尿液外泌体miRNA标志物在制备急性移植物抗宿主病诊断试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开尿液外泌体miRNA标志物在制备急性移植物抗宿主病诊断试剂盒中的应用，所述尿液外泌体miRNA标志物是hsa

【技术实现步骤摘要】
尿液外泌体miRNA标志物在制备急性移植物抗宿主病诊断试剂盒中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及尿液外泌体miRNA标志物在制备急性移植物抗宿主病诊断试剂盒中的应用

技术介绍

[0002]虽然异基因骨髓移植(al lo
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bmt)是迄今为止治疗白血病等恶性血液病最成功的肿瘤免疫疗法，但会产生与之相关的副作用移植物抗宿主病(GVHD)，尤其是急性移植物抗宿主病(aGVHD)，仍然是移植后发病率和死亡率较高的主要原因，其累及器官肠道、皮肤或肝脏，影响超过50％的接受移植的患者。鉴于aGVHD的危害性，准确的早期诊断对于指导治疗决策和防止发生长期的严重并发症是至关重要。然而在aGVHD症状出现后，鲜有非侵入性的诊断方法选择。目前，对aGVHD的诊断主要基于临床症状，并需要辅以侵入性检查，但aGVHD的症状和体征随时间变化而变化，这使得aGVHD的诊断极具挑战性。
[0003]Mi croRNA(miRNA)是小的非编码RNA，通过抑制翻译或诱导信使RNAs的降解来负向调节基因的表达。其以高度稳定的形式存在于各种体液中。外泌体是一种直径在30
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150nm且由细胞持续分泌的杯装囊泡结构，其携带蛋白核酸等多种生物活性分子，在包括尿液在内的各种体液中浓度很高，其内分子受到RNase含量升高和细胞外环境酸性pH的保护而不被降解。
[0004]由于尿液相比于血液收集更方便，处理更简单，且更加无创。因此尿液外泌体miRNA可以作为aGVHD液体活检的理想生物标志物，以帮助患者获得更好的治疗及预后。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中用于aGVHD诊断方法的特异性低、灵敏度低，以及诊断价值低且具有一定的伤害性的问题，本专利技术公开尿液外泌体中hsa
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miR
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411
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5p，hsa
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143
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3p和hsa
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5p作为aGVHD的诊断标志物。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]尿液外泌体miRNA标志物在制备急性移植物抗宿主病诊断试剂盒中的应用，所述尿液外泌体miRNA标志物是hsa
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miR
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411
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5p，hsa
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miR
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143
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3p和hsa
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miR
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5p中至少两种。
[0008]进一步方案，所述hsa
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miR
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411
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5p的诊断标记序列如SEQ no.1所示，hsa
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miR
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143
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3p诊断序列如SEQ no.2所示，hsa
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miR
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5p诊断标记序列如SEQ no.3所示；
[0009]SEQ no.1：UAGUAGACCGUAUAGCGUACG
[0010]SEQ no.2：UGAGAUGAAGCACUGUAGCUC
[0011]SEQ no.3：UUCCCUUUGUCAUCCUUCGCCU。
[0012]进一步方案，所述诊断试剂盒的判断步骤为：
[0013](1)先根据尿液外泌体miRNA标志物hsa
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miR
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411
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5p、hsa
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miR
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143
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3p和hsa
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miR
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211
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5p的基因和启动子序列设计三对定量引物和内参基因用于荧光定量PCR检测；
[0014](2)提取人的尿液外泌体RNA；
[0015](3)检测尿液外泌体中hsa
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5p、hsa
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3p和hsa
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5p的丰度水平；
[0016](4)根据hsa
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5p、hsa
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3p和hsa
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miR
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5p中至少两种在移植后患者中的表达是否有显著性差异来评估是否发生aGVHD。
[0017]更进一步方案，步骤(4)中显著性差异是指has
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5p和/或has
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miR
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3p的表达显著降低，has
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5p的表达显著增加。
[0018]其中，所述定量引物的序列如下：
[0019]hsa
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5p：
[0020]F
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primer CCCTAGTAGACCGTATAGCGTAC(SEQ no.4)，
[0021]R
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primer AACGCTTCACGAATTTGCGT(SEQ no.5)；
[0022]hsa
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miR
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143
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3p：
[0023]F
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primer CCTGAGATGAAGCACTGTAGCTC(SEQ no.6)，
[0024]R
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primer AACGCTTCACGAATTTGCGT(SEQ no.7)；
[0025]hsa
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miR
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211
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5p：
[0026]F
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primer TTCCCTTTGTCATCCTTCGCCT(SEQ no.8)，
[0027]R
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primer AACGCTTCACGAATTTGCGT(SEQ no.9)。
[0028]所述内参基因的引物序列为：
[0029]F
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Primer CTCGCTTCGGCAGCACA(SEQ no.10)，
[0030]R
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Primer AACGCTTCACGAATTTGCGT(SEQ no.11)。
[0031]进一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.尿液外泌体miRNA标志物在制备急性移植物抗宿主病诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述尿液外泌体miRNA标志物是hsa
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5p，hsa
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3p和hsa
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5p中至少两种。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述hsa
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5p的诊断标记序列如SEQ no.1所示，hsa
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143
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3p诊断序列如SEQ no.2所示，hsa
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211
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5p诊断标记序列如SEQ no.3所示；SEQ no.1：UAGUAGACCGUAUAGCGUACGSEQ no.2：UGAGAUGAAGCACUGUAGCUCSEQ no.3：UUCCCUUUGUCAUCCUUCGCCU。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述诊断试剂盒的判断步骤为：(1)先根据尿液外泌体miRNA标志物hsa
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5p、hsa
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3p和hsa
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5p的基因和启动子序列设计三对定量引物和内参基因用于荧光定量PCR检测；(2)提取人的尿液外泌体RNA；(3)检测尿液外泌体中hsa
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miR
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【专利技术属性】
技术研发人员：胡杰，沈佐君，
申请(专利权)人：安徽省立医院中国科学技术大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：