PLEC在上皮性卵巢癌早期诊断及治疗中的应用制造技术

本发明专利技术公开了PLEC在上皮性卵巢癌早期诊断及治疗中的应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术通过大量卵巢组织正常及恶性病理组织样本，发现PLEC在卵巢恶性病理组织中的显著高表达；随后成功构建PLEC

【技术实现步骤摘要】
PLEC在上皮性卵巢癌早期诊断及治疗中的应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及PLEC在上皮性卵巢癌早期诊断及治疗中的应用。

技术介绍

[0002]卵巢肿瘤由几种组织病理学实体组成，其中上皮性卵巢癌占恶性卵巢肿瘤的大多数(约90%)。上皮性卵巢癌是妇科癌症病人死亡的主要原因，也是女性癌症死亡的第五大常见原因。来自美国和英国登记的研究估计，六分之一的女性在诊断后的90天内死亡，这反映了确诊时间晚和缺少有效治疗方法所导致的潜在高发病率和死亡率。尽管早期卵巢癌是高度可治愈的，但由于缺乏有效的早期筛查方法及具体的警告信号或症状导致诊断延迟从而难以及时在早期发现卵巢癌。因此，探究调控卵巢癌发生发展中关键基因，阐明其调节机制，对有效控制卵巢癌的发生发展，提高患者生存率具有重要意义。
[0003]Plectin（PLEC）是一种500 kDa的巨大多功能细胞骨架蛋白，在稳定和协调细胞的中间丝网络中起着至关重要的作用。同时，不同亚型的PLEC在不同器官中的表达情况多样，也可作为信号支架在细胞生物力学如机械力感知方面发挥作用。
[0004]卵巢由3种主要的细胞组成，即覆盖外表面的上皮细胞、产生卵子的细胞以及结缔组织细胞，每种类型的细胞都可以发展成不同类型的肿瘤：上皮肿瘤开始于覆盖卵巢外表面的细胞；生殖细胞肿瘤开始于产生卵子的细胞；间质瘤开始于结缔组织细胞。卵巢癌主要的治疗难点就在于其常发生体内转移，在远端产生转移灶，如常见的晚期腹膜转移。为了及时掌控肿瘤发生发展的情况，需要选择合适的药物靶标。选择药物作用靶标要考虑两个方面：1. 靶标的有效性，即靶标与疾病确实相关，并且通过调节靶标的生理活性能有效地改善疾病症状。2. 靶标的副作用，如果对靶标的生理活性的调节不可避免地产生严重的副作用，那么将其选作药物作用靶标是不合适的。因此，并不是所有在相关部位具有高表达的基因都可以选为靶标，一种疾病可能会和多个靶标有关，一个靶标也可能与多种疾病关联；即使是选为靶标，其作用可能只是监测，并不一定具有治疗的效果。PLEC具有作为高价值生物标志物及药物靶标的潜力，可能在结肠癌（doi:1007
‑
7847(2017)03
‑
0239
‑
05）或者胃癌（CN 116064556 A）筛选中发挥作用，但目前还未有关于PLEC作为上皮性卵巢癌早期诊断及治疗的靶标分子的报道。

技术实现思路

[0005]针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供PLEC在上皮性卵巢癌早期诊断及治疗中的应用。本专利技术是基于临床治疗上皮性卵巢癌早期诊断治疗难点及PLEC与上皮性卵巢癌之间的密切相关性，通过慢病毒感染构建PLEC
‑
KD的上皮性卵巢癌细胞系，为开发卵巢癌早期诊断治疗新的靶标分子药物、试剂盒提供新的思路。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供PLEC基因作为靶标在制备用于诊断或监测上皮性卵巢癌
进展的试剂盒中的应用，所述PLEC基因为如下i）或ii）所示的核酸分子：i）核苷酸序列是SEQ ID NO.1所示的核酸分子；ii）除i）以外的编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核酸分子。
[0007]进一步的，其中所述诊断或监测是检测上皮性卵巢癌的发作、进展、稳定、改善和/或缓和。
[0008]进一步的，其中所述上皮性卵巢癌包括浆液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌和黏液性癌。
[0009]本专利技术的第二方面，提供PLEC基因或PLEC基因编码的蛋白作为靶标的在制备用于治疗上皮性卵巢癌的药物中的应用，所述PLEC基因为如下i）或ii）所示的核酸分子：i）核苷酸序列是SEQ ID NO.1所示的核酸分子；ii）除i）以外的编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核酸分子；所述PLEC基因编码的蛋白为如下（A1）或（A2）所示的蛋白质：（A1）由序列表中SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（A2）在（A1）中所限定的蛋白质的N端和/或C端连接蛋白标签后得到的融合蛋白。
[0010]本专利技术的第三方面，提供下调PLEC基因表达或抑制PLEC蛋白活性的物质在制备治疗上皮性卵巢癌药物中的应用。
[0011]进一步的，所述下调PLEC基因表达的物质包括：shRNA或siRNA。
[0012]进一步的，所述shRNA的序列为SEQ ID NO.3。
[0013]本专利技术的有益效果：在本专利技术中，我们通过大量卵巢组织正常及恶性病理组织样本，发现PLEC在卵巢恶性病理组织中的显著高表达；随后成功构建PLEC
‑
KD（Knock Down）慢病毒感染上皮性卵巢癌细胞系（SKOV3、A2780），通过puromycin筛选出能够显著抑制其蛋白表达水平并稳定表达的PLEC
‑
KD细胞系，发现与正常细胞系相比，两种PLEC
‑
KD的卵巢癌细胞系的增殖和克隆形成能力都受到显著抑制，为开发卵巢癌早期诊断治疗新的靶标分子药物、试剂盒提供新的思路。
附图说明
[0014]图1为未处理时PLEC表达情况，其中A为PLEC在正常组织不同病理分期中的表达情况（正常、TI、TII、TIII）；B为对正常组织和病理组织中PLEC表达的H
‑
Score进行统计学分析后的柱状图。
[0015]图2为处理后PLEC表达情况，其中A为PLEC
‑
KD shRNA敲减后PLEC及β
‑
actin蛋白表达情况的WB条带代表图，B为以β
‑
actin为内参进行统计学分析后的柱状图，C为PLEC
‑
KD shRNA敲减后，利用qRT
‑
PCR检测，对数据进行统计学分析得到的柱状图。
[0016]图3为细胞增殖效率实验，其中A为对CCK
‑
8细胞增殖实验酶标仪检测数据进行统计学分析后的柱状图，B为细胞克隆形成实验结晶紫染色情况代表图，C为对细胞克隆形成实验结晶紫染色情况使用imageJ进行数据分析后得到的数据统计学分析后的柱状图。
[0017]图4为细胞划痕实验图，其中A为细胞划痕实验的结果代表图；B为对细胞划痕实验的结果情况使用imageJ进行数据分析后得到的数据统计学分析后的柱状图。
具体实施方式
[0018]应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0019]为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
[0020]本专利技术实施例中所用的未进行具体说明试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。卵巢正常及病理组织芯片购买自陕西爱维拉生物科技有限公司（芯片编号：Ova
‑
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PLEC基因作为靶标在制备用于诊断或监测上皮性卵巢癌进展的试剂盒中的应用，其特征在于，所述PLEC基因为如下i）或ii）所示的核酸分子：i）核苷酸序列是SEQ ID NO.1所示的核酸分子；ii）除i）以外的编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核酸分子。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，其中所述诊断或监测是检测上皮性卵巢癌的发作、进展、稳定、改善和/或缓和。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，其中所述上皮性卵巢癌包括浆液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌和黏液性癌。4.PLEC基因或PLEC基因编码的蛋白作为靶标的在制备用于治疗上皮性卵巢癌的药物中的应用，其特征在于，所述PLEC基因为如下i）或ii）所示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩阳阳，白岚宁，张慧，
申请(专利权)人：潍坊医学院，
类型：发明
国别省市：