B7H3抗体及包含其的双功能抗体制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及B7H3抗体及包含其的双功能抗体。本发明专利技术对B7H3的单克隆抗体8H9进行了人源化，人源化后的抗体能有效阻断B7H3引起的免疫抑制作用。此外，用人源化处理后的B7H3抗体或其抗原结合片段与4

【技术实现步骤摘要】
B7H3抗体及包含其的双功能抗体


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体而言，涉及B7H3抗体及包含其的双功能抗体。

技术介绍

[0002]B7H3(CD276)，是一种I型跨膜蛋白(Chapoval A.I.,et al.,(2001)Nat.Immunol.2:269)。B7H3存在于一些非免疫性成纤维细胞、内皮细胞和成骨细胞，以及一些免疫细胞，如B细胞，T细胞，单核细胞，树突状细胞(DC)或天然杀伤细胞(NK)。在许多恶性肿瘤中，B7H3的表达水平相当高。同时，B7H3具有较为广泛的调节免疫系统的功能。
[0003]专利US20020102264中的8H9克隆(Omburtamab)是一种针对B7H3的鼠源IgG1单克隆抗体。体外实验表明，8H9能与人的多种实体瘤结合(Modak S.,et al.,(2001)Cancer Res.61:4048
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54)，并能促进NK细胞对B7H3阳性肿瘤细胞的杀伤作用(Cheung N,et al.,(2003)Hybrid Hybridomics 22:209
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218)。动物实验显示，8H9能抑制肉瘤和脑瘤的生长(Modak S.,et al.,(2005)Cancer Biother.Radiopharm.20:534
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546；Luther N.,(2008)Neurosurgery 63:1167
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1174)。临床数据表明，8H9可以显著延长中枢神经系统实体瘤高危病人的生存期(Kramer K,et al.,(2007)J.Clin.Oncol.25,5465
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70)。同位素镥Lu177标记的8H9(Omburtamab)最近刚在美国批准用于成神经管细胞瘤的治疗。由于8H9是鼠源抗体，在用于人体治疗过程中会因其免疫原性而产生抗药抗体，从而降低其疗效并可能产生负作用。Mahiuddin等对8H9进行人源化和亲和力成熟改造(Mahiuddin A,et al.,(2015)J.Biol.Chem.290,30018
‑
29)，但其轻重链人源化程度相对较低，分别为70.5％和76.5％。因此，设计人源化程度更高的8H9抗体，可以减少临床使用过程中产生的免疫副反应，更好地增加临床疗效。
[0004]近年来，双功能抗体的构建为抗体新药研发创造了一个新的途径。不少双功能抗体新药已陆续进入临床试验，显示了比相应的单抗更强的治疗效果。因此，用人源化的8H9抗体与其他抗体或者结合片段【例如4
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1BB(CD137)抗体、VEGF
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Trap蛋白或SIPRα蛋白】构建双功能抗体，将可进一步促进免疫细胞的功能，提高抗体的抗肿瘤效果。

技术实现思路

[0005]本专利技术涉及B7H3抗体或其抗原结合片段，其包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1～3所示的重链互补决定区以及氨基酸序列依次如SEQ ID NO:4～6所示的轻链互补决定区。
[0006]本专利技术还涉及融合蛋白，其含有如上所述的B7H3抗体或其抗原结合片段。
[0007]本专利技术还涉及如上所述的B7H3抗体或其抗原结合片段及融合蛋白相关的核酸、载体及宿主细胞。
[0008]本专利技术还涉及如上所述的B7H3抗体或其抗原结合片段及融合蛋白的制备方法。
[0009]本专利技术还涉及药物组合物，其包括如上所述的B7H3抗体或其抗原结合片段，或如上所述的融合蛋白，或如上所述的偶联物。
[0010]本专利技术还涉及如上所述的B7H3抗体或其抗原结合片段，或如上所述的融合蛋白，或如上所述的偶联物在制备用以治疗B7H3阳性癌症或用以调节免疫系统的药物中的应用。
[0011]本专利技术对B7H3的单克隆抗体8H9的CDR区及FR区均进行了人源化，人源化后的抗体能有效阻断B7H3引起的免疫抑制作用。此外，用人源化处理后的B7H3抗体或其抗原结合片段与4
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1BB单克隆抗体、VEGF
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Trap蛋白和SIPRα蛋白构建成融合蛋白，进一步提高了抗体对免疫细胞的激活作用。所述抗体在制备应用于抑制癌细胞及调节B7H3的作用、水平以及增强机体免疫力的相关药物，尤其是治疗癌症相关药物方面具有广阔的应用前景。
附图说明
[0012]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0013]图1：用ELISA方法测定8H9人源化处理抗体与B7H3
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his蛋白的结合特性；
[0014]图2：8H9人源化处理抗体对人的PBMC细胞IFN
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γ分泌的促进作用；
[0015]图3：用ELISA方法测定B7H3/4
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1BB双功能抗体与B7H3
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his蛋白的结合特性；
[0016]图4：B7H3/4
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1BB双功能抗体与Jurkat
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B7H3细胞交联对NF
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κB信号通路的激活作用；
[0017]图5：B7H3/4
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1BB双功能抗体对人的PBMC细胞IFN
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γ分泌的促进作用；
[0018]图6：用ELISA方法测定B7H3/VEGF
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Trap双功能抗体与B7H3
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his蛋白的结合特性；
[0019]图7：B7H3/VEGF
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Trap双功能抗体对VEGF
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NFAT信号通路的抑制作用；
[0020]图8：B7H3/VEGF
‑
Trap双功能抗体对人的PBMC细胞IFN
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γ分泌的促进作用；
[0021]图9：用ELISA方法测定B7H3/SIPRα双功能抗体与CD47
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mFc蛋白的结合特性；
[0022]图10：用ELISA方法测定B7H3/SIPRα双功能抗体对SIPRα和CD47结合的阻断作用；
[0023]图11：B7H3/SIPRα双功能抗体对人的PBMC细胞IFN
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γ分泌的促进作用。
具体实施方式
[0024]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0025]除非另有说明，用于披露本专利技术的所有术语(包括技术和科学术语)的意义与本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.B7H3抗体或其抗原结合片段，其包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1～3所示的重链互补决定区以及氨基酸序列依次如SEQ ID NO:4～6所示的轻链互补决定区。2.根据权利要求1所述的B7H3抗体或其抗原结合片段，其包含氨基酸序列如SEQ ID NO:7或8所示的重链可变区，以及氨基酸序列如SEQ ID NO:9或10所示的轻链可变区。3.根据权利要求2所述的B7H3抗体或其抗原结合片段，所述重链可变区的第102位A突变为G。4.根据权利要求1～3任一项所述的B7H3抗体或其抗原结合片段，所述抗原结合片段为F(ab')2、Fab、scFv以及双特异抗体中的一种。5.根据权利要求1～3任一项所述的B7H3抗体或其抗原结合片段，其具有恒定区，重链恒定区序列选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD任意一种的恒定区序列；轻链恒定区为κ或λ链；所述恒定区优选是人来源的。6.融合蛋白，其含有权利要求1～5任一项所述的B7H3抗体或其抗原结合片段。7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其包含靶向B7H3的第一蛋白功能区以及靶向第二抗原的第二蛋白功能区；所述第一功能区具有权利要求1～5任一项所述的B7H3抗体或其抗原结合片段。8.根据权利要求7所述的融合蛋白，所述第二蛋白功能区选自4
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1BB抗体或其抗原结合片段、VEGF
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Trap全长或其片段以及SIRPα全长或其片段。9.根据权利要求8所述的融合蛋白，所述4
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1BB抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:11～13所示的重链互补决定区H
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CDR1、H
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CDR2、H
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CDR3，以及氨基酸序列依次如SEQ ID NO:14～16所示的轻链互补决定区L
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...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙锴，王振生，邱均专，陈均勇，孙键，李忠良，区日山，
申请(专利权)人：英诺湖医药杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：