用于快速检测5种人冠状病毒的引物探针组合、缓冲剂液及试剂盒制造技术

本发明专利技术适用于生物医药领域，提供一种用于快速检测5种人冠状病毒的引物探针组合、缓冲剂液及试剂盒。引物如SEQ ID NO.:1、2、4、5、7、8、10、11所示，探针序列如SEQ ID NO.:3、6、9、12所示。本发明专利技术的试剂盒选择特异性引物探针，同时采用特殊的5

【技术实现步骤摘要】
用于快速检测5种人冠状病毒的引物探针组合、缓冲剂液及试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医药领域，尤其涉及一种用于快速检测5种人冠状病毒的引物探针组合、缓冲剂液及试剂盒。

技术介绍

[0002]截至当前，共发现7种可感染人类的冠状病毒，分别是HCoV
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229E、HCoV
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OC43、HCoV
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NL63、HCoV
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HKU1、SARS
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CoV、MERS
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CoV和SARS
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CoV
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2。这些冠状病毒的致病力、传染性、流行情况不尽相同。
[0003]HCoV
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229E、HCoV
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OC43、HCoV
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NL63、HCoV
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HKU1从首次发现到现在，一直散发或局部流行，主要引起轻度或中度的上呼吸道疾病，症状主要包括流鼻涕、头痛、咳嗽、咽喉痛、发热等，有时会引起肺炎或支气管炎等下呼吸道疾病，心肺疾病患者、免疫力低下人群、婴儿和老年人中较为常见，在呼吸道感染占比中位居第二。
[0004]SARS
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CoV可引起严重急性呼吸综合征，症状较为严重，病死率超过10％，其危害性很大，但自2003年中期疫情逐渐消灭后，至今未再出现。
[0005]MERS
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CoV引起中东呼吸综合征。临床可表现为无症状或轻度呼吸道症状，也可发展为严重的急性呼吸道症状甚至死亡，病死率曾超过30％，我国通报过1例输入性中东呼吸综合征确诊病例外，至今也未再发现。
[0006]SARS
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CoV
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2全球持续大流行，造成极大的危害，虽然当前疫情正逐渐消退，但仍有散发或局部流行，是否与人类长期共存还有待继续研究。
[0007]随着各种可感染人类的冠状病毒的发现，国内的技术团队先后开发了一些检测试剂盒，主要如下：
[0008]专利“一种实时荧光Rt PCR检测冠状病毒的试剂盒(申请号：CN201310392720.2)”，采用1套引物、探针基于实时荧光Rt PCR技术检测人冠状病毒，其检测灵敏度为1000copies/ml，但是未明确检测哪些人冠状病毒，其耗时不详。
[0009]专利“一种用于检测冠状病毒的试剂盒及其应用(申请号：CN201510479272.9)”，用2套引物、探针基于NASBA扩增技术检测人冠状病毒，其中引物对1用于扩增冠状病毒HKU1/OC43，引物对2用于扩增冠状病毒229E/NL63，其检测灵敏度不详，耗时约1小时。
[0010]专利“同时检测包括2019
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nCoV在内的四种人冠状病毒的四重荧光定量检测试剂盒(申请号：CN202010083161.7)”，用4套引物、探针基于实时荧光Rt PCR/qRT PCR技术分别检测SARS
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CoV
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2、MERS CoV、HCoV
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OC43、HCoV
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HKU1，其检测灵敏度与耗时均不详。
[0011]鉴于当前只流行HCoV
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229E、HCoV
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OC43、HCoV
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NL63、HCoV
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HKU1、SARS
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CoV
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2这5种人冠状病毒，且暂无核酸提取加核酸扩增的全程时间短至30分钟以内的检测试剂，故研发可同时快速检测5种人冠状病毒的试剂盒具有良好的社会、经济效益。

技术实现思路

[0012]本专利技术实施例提供一种用于快速检测5种人冠状病毒引物探针组合，旨在解决目前人冠状病毒试剂盒检测种类不全及时间过长等问题。
[0013]本专利技术实施例是这样实现的，用于快速检测5种人冠状病毒引物探针组合，包括四组引物探针组合，其中，
[0014]第一组为检测HCoV
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229E、HCoV
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NL63的引物探针组合，包括如SEQ ID NO.:1所示的正向引物；如SEQ ID NO.:2所示的反向引物；和如SEQ ID NO.:3所示的探针；
[0015]第二组为检测HCoV
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OC43、HCoV
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HKU1的引物探针组合，包括如SEQ ID NO.:4所示的正向引物；如SEQ ID NO.:5所示的反向引物；和如SEQ ID NO.:6所示的探针；
[0016]第三组为检测SARS
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CoV
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2的引物探针组合，包括如SEQ ID NO.:7所示的正向引物；如SEQ ID NO.:8所示的反向引物；和如SEQ ID NO.:9所示的探针；
[0017]第四组为检测人源性内标的引物探针组合，包括如SEQ ID NO.:10所示的正向引物；如SEQ ID NO.:11所示的反向引物；和如SEQ ID NO.:12所示的探针。
[0018]更进一步地，所述5种人冠状病毒为HCoV
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229E、HCoV
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OC43、HCoV
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NL63、HCoV
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HKU1、SARS
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CoV
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2。
[0019]更进一步地，探针标记包括FAM、VIC、HEX、JOE、ROX、CY5、CY5.5。探针的淬灭基团选择本领域常用的。
[0020]本专利技术实施例还提供一种用于快速检测5种人冠状病毒的缓冲液，配方如下：
[0021][0022]本专利技术实施例还提供一种用于快速检测5种人冠状病毒的试剂盒，包括上述引物探针组合。
[0023]更进一步地，所述试剂盒还包括上述缓冲液。
[0024]更进一步地，所述试剂盒地PCR扩增试剂的配方如下：
[0025][0026]更进一步地，所述试剂盒的PCR反应体系包括PCR扩增试剂10μl和RNA模板15μl。
[0027]更进一步地，荧光PCR扩增反应程序为：55℃2min；95℃2sec；95℃1sec、55℃10sec，40个循环。
[0028]本专利技术实施例还提供上述引物探针组合的用途，用于制备检测人冠状病毒的试剂盒。
[0029]本专利技术实施例还提供上述缓冲液的用途，用于制备检测人冠状病毒的试剂盒。
[0030]相较于单重Rt PCR、融解曲线多重Rt PCR及基因测序等核酸检测技术，本专利技术具有以下优势：
[0031](1)功能方面，不仅能一管同时快速检测当前流行或散发的HCoV
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229E、HCoV
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OC43、HCoV
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NL63、HCoV
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HKU1、SARS
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CoV
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2这5种人冠状病毒，而且本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于快速检测5种人冠状病毒的引物探针组合，其特征在于，包括四组引物探针组合，其中，第一组为检测HCoV
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229E、HCoV
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NL63的引物探针组合，包括如SEQ ID NO.:1所示的正向引物；如SEQ ID NO.:2所示的反向引物；和如SEQ ID NO.:3所示的探针；第二组为检测HCoV
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OC43、HCoV
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HKU1的引物探针组合，包括如SEQ ID NO.:4所示的正向引物；如SEQ ID NO.:5所示的反向引物；和如SEQ ID NO.:6所示的探针；第三组为检测SARS
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CoV
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2的引物探针组合，包括如SEQ ID NO.:7所示的正向引物；如SEQ ID NO.:8所示的反向引物；和如SEQ ID NO.:9所示的探针；第四组为检测人源性内标的引物探针组合，包括如SEQ ID NO.:10所示的正向引物；如SEQ ID NO.:11所示的反向引物；和如SEQ ID NO.:12所示的探针。2.如权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述5种人冠状病毒为HCoV
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229...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘和录，朱美玲，黄旋妹，赵丽君，江勇，劳梓钊，周紫娟，
申请(专利权)人：深圳市中西医结合医院，
类型：发明
国别省市：