液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺及其代谢物的方法技术

本发明专利技术公开了液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺及其代谢物的方法，涉及质谱分析技术领域，取500

【技术实现步骤摘要】
液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺及其代谢物的方法


[0001]本专利技术属于质谱分析
，特别是涉及液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺及其代谢物的方法。

技术介绍

[0002]甲氧基肾上腺素和去甲氧基肾上腺素是人体内重要的儿茶酚胺物质。这些物质是体内重要的神经递质，也是重要的激素，与人们的健康和疾病密切相关。有研究结果显示，肾上腺素和去甲肾上腺素的代谢产物MN和NMN主要在肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤和副神经结瘤瘤体内持续代谢产生，可以成为更好的PPGL检测标志物。同时儿茶酚胺类物质在血浆中含量非常少，同时各类生物样品中存在与儿茶酚胺相似的代谢物以及内源性带有相关基团的干扰物，导致精确测定儿茶酚胺含量困难，人血浆样本具有高度复杂性，现有的非衍生临床质谱检测血儿茶酚胺的方法中，对于服用中药、降压药或三环类抗抑郁药等血浆样本，会检出高浓度干扰物，导致目标物无法检出，检测方法对于复杂样本的普适性不高。
[0003]目前常用的测定人血浆中的儿茶酚胺代谢产物的高效液相色谱串联三重四极杆质谱法主要存在以下几点问题和缺点，采用衍生化的方法，前处理过程复杂，耗时较长；采用固相萃取(SPE)柱的方法，但目标物检测物的干扰物质较多，对于复杂的人血浆样本不能快速有效检测，国家知识产权局网站公开的“人血浆中游离甲氧基去甲肾上腺素与甲氧基肾上腺素的高效液相色谱串联质谱检测方法”中，该方法采用SPE固相萃取96孔板进行前处理，前处理操作简便快速，但生物样本的基质干扰较为严重，特异性较差，限制了方法的推广使用。

技术实现思路
/>[0004]本专利技术提供了液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺及其代谢物的方法，解决了以上问题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]本专利技术的液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺及其代谢物的方法，包括以下步骤：
[0007]S1、取500
‑
1000μL人血浆，依次加入50
‑
10μL内标工作液和0.1～1mL 60
‑
100mM pH＝3～8甲酸铵/醋酸钠溶液，涡旋振荡30
‑
60秒混匀；
[0008]S2、取固相萃取96孔板，加入300
‑
500μL 20
‑
100％甲醇水/乙醇水进行淋洗，再加入0.1～1mL 60
‑
100mM pH＝3～8甲酸铵/醋酸钠，加入上述S1步骤混匀后的血浆样本，用正压仪固相萃取仪器压干，用50～500μL乙腈/甲醇进行淋洗，再加入100
‑
500μL 5
‑
10％甲酸的甲醇/叔丁基甲基醚溶液进行洗脱；
[0009]S3、将洗脱后的残渣用10
‑
500μL 20
‑
100％甲醇水溶液复溶，涡旋振荡充分溶解，进行液相色谱三重四极杆质谱上样分析，高效液相色谱的条件为：
[0010]色谱柱采用为亲水相互作用HILIC色谱柱，流动相A为0.05
‑
0.2％甲酸—1
‑
50mM乙
酸铵溶液；
[0011]流动相B为0.05
‑
0.2％甲酸
‑
乙腈溶液，流速为0.2～1mL/min，柱温为25
‑
50℃；
[0012]流动相梯度：流动相B，0
‑
0.5min，95％，0.5
‑
2.0min，95
‑
78％，2.0
‑
3.4，78
‑
95％，3.4
‑
4.0min，95％，进样量：10
‑
50μL。
[0013]本专利技术相对于现有技术包括有以下有益效果：
[0014]本专利技术和传统方法比较，存在显著优势，可以避免多种干扰离子，使检测过程简单快速，因样本干扰多次复测现象大力减少，更加适用于临床质谱分析的实际应用，本方法和“人血浆中游离甲氧基去甲肾上腺素与甲氧基肾上腺素的高效液相色谱串联质谱检测方法”相比，前处理过程均采用SPE固相萃取方法，前处理过程相似，本方法的不同点和优势在于，对于MN目标物设置3个监测离子对，充分利用三重四极杆的多反应监测模式，避免大量的基质干扰，在质谱仪器检测的过程中大力提高方法的特异性，在所有儿茶酚胺及其代谢物已经公开液相质谱串联三重四极杆质谱检测方法中，对于质谱母离子和子离子监测模式中，没有使用到两种定量离子的监测方法，也没有监测MN目标物(180
→
165)的监测方法，本方法对于传统方法更具有稳健性，能够避免传统方法的系统性缺陷，是传统方法的更进一步的优化。
[0015]当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1为编号E20220915035人血浆样本的干扰离子影响目标物检测与消除干扰离子的图谱；
[0018]图2为编号E20220915035人血浆样本的干扰离子影响目标物检测与消除干扰离子的图谱；
[0019]图3为编号E20220915035人血浆样本的干扰离子影响目标物检测与消除干扰离子的图谱；
[0020]图4为编号E20220908031人血浆样本的干扰离子影响目标物检测与消除干扰离子的图谱；
[0021]图5为编号E20220908031人血浆样本的干扰离子影响目标物检测与消除干扰离子的图谱；
[0022]图6为编号E20220908031人血浆样本的干扰离子影响目标物检测与消除干扰离子的图谱。
具体实施方式
[0023]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它
实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0024]本专利技术的液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺及其代谢物的方法，包括以下步骤：
[0025]S1、取500
‑
1000μL人血浆，依次加入50
‑
10μL内标工作液和0.1～1mL 60
‑
100mM pH＝3～8甲酸铵/醋酸钠溶液，涡旋振荡30
‑
60秒混匀；
[0026]S2、取固相萃取96孔板，加入300
‑
500μL 20
‑
100％甲醇水/乙醇水进行淋洗，再加入0.1～1mL 60
‑
100mM pH＝3～8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺及其代谢物的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取500
‑
1000μL人血浆，依次加入50
‑
10μL内标工作液和0.1～1mL 60
‑
100mM pH＝3～8甲酸铵/醋酸钠溶液，涡旋振荡30
‑
60秒混匀；S2、取固相萃取96孔板，加入300
‑
500μL 20
‑
100％甲醇水/乙醇水进行淋洗，再加入0.1～1mL 60
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100mM pH＝3～8甲酸铵/醋酸钠，加入上述S1步骤混匀后的血浆样本，用正压仪固相萃取仪器压干，用50～500μL乙腈/甲醇进行淋洗，再加入100
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500μL 5
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10％甲酸的甲醇/叔丁基甲基醚溶液进行洗脱；S3、将洗脱后的残渣用10
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【专利技术属性】
技术研发人员：李明珠，吴颖，于嘉屏，吴萍萍，龚晓雪，张雪珂，刘洋，
申请(专利权)人：上海迪安医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：