一种胶原蛋白肽的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种胶原蛋白肽的制备方法及应用。提取皱纹盘鲍腹足肌肉中的Ⅰ型胶原蛋白；构建引物，提取获得基质金属蛋白酶MMP1催化结构域和基质金属蛋白酶MMP14催化结构域各自的目的基因片段；将基质金属蛋白酶MMP1催化结构域和基质金属蛋白酶MMP14催化结构域的目的基因片段分别与原核表达载体pET

【技术实现步骤摘要】
一种胶原蛋白肽的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及了一种蛋白肽的制备和应用，尤其是涉及一种胶原蛋白肽的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是一种脯氨酸、羟脯氨酸、甘氨酸和谷氨酸等约18种氨基酸构成的动物纤维性蛋白质，胶原蛋白可分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型。Ⅰ型结构在动物体内含量最多，主要由3条α肽链构成。其中，2条形成了二聚体肽链，即β肽链；3条α链构成的三聚体肽链称作γ肽链，即胶原分子。
[0003]低分子量胶原蛋白是一种通过胶原酶等降解的且具有5kDa以下的低分子量的胶原蛋白，也称为胶原蛋白肽，这些低分子量胶原蛋白进入人体后被人体内的胶原蛋白进一步降解，最终以氨基酸的形式被人体吸收。相对于大部分的蛋白质，胶原蛋白的分子量非常大，因此很难被人体吸收，所以为了方便人体消化吸收，将提取纯化的胶原蛋白通过蛋白酶将其降解为5kDa以下的肽的形式。
[0004]通常胶原蛋白主要利用猪皮、驴皮、牛皮、鱼类等作为原料。并通过酶水解胶原蛋白获得胶原蛋白肽，通常用于水解胶原蛋白的酶主要购自生物企业，属于商品化的水解酶。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备胶原蛋白肽的方法，其特征在于包括以下步骤：S1：提取皱纹盘鲍腹足肌肉中的Ⅰ型胶原蛋白；S2：构建引物，提取获得基质金属蛋白酶MMP1催化结构域和基质金属蛋白酶MMP14催化结构域各自的目的基因片段；S3：将基质金属蛋白酶MMP1催化结构域和基质金属蛋白酶MMP14催化结构域的目的基因片段分别与原核表达载体pET
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22b进行克隆连接制备获得各自的重组蛋白；S4：将基质金属蛋白酶MMP1催化结构域和基质金属蛋白酶MMP14催化结构域各自的重组蛋白再和Ⅰ型胶原蛋白一起混合处理制备获得所述的胶原蛋白肽。2.根据权利要求1所述的一种制备胶原蛋白肽的方法，其特征在于：所述S1具体为：S11、将皱纹盘鲍腹足和去离子水匀浆后搅拌，纱布过滤后弃上清液留沉淀处理；S12、沉淀用NaCl溶液洗涤，再离心留沉淀处理；S13、将沉淀加入NaOH溶液搅拌，然后离心留沉淀处理，接着用去离子水洗沉淀至上清液为中性，再离心处理取沉淀；S14、向所得沉淀中加入乙酸搅拌，再离心处理取沉淀；S15、在沉淀中加入乙酸，用胃蛋白酶酶解，再离心处理弃沉淀，再上清液中加入NaCl固体搅拌静置，再次离心处理弃上清液取沉淀；S16、将沉淀用乙酸溶解，再用Na2HPO4溶液透析，再离心处理取沉淀；S17、将沉淀先复溶于乙酸，再用乙酸透析，最后溶液冷冻干燥得到Ⅰ型胶原蛋白。3.根据权利要求2所述的一种制备胶原蛋白肽的方法，其特征在于：所述步骤S15中，胃蛋白酶与沉淀间的质量比为1∶200，酶解48h；加入NaCl固体后使NaCl终浓度为0.8mol/L。4.根据权利要求2所述的一种制备胶原蛋白肽的方法，其特征在于：所述步骤S16中，用pH 8.0的0.02mol/L的Na2HPO4溶液透析24h。5.根据权利要求2所述的一种制备胶原蛋白肽的方法，其特征在于：所述步骤S17中，用0.1mol/L的乙酸进行充分透析。6.根据权利要求1所述的一种制备胶原蛋白肽的方法，其特征在于：所述S2具体为：设计如SEQ ID No.1的基质金属蛋白酶MMP1催化结构域的正向引物和SEQ ID No.2的基质金属蛋白酶MMP1催化结构域的反向引物构成基质金属蛋白酶MMP1催化结构域的特异性引物，以及...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉磊，苏乐乐，刘华，曹敏杰，李婉玉，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：