性下降。ECM蛋白质主要包括胶原蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白和层粘连蛋白。纤连蛋白(FN)有多个功能性结构域，在细胞黏附，迁移发挥着重要作用，同时还可与肝素，整合素受体，胶原等结合可启动各种细胞内信号通路，此外，还可维持ECM的稳定性。FN第12至14个重复序列形成混杂的结合结构域，称为II型肝素结合结构域，能与大多数血小板衍生生长因子相互作用。II型肝素结合结构域通过与细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合，在细胞粘附中也起着关键作用。纤连蛋白的“细胞结合域”FNIII10(后文简称FN10)包含有RGD序列(Arg
‑
Gly
‑
Asp)，具有促进细胞附着的位点，可与细胞表面上多种整合素(如α
Ⅴ
β3、α
Ⅴ
β5、α
Ⅴ
β6等)相结合。整合素来自于血液的干细胞，如造血干细胞，骨髓干细胞表面都表达整合素β3。干细胞位于由邻近细胞、ECM、自分泌和旁分泌可溶性生长因子等组成的环境中。因此，研发一种抗衰老作用优异的相关肽，是抗衰老产品研究的重点方向。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种重组人源化纤连蛋白rhFEB及应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0006]第一方面，本专利技术提供了一种重组人源化纤连蛋白rhFEB，其氨基序列如SEQ ID NO:1所示。
[0007]本专利技术利用基因工程手段，在人源化纤连蛋白EDB片段N端顺序插入人III型胶原促细胞增殖的功能基序，形成新的一种多肽融合蛋白，通过基因工程的方法在体外进行表达纯化，得到具抗衰性能的重组人源化纤连蛋白rhFEB，其具有高渗透性、高修复性、高安全性等特点。本专利技术的重组人源化纤连蛋白rhFEB具有抗衰，并且有影响细胞粘附、促进微小血管形成、修复受损皮肤细胞的功能，在护肤品和化妆品中具有广阔的应用前景。
[0008]第二方面，本专利技术提供了一种编码所述的重组人源化纤连蛋白rhFEB的基因。
[0009]作为本专利技术所述的基因的优选实施方式，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0010]第三方面，本专利技术提供了一种融合多肽，包含所述的重组人源化纤连蛋白rhFEB。
[0011]作为本专利技术所述的融合多肽的优选实施方式，还包含在所述重组人源化纤连蛋白rhFEB的N端和/或C端的至少一个His标签。
[0012]作为本专利技术所述的融合多肽进一步的优选实施方式，其氨基序列如SEQ ID NO:3所示。
[0013]作为本专利技术所述的融合多肽进一步的优选实施方式，其核苷酸编码序列如SEQ ID NO:4所示。
[0014]第四方面，本专利技术提供一种重组表达载体，包含上述基因。优选的，所述表达载体为pET
‑
20b。
[0015]第五方面，本专利技术提供一种重组菌，包含上述重组表达载体。优选的，所述重组菌的宿主细胞为BL21。
[0016]第六方面，本专利技术将所述的重组人源化纤连蛋白rhFEB、所述的基因、所述的融合多肽在制备a～d任一种产品中应用：
[0017]a.用于细胞抗光老化的化妆品或护肤品；
[0018]b.促细胞修复的化妆品或护肤品；
[0019]c.促细胞修复的细胞培养基质；
[0020]d.抗皮肤衰老和修复的制剂；优选的，所述制剂为化妆品或护肤品。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0022]本专利技术通过对不同的多肽类物质进行分析、筛选、组合，利用基因工程手段，在人源化纤连蛋白EDB片段N端顺序插入人III型胶原促细胞增殖的功能基序，获得一种多肽类融合蛋白rhFEB。通过基因工程的方法在体外进行表达纯化，得到具抗衰性能的重组人源化纤连蛋白rhFEB，所述rhFEB具有较高的促细胞恢复能力，可溶性、高吸收性。本专利技术的重组人源化纤连蛋白rhFEB具有抗衰，并且有影响细胞粘附、促进微小血管形成、修复受损皮肤细胞的功能，可作为原料应用于化妆品、护肤品及细胞培养基质等领域中。
附图说明
[0023]图1为本专利技术实施例中所用的大肠杆菌重组表达质粒pET20b
‑
rhFEB的构建图谱。
[0024]图2为本专利技术的纤连蛋白rhFEB的核酸DNA序列的扩增片段的琼脂糖凝胶电泳图。图中，“M”指的是琼脂糖凝胶电泳marker，
“‑”
指的是阴性对照，“+”指的是目的片段的扩增，约1860bp。
[0025]图3为本专利技术的rhFEB的蛋白菌种诱导聚丙烯酰胺凝胶电泳图。图中，“M”指的是聚丙烯酰胺凝胶电泳marker，“1”指的是未诱导前的菌种的样品，“2”指的是诱导后的菌种生产蛋白的样品。
[0026]图4为本专利技术的rhFEB的蛋白进行蛋白免疫印迹实验的结果。图中，“M”指的是聚丙烯酰胺凝胶电泳marker，“1”指的是目的蛋白的样品。
[0027]图5及图6为本专利技术的rhFEB对Hacat细胞粘附检测的结果。本专利技术的rhFEB对细胞促粘附能力有明显作用，且与EGF的促粘附作用功效相似。
[0028]图7及图8为本专利技术的rhFEB的细胞划痕修复活性检测结果。图7显示细胞划痕实验给药24h和48h后。结果显示，本专利技术的rhFEB的细胞划痕修复活性对于对照组有明显修复效果，且与EGF功效相近。
[0029]图9及图10为本专利技术的rhFEB对于HSF细胞紧致、抗皱功效实验结果。结果显示，本专利技术的rhFEB对细胞具有紧致、抗皱功效的作用。
[0030]图11为本专利技术的rhFEB对弹性蛋白酶的抑制效果。
[0031]图12为本专利技术的rhFEB对巨噬细胞表型向M1转换的qpcr结果。
[0032]图13为本专利技术的rhFEB诱导ECV304细胞管腔形成。
[0033]图14为db/db小鼠创面给药后不同时间的创面恢复情况。
[0034]图15为db/db小鼠创面愈合率。
[0035]图16为db/db小鼠给药29d后创面组织HE染色。结果显示，给药组rhFEB毛囊形成情况最好，表皮厚度没有显著性差异。
具体实施方式
[0036]为更好地说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人源化纤连蛋白rhFEB，其特征在于，其氨基序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种编码权利要求1所述的重组人源化纤连蛋白rhFEB的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。4.一种融合多肽，其特征在于，包含权利要求1所述的重组人源化纤连蛋白rhFEB。5.根据权利要求4所述的融合多肽，其特征在于，还包含在所述重组人源化纤连蛋白rhFEB的N端和/或C端的至少一个His标签。6.根据权利要求5所述的融合多肽，其特征在于，其氨基序列如SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏敦，毛新亮，陈文杰，贺晓静，闫永涛，李晓敏，
申请(专利权)人：完美广东日用品有限公司完美中国有限公司，
类型：发明
国别省市：