本发明专利技术公开了一种重组人源III型胶原蛋白多肽，所述蛋白多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。该序列是从已知序列的天然人体III型胶原蛋白中选择了亲水性和稳定性都较强的多肽片段进行了组合。组合后的序列的N端还具有一段序列，为酶切提供识别和切割的位点。SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列不仅具有强亲水性和稳定性，同时额外设计的多肽序列使重组的蛋白多肽在分泌后，还能够被酶切割，从而使分泌的重组蛋白多肽在切割后仅含有从天然人体III型胶原蛋白中选择出的亲水性和稳定性都较强的多肽片段的组合，使该重组蛋白多肽应用于人体中时，不会造成免疫排斥。不会造成免疫排斥。不会造成免疫排斥。
【技术实现步骤摘要】
重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽、表达载体、表达菌株、及其构建方法
[0001]本申请涉及生物工程
，特别是涉及一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽、一种表达重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的菌株、以及表达重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的菌株的构建方法。
技术介绍
[0002]胶原蛋白（collagen）是一种高分子蛋白质，是细胞外基质的主要成分，约占胶原纤维固体物的85%，占动物体内蛋白质总量的25
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30%，广泛存在于动物的结缔组织中，对机体和脏器起着支撑、保护等重要作用。已发现的胶原蛋白有很多种，它们在动物体内发挥不同生理功能。
[0003]其中的III型胶原蛋白，由位于染色体2q31上的COL3A1基因编码，属于纤维状胶原蛋白超家族，并广泛存在于结缔组织中，如皮肤、肺、肝、肠和血管系统等。天然胶原蛋白不易溶于水，且在本领域中，大多数胶原蛋白产品是从哺乳动物或海鱼的组织器官中提取的。这种提取方法效率低、产生严重废物，并且从动物中提取到的胶原蛋白可能存在动物病毒等，难以满足当前的市场需求。
技术实现思路
[0004]本申请主要的目的是提供一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽，一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达载体，一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达菌株，以及一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达载体的构建方法，用于解决上述技术问题。
[0005]本申请提供了一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽，所述蛋白多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0006]在一些实施例中，所述序列包括第一酶切位点；所述第一酶切位点能够被对应的酶识别并切割，从而得到分开的第一氨基酸序列部分和第二氨基酸序列部分；所述第二氨基酸序列部分的序列如SEQ ID NO. 2所示。
[0007]在一些实施例中，所述第一氨基酸序列部分的序列为：LEKR；所述对应的酶为Kex2酶。
[0008]本申请还提供了一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达载体，包括：载体部分和目标核苷酸序列，其中，所述目标核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示，所述目标核苷酸序列用于表达如SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列。
[0009]在一些实施例中，所述目标核苷酸序列包括第一核苷酸序列部分和第二核苷酸序列部分；所述第二核苷酸序列部分用于表达如SEQ ID NO. 2所示的第二氨基酸序列部分。
[0010]本申请还提供了一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达菌株，包括：巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris GS115；以及载体，所述载体上连接有如SEQ ID NO. 3所示的核苷酸序列；其中，所述表达菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(保藏中心地址：北京
市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCCNO.25516，保藏日期：2022年8月10日。
[0011]本申请还提供了一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达载体的构建方法，包括：获取如SEQ ID NO. 3所示的目标核苷酸序列；通过双酶切，将所述目标核苷酸序列连接至载体的两个酶切位点之间。
[0012]在一些实施例中，所述载体为用于在真核细胞中进行表达的载体；所述酶切位点为：EcoR I和Not I。
[0013]本专利技术从已知序列的天然人体III型胶原蛋白中选择了亲水性和稳定性都较强的多肽片段进行了组合。除了从天然人体III型胶原蛋白中选择的片段之外，还在该组合的N端额外设计了一段序列，为酶切提供识别和切割的位点，从而得到如SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列。这样，SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列不仅具有强亲水性和稳定性，同时额外设计的多肽序列使重组的蛋白多肽在分泌后，还能够被酶切割，从而使分泌的重组蛋白多肽仅含有从天然人体III型胶原蛋白中选择出的亲水性和稳定性都较强的多肽片段的组合，而不包含载体启动子后的任何多余氨基酸残基序列。这样该重组蛋白多肽应用于人体中时，不会造成免疫排斥，从而能够安全应用在生物医用材料、化妆品等领域。
附图说明
[0014]本申请将结合附图对实施方式进行说明。本申请的附图仅用于描述实施例，以展示为目的。在不偏离本申请原理的条件下，本领域技术人员能够轻松地通过以下描述根据所述步骤做出其他实施例。
[0015]图1是天然的人Ⅲ型胶原蛋白全序列所有氨基酸残基的疏水性分析结果；图2是本申请实施例提供的一种重组人Ⅲ型胶原蛋白多肽的所有氨基酸残基的疏水性分析结果；图3是本申请实施例提供的一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达载体的示意图；图4是本申请实施例提供的一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达载体的构建方法的流程图；图5是本申请实施例中确认表达载体线性化的琼脂糖电泳结果图；图6是本申请实施例中确认表达载体转入至巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris GS115菌株中的基因组电泳结果图；图7是本申请实施例中转化子小试表达重组人Ⅲ型胶原蛋白多肽的电泳结果图。
具体实施方式
[0016]下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。可以理解的是，此处所描述的具体实施例仅用于解释本申请，而非对本申请的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，附图中仅示出了与本申请相关的部分而非全部结构。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0017]本申请中的术语“第一”、“第二”等是用于区别不同对象，而不是用于描述特定顺
序。此外，术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备没有限定于已列出的步骤或单元，而是可选地还包括没有列出的步骤或单元，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
[0018]在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。
[0019]本申请实施例提供了一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0020]具体的，如SEQ ID NO. 1所示的重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽，包括第一酶切位点。第一酶切位点能够被对应的酶识别并切割，从而得到分开的第一氨基酸序列部分和第二氨基酸序列。其中，第一氨基酸序列部分用于在重组蛋白多肽表达并被分泌至细胞外之后，提供酶切的识别位点，第二氨基酸序列部分则仅含有用于构成重组人源Ⅲ型胶原蛋白的、从天然Ⅲ型胶原蛋白的筛选出的蛋白多肽片段。
[0021]可以理解的是，当重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽被表达时，是将蛋白多肽对应的核苷酸序列连接至表达载体中（例如质粒的MCS位置）。在翻译表达的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽，其特征在于，所述蛋白多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。2.如权利要求1所述的重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽，其特征在于，所述序列包括第一酶切位点；所述第一酶切位点能够被对应的酶识别并切割，从而得到分开的第一氨基酸序列部分和第二氨基酸序列部分；所述第二氨基酸序列部分的序列如SEQ ID NO. 2所示。3.如权利要求2所述的重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽，其特征在于，所述第一氨基酸序列部分的序列为：LEKR；所述对应的酶为Kex2酶。4.一种重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达载体，其特征在于，包括：载体部分和目标核苷酸序列，其中，所述目标核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示，所述目标核苷酸序列用于表达如SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列。5.如权利要求4所述的重组人源Ⅲ型胶原蛋白多肽的表达载体，其特征在于，所述目标核苷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕静，张磊，
申请(专利权)人：山东濡美生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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