一种菜心恢复系分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种菜心恢复系分子标记及其应用，属于基因工程技术领域，所述分子标记为SEQ ID NO：14所示的核苷酸序列片段，共230bp。本发明专利技术通过菜心和油菜的序列比对，发现二者存在一些SNP和InDel，猜测这些SNP和InDel可能是菜心BraRfo基因无法恢复育性的原因，之后选取比对结果中一段较长的InDel，经PCR扩增验证，结果显示菜心自交系与菜心和油菜恢复系的扩增条带确实存在差异，从而准确鉴定油菜恢复基因转入菜心的恢复系材料，辅助菜心恢复系的高效和快速转育。的高效和快速转育。的高效和快速转育。

【技术实现步骤摘要】
一种菜心恢复系分子标记及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种菜心恢复系分子标记及其应用。

技术介绍

[0002]菜心是十字花科芸薹属一、二年生草本植物。菜心为十字花科芸薹属芸薹种白菜亚种的变种，以花薹为产品。菜心品质柔嫩，风味可口，营养丰富，富含钙、铁、维生素A等多种营养成分，优质、抗逆和丰产性状是菜心育种的主要目标。
[0003]雄性不育恢复系是能使不育系恢复正常结实的品系(种)。恢复系雌雄蕊正常，能自交结实。并能将其花粉授于不育系所结种子长成的植株，并且使其育性恢复正常，并且在产量、抗逆等性状上具有明显的杂种优势。菜心Ogu雄性不育基因是从油菜转育而来，在自然界中无法找到菜心Ogu雄性不育系的恢复系，即使找到了恢复系，也不能通过菜心的外观来判断该材料是否真的为恢复系，因此为了将油菜Ogu雄性不育恢复基因成功转育到菜心中，有必要开发出一种菜心恢复系分子标记，用于菜心恢复系的高效转育和快速鉴定。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种菜心恢复系分子标记及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术公开的分子标记能够准确鉴定油菜恢复基因转入菜心的恢复系材料，辅助菜心恢复系的高效和快速转育。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供一种菜心恢复系分子标记，所述分子标记为SEQ ID NO：14所示的核苷酸序列片段，共230bp。
[0007]本专利技术还提供一种检测所述分子标记的引物组，所述引物组的核苷酸序列如SEQ ID NO：15
‑
16所示。
[0008]本专利技术还提供一种鉴定菜心恢复系分子标记的试剂盒，包含所述的引物组。
[0009]本专利技术还提供一种根据所述的分子标记或所述的引物组或所述的试剂盒在菜心育种中的应用。
[0010]本专利技术还提供一种根据所述的分子标记或所述的引物组或所述的试剂盒在快速鉴定菜心恢复系材料中的应用。
[0011]本专利技术还提供一种筛选菜心恢复系材料的方法，以待测菜心样品的基因组DNA为模板，利用所述的引物组对模板进行PCR扩增，根据扩增结果判断待测菜心样品是否为菜心恢复系材料。
[0012]进一步地，若扩增结果为230bp时，所述待测菜心样品是菜心恢复系材料；若扩增结果为259bp时，所述待测菜心样品非菜心恢复系材料。
[0013]本专利技术公开了以下技术效果：
[0014]本专利技术通过菜心和油菜的序列比对，发现二者存在一些SNP和InDel，猜测这些SNP和InDel可能是菜心BraRfo基因无法恢复育性的原因，之后选取比对结果中一段较长的
InDel，经PCR扩增验证，结果显示菜心自交系与菜心和油菜恢复系的扩增条带确实存在差异，从而准确鉴定油菜恢复基因转入菜心的恢复系材料，辅助菜心恢复系的高效和快速转育。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0016]图1为恢复系引物HF
‑
4鉴定琼脂糖凝胶电泳检测结果；泳道M为DL2,000DNAMarker；泳道1为ddH2O；泳道2
‑
6为菜心对照样本；泳道7为菜心恢复系样本；泳道8
‑
18为油菜恢复系样本；
[0017]图2为油菜Rfo基因序列与菜心序列比对结果；
[0018]图3为Rfo1引物琼脂糖凝胶电泳结果；泳道0为DL2,000Marker；泳道1
‑
3为菜心自交系；泳道4为菜心恢复系；泳道5
‑
6为油菜恢复系；
[0019]图4为菜心自交系LNCX1测序结果与Rfo基因序列比对结果。
具体实施方式
[0020]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0021]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0022]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0023]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0024]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0025]实施例1
[0026]本研究共使用了17份材料，其中2份为来自广东和利农生物种业股份有限公司的高代自交系迟菜心LNCX1、LNCX2，3份为菜心自交系材料，这些材料是通过对增城迟菜心后代的筛选和纯化获得的。1份为华南农业大学园艺学院2020年秋冬季创建的F1代菜心Ogu恢
复系材料，该恢复系是通过四九菜心与油菜杂交的后代获得。其余11份为种植在华南农业大学启林北基地的油菜恢复系材料单株，该油菜恢复系单株购自网络，并经过纯化获得。
[0027]对以上材料使用CTAB法提取DNA，使用Rfo基因序列设计引物，配制PCR体系进行扩增，扩增体系如表1所示，扩增程序如表2所示，使用1％琼脂糖凝胶电泳检测，水和恢复系之外的材料作为对照。
[0028]表1PCR扩增反应体系
[0029][0030]表2PCR扩增程序
[0031][0032]Rfo基因序列全长2903bp(如SEQ ID NO：1所示)，根据基因序列共设计出5对引物，引物序列如表3所示。
[0033]SEQ ID NO：1
[0034]ATCCGTCGAGAGTTTTGTAGAGATCGACGAAGAACGAAATGTTGGCTAGGGTTTGCAGATTCGAGTCTTCGTCTTCTGTGCCTGCGGCTAGATTGTTCTGTACGAGATCGATTCGTCATACTCTGGCCAAGAAAAGCAGTGGCAAAGCAGGAGGTTTTGGAGGAGAGAGGTTGAAG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种菜心恢复系分子标记，其特征在于，所述分子标记为SEQ ID NO：14所示的核苷酸序列片段，共230bp。2.一种检测权利要求1所述分子标记的引物组，其特征在于，所述引物组的核苷酸序列如SEQ ID NO：15
‑
16所示。3.一种鉴定菜心恢复系分子标记的试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所述的引物组。4.一种根据权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物组或权利要求3所述的试剂盒在菜心育种中的应用。5.一种根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈坤豪，陈木溪，陈如珠，宋超，江喜超，张可欣，林泽勤，陈银霞，
申请(专利权)人：广东和利农农业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：