用于FAdV、AIV、NGPV、DTMUV和NGoAstV检测的五重PCR引物组制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，具体涉及用于FAdV、AIV、NGPV、DTMUV和NGoAstV检测的五重PCR引物组。本发明专利技术提供的引物组、试剂盒、检测系统以及方法具有如下效果：1)高通量、经济；2)特异性强3)灵敏度高：对单一模板的灵敏度能达到102copies/μL，对五重模板的敏感性能达到103copies/μL；4)重复性好。4)重复性好。

【技术实现步骤摘要】
用于FAdV、AIV、NGPV、DTMUV和NGoAstV检测的五重PCR引物组


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及用于FAdV、AIV、NGPV、DTMUV和NGoAstV检测的五重PCR引物组。

技术介绍

[0002]我国是世界上最大的水禽生产国与消费国，水禽饲养量占世界总量的75％以上，同时我国也世界养鹅大国，鹅的存栏量和出栏量一直稳居世界第一位。但是随着我国养鹅业的不断发展，鹅的饲养密度不断增大，发病率逐年增多，特别是禽流感、腺病毒、新型鹅细小病毒、坦布苏病毒和新型鹅星状病毒感染等。禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)是当前危害水禽养殖最严重的疫病，雏鸭感染高致病性禽流感病毒的发病率达100％，病死率为30％～95％，雏番鸭发病率达100％,死亡率达90％以上。7周龄以上的肉鸭和蛋鸭感染后主要造成生殖系统损伤，影响产蛋。鹅对禽流感病毒比鸭更易感，各年龄段的死亡率都非常高。禽腺病毒(Fowl adeno virus，FAdV)是全球家禽常见的传染病病原之一，多数禽腺病毒可在健康禽体内存在并复制，不表现临床症状或症状比较轻微，但可以成为混合感染时的条件性病原，腺病毒有时也可以作为原发性病原，引起禽类的多种病征。新型鹅细小病毒(Novel goose parvovirus，NGPV)可引起“短喙
‑
侏儒综合征”，是一种新发传染病，其典型的临床症状为软脚、短嘴和生长障碍。鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus，DTMUV)可引起的一种以蛋鸭、蛋鹅产蛋骤降、肉鹅或育成鹅出现神经症状为主要特征的急性传染病。新型鹅星状病毒(Novel Goose astrovirus，NGoAstV)是近年危害我国养鹅业重要的病毒性传染病病原之一，主要感染3周龄以内的雏鹅,感染后鹅群发生高度致死性内脏痛风病，病死率可高达30％。上述病毒它们单一感染或共感染，造成鹅的发病、死亡或生产性能降低，给养鹅业造成了巨大的经济损失。在临床上仅靠肉眼观察发病症状、剖检变化和发病特征等，难以作出快速鉴别诊断，因此建立能够普遍适用这些病毒感染的快速高通量鉴别检测方法迫在眉睫。
[0003]目前主要的诊断方法主要分为临床诊断与实验室诊断，因为鹅病在临床上症状不典型多以混感为主，因此主要依靠实验室诊断方法来确诊。常用的实验室诊断方法包括病毒分离鉴定、血清学检测、ELISA、免疫电镜、荧光定量PCR等技术已被均可应用于这些病毒感染的检测，但是传统方法如病毒分离鉴定耗时长，血清学和ELISA检测耗时费力，常受临床病料新鲜度、污染程度或病程等因素的限制，免疫电镜和荧光定量PCR对设备及病毒的纯化要求较高，均给实验室诊断带来了局限性。因此，如何能够快速、准确、高特异性、高灵敏度、并且对病毒纯化要求不是十分严格，便于操作、节约成本的同时检测上述五种病毒成为本领域有待解决的技术问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一方面的目的，在于提供引物组。
[0005]本专利技术的第二方面的目的，在于提供一种试剂盒。
[0006]本专利技术的第三方面的目的，在于提供一种检测系统。
[0007]本专利技术的第四方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的引物组、第二方面的的试剂盒、第三方面的检测系统的应用。
[0008]本专利技术的第五方面的目的，在于提供一种方法。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0010]本专利技术的第一个方面，提供引物组，包含：用于鉴定禽腺病毒的特异引物对A、用于鉴定禽流感病毒的特异引物对B、用于鉴定新型鹅细小病毒的特异引物对C、用于鉴定鸭坦布苏病毒的特异引物对D和用于鉴定新型鹅星状病毒的特异引物对E；
[0011]所述用于鉴定禽腺病毒的特异引物对A包含：FAdV
‑
F和FAdV
‑
R；所述用于鉴定禽流感病毒的特异引物对B包含：AIV
‑
F和AIV
‑
R；所述用于鉴定新型鹅细小病毒的特异引物对C包含：N
‑
GPV
‑
F和N
‑
GPV
‑
R；所述用于鉴定鸭坦布苏病毒的特异引物对D包含：DTMUV
‑
F和DTMUV
‑
R；所述用于鉴定新型鹅星状病毒的特异引物对E包含：N
‑
GoAstV
‑
F和N
‑
GoAstV
‑
R；
[0012]所述FAdV
‑
F的序列如SEQ ID NO.1所示；所述FAdV
‑
R的序列如SEQ ID NO.2所示；所述AIV
‑
F的序列如SEQ ID NO.3所示；所述AIV
‑
R的序列如SEQ ID NO.4所示；所述N
‑
GPV
‑
F的序列如SEQ ID NO.5所示；所述N
‑
GPV
‑
R的序列如SEQ ID NO.6所示；所述DTMUV
‑
F的序列如SEQ ID NO.7所示；所述DTMUV
‑
R的序列如SEQ ID NO.8所示；所述N
‑
GoAstV
‑
F的序列如SEQ ID NO.9所示；所述N
‑
GoAstV
‑
R的序列如SEQ ID NO.10所示。
[0013]优选地，所述引物组用于a1)～a4)中至少一种：
[0014]a1)鉴定禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒；
[0015]a2)鉴定待测病毒是否为禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒；
[0016]a3)鉴别禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒；
[0017]a4)检测待测样品中是否含有禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒。
[0018]本专利技术的引物组除可同时检测/鉴定/鉴别上述五种病毒(禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒)外，也可检测/鉴定/鉴别上述五种病毒中的某1种、2种、3种或4种病毒。
[0019]优选地，所述引物组还包含说明书，所述说明书记载了所述引物组的使用方法。
[0020]优选地，所述引物组的使用方法为：以待测病毒/样品的DNA为模板，采用所述引物组进行扩增，检测扩增产物。
[0021]优选地，所述待测样品的DNA通过提取得到和/或通过RNA逆转录得到。
[0022]优选地，所述扩增的反应体系中所述FAdV
‑
F、FAdV
‑
R、AIV
‑
F、AIV
‑
R、N
‑
GPV
‑
F、N
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.引物组，包含：用于鉴定禽腺病毒的特异引物对A、用于鉴定禽流感病毒的特异引物对B、用于鉴定新型鹅细小病毒的特异引物对C、用于鉴定鸭坦布苏病毒的特异引物对D和用于鉴定新型鹅星状病毒的特异引物对E；所述用于鉴定禽腺病毒的特异引物对A包含：FAdV
‑
F和FAdV
‑
R；所述用于鉴定禽流感病毒的特异引物对B包含：AIV
‑
F和AIV
‑
R；所述用于鉴定新型鹅细小病毒的特异引物对C包含：N
‑
GPV
‑
F和N
‑
GPV
‑
R；所述用于鉴定鸭坦布苏病毒的特异引物对D包含：DTMUV
‑
F和DTMUV
‑
R；所述用于鉴定新型鹅星状病毒的特异引物对E包含：N
‑
GoAstV
‑
F和N
‑
GoAstV
‑
R；所述FAdV
‑
F的序列如SEQ ID NO.1所示；所述FAdV
‑
R的序列如SEQ ID NO.2所示；所述AIV
‑
F的序列如SEQ ID NO.3所示；所述AIV
‑
R的序列如SEQ ID NO.4所示；所述N
‑
GPV
‑
F的序列如SEQ ID NO.5所示；所述N
‑
GPV
‑
R的序列如SEQ ID NO.6所示；所述DTMUV
‑
F的序列如SEQ ID NO.7所示；所述DTMUV
‑
R的序列如SEQ ID NO.8所示；所述N
‑
GoAstV
‑
F的序列如SEQ ID NO.9所示；所述N
‑
GoAstV
‑
R的序列如SEQ ID NO.10所示。2.一种试剂盒，包含权利要求1所述的引物组。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含：PCR缓冲液、DNA聚合酶、dNTP和Mg
2+
中的至少一种；优选地，所述试剂盒还包含：逆转录引物和逆转录酶；优选地，所述试剂盒还包含：含有禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒的阳性对照样品以及不含禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒的阴性对照样品。4.一种检测系统，包含：权利要求1所述的引物组和权利要求2～3任一项所述的试剂盒中的至少一种；以及用于检测扩增产物的装置；所述装置包含用于选自下组检测方法中的装置：琼脂糖凝胶电泳法。5.b1)～b3)中至少一种在c1)～c8)中至少一种中的应用：b1)权利要求1所述的引物组；b2)权利要求2～3任一项所述的试剂盒；b3)权利要求4所述的检测系统；c1)非诊断目的地鉴定禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒；c2)非诊断目的地鉴定待测病毒是否为禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒；c3)非诊断目的地鉴别禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒；c4)非诊断目的地检测待测样品中是否含有禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒；c5)制备鉴定禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒的产品；c6)制备鉴定待测病毒是否为禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒的产品；c7)制备鉴别禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病
毒的产品；c8)制备检测待测样品中是否含有禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒的产品。6.d1)～d3)中任一种方法：d1)一种非诊断目的地鉴定待测病毒是否为禽腺病毒、禽流感病毒、新型鹅细小病毒、鸭坦布苏病毒和新型鹅星状病毒的方法，包含采用权利要求1所述的引物组、权利要求2～3任一项所述的试剂盒和/或权利要求4所述的检测系统...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄淑坚，柯骏鸿，梅堃，刘兆洁，姜含雨，刘梦凡，魏无缺，李雨泽，陆泳锟，
申请(专利权)人：广东省华晟生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：