一种血清外泌体miR-3614-3p作为眼肌型重症肌无力诊断性生物标志物的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种检测血清外泌体miRNA表达量的试剂在制备诊断眼肌型重症肌无力的产品中的应用，所述血清外泌体miRNA为miR

【技术实现步骤摘要】
一种血清外泌体miR
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3614
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3p作为眼肌型重症肌无力诊断性生物标志物的应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及一种血清外泌体miR
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3614
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3p作为眼肌型重症肌无力诊断性生物标志物的应用。

技术介绍

[0002]重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种主要由乙酰胆碱受体抗体介导的、T细胞依赖、补体和细胞因子参与，累及到神经肌肉接头的获得性自身免疫性疾病[1]。MG可累及全身骨骼肌，表现为波动性肌无力[1]。根据改良Osserman分型，MG可分为眼肌型、全身型、重度激进型、迟发重度型及肌萎缩型等[1]。当肌无力累及到面肌、四肢肌、延髓肌等其他骨骼肌时，称全身型重症肌无力(systemic myasthenia gravis GMG)。GMG较眼肌型重症肌无力(ocular myasthenia gravis,OMG)患者更容易出现严重的症状，甚至可能发生呼吸肌无力而危及生命。因此，OMG的早发现、早诊断和早治疗，是延缓甚至防止OMG进展为GMG的关键。
[0003]OMG是MG中最常见的一种亚型，仅累及提上睑肌、眼轮匝肌、眼外肌，占MG的50％。OMG主要表现为波动性的上睑下垂、复视/斜视、眼睑闭合不全。当上睑下垂或斜视症状明显时，处于视力发育关键期的儿童患者易发生弱视和立体视觉障碍。OMG受累眼肌无力的程度具有波动性，疲劳后加重，休息、睡眠和低温后改善。OMG可发生于所有年龄、种族和民族，但临床症状和对治疗的反应差异很大。
[0004]根据中国重症肌无力诊断和治疗指南(2022版)，OMG诊断依据：1)波动性眼肌无力：上睑下垂、复视和/或斜视；2)乙酰胆碱受体抗体(acetylcholine receptors antibody,AChR
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Ab)、肌肉特异性酪氨酸激酶受体抗体(muscle
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specific kinase antibody,MuSK
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Ab)、低密度脂蛋白相关蛋白4受体抗体(lipoprotein
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related protein 4antibody,LRP4
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Ab)任一个阳性；3)肌电图阳性；4)新斯的明试验阳性；5)治疗性药物试验阳性。符合上述诊断标准中的第1点以及其他2至5项中任意一点，同时排除其他疾病引起的眼肌麻痹即可明确诊断。
[0005]但是，目前临床上对OMG的诊断存在一定的困难，原因如下：
[0006]1)在临床表现方面，对于神经内科医生和眼科医生来说，累及提上睑肌引起的上睑下垂症状诊断并不困难，但是眼外肌受累出现斜视或复视时，早期表现较为隐匿，临床检查较为专业，无论对于神经科医生还是非眼肌专业的眼科医生来讲，都具有一定的难度。
[0007]2)在新斯的明试验方面，在新发病例中敏感性高，但针对病程较长的病例，由于发病时间较长引起的眼外肌肌肉挛缩，可使眼球固定于某一眼位，导致药物作用不明显。
[0008]3)现有的抗体检测，包括AChR
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Ab、MuSK
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Ab，LRP4
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Ab，其中任一抗体阳性即可确诊。据报道AChR
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Ab阳性率在GMG中为85％
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90％[6]，而在OMG中阳性率仅为50％左右[1]，远低于GMG。在AchR
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Ab阴性MG患者中，70％的患者存在血清MuSK
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Ab阳性，可进一步协助MG诊断，但MuSK
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MG患者主要为累及延髓、颈部、肩部及面部肌肉的GMG，眼部受累较为少见[2,
3]。LRP4
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Ab在国外MG患者中的阳性率为0.45％～40％[4]，在国人MG患者中阳性率仅0.7％
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1.7％[5],远低于国外报道，可能与种族差异有关。
[0009]4)在肌电图方面，重复神经电刺激(repetitive neuroelectrical stimulation，RNS)是目前最常用于诊断OMG的神经电生理检查技术，但其阳性率较低(11％
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35％)。由于目前技术限制，斜视及复视患者无法行眼外肌肌电图检测，无疑增加了OMG的诊断难度[5]。
[0010]OMG临床表现复杂多样并具有波动性和易疲劳性，血清学抗体阳性率低，肌电图灵敏度低，有文献报道高达46％的OMG患者在发病1年内无法确诊[6]。OMG易被误诊多种与OMG有相似表现的疾病，如颅神经麻痹[7]、双上转肌麻痹、甲状腺相关眼病、糖尿病性动眼神经麻痹、干眼症、结膜炎等疾病。研究发现30％
‑
80％未经免疫治疗的OMG患者将于2年内进展为GMG，需长期用药缓解，甚至可能可累及呼吸肌引发呼吸衰竭,导致死亡[8,9]。因此，临床上迫切需要用于OMG诊断的灵敏度及特异性更高的生物标志物，减少OMG漏诊误诊。
[0011]最近，许多研究报告miRNA在MG和OMG中发挥了重要作用。根据Cheng Z的报道[10],与健康对照组相比，MG患者外周血单个核细胞(periph
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eral blood mononuclear cells，PBMCs)中miR
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320a水平下降，同时伴有炎症免疫相关因子白细胞介素(interleu
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kin，IL)IL
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2、IFN
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γ、IL
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6、IL
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17的mRNA表达增高，具有抗炎作用的IL
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4mRNA表达降低，主要通过ERK/NF
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κB通路产生作用，提示miR
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320a可能参与MG的免疫调节机制。另一项临床研究[11]对AChR
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Ab阳性的MG患者进行血浆测定，结果显示has
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miR150
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5p、has
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miR21
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5p显著升高，hsa
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miR27a
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3p下降。Hsa
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miR150
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5p、has
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miR21
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5p具有调节T细胞分化及免疫应答功能的作用，其中has
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miR150
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5p在胸腺瘤切除术后下降明显，且患者临床症状改善，但AChR抗体滴度无变化。has
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miR27a
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3p与NK细胞毒性相关，对MG特异性T细胞及产生AChR
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Ab的B细胞功能产生影响，表明上述三个miRNA可能为MG患者免疫相关的血液标记物，并可能成为MG诊断和治疗的靶点。在OMG方面，有报道miRNA在OMG向GMG转化中预测作用[12本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测血清外泌体miRNA表达量的试剂在制备诊断眼肌型重症肌无力的产品中的应用，其特征在于：所述血清外泌体miRNA为miR
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3614
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3p。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述产品为检测试剂、试剂盒、微阵列或生物芯片。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂的引物包括：hsa

【专利技术属性】
技术研发人员：周清，冯慧宇，陈剑，黄鑫，王颖薇，穆亚君，杨媛婷，陈嘉欣，李世吟，张日佳，
申请(专利权)人：暨南大学附属第一医院广州华侨医院，
类型：发明
国别省市：