表达载体组合物制造技术

本发明专利技术涉及表达载体和包含所述载体的药物组合物和试剂盒，特别是它们在治疗帕金森病(PD)、DOPA反应性肌张力障碍、血管性帕金森综合征、与L

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达载体组合物


[0001]本专利技术涉及表达载体和包含所述载体的药物组合物和试剂盒，特别是它们在治疗帕金森病(PD)、DOPA反应性肌张力障碍、血管性帕金森综合征、与L
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DOPA治疗帕金森病相关的副作用、L
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DOPA诱导的运动障碍、Segawa综合征或遗传性多巴胺受体异常的方法中的用途。

技术介绍

[0002]帕金森病是一种与纹状体中产生多巴胺的细胞的损失有关的神经退行性疾病(neurodegenerative disease)。脑细胞生产多巴胺需要三种酶：酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)、GTP环化水解酶1(GTP cyclohydrolase 1，GCH1)和芳香族氨基酸脱羧酶(aromatic amino acid decarboxylase，AADC)。TH和GCH1调节从酪氨酸产生L
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DOPA(多巴胺的前体)，AADC将L
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DOPA转化为多巴胺。目前帕金森病的治疗方案包括口服L
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DOPA，L
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DOPA与多巴胺相比，可通过血脑屏障被吸收。这种治疗是有效的，因为AADC仍然存在于帕金森病患者的大脑中
[0003]然而，口服L
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DOPA疗法的一个问题是，它可能导致副作用，如运动异常。这些副作用被认为是由于L
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DOPA的半衰期短，以及与其他氨基酸竞争主动运输而导致穿越肠道粘膜和血脑屏障的吸收不稳定，从而造成血液和大脑中L
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DOPA水平的波动(Lees,2008年4月,The Importance of Steady
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State plasma DOPA levels in reducing motor fluctuations in parkinson
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s disease,Expert Roundtable Supplement,CNS Spectr 13:4(Suppl7)P4
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7)。
[0004]为了将L
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DOPA配制成一种会提供稳定的血液和大脑L
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DOPA水平的缓释口服产品，已进行许多尝试。这些尝试都没有成功。目前，提供稳定的血浆L
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DOPA水平的最有效方法是通过一根管子穿过病人的腹壁，将L
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DOPA的凝胶制剂直接缓慢输注到病人的空肠中。较稳定的血浆L
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DOPA水平使症状控制明显改善，运动障碍减少(Olanow et al Continuous intrajejunal infusion of levodopa
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carbidopa intestinal gel for patients with advanced Parkinson
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s disease：a randomised,controlled,double
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blind,double
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dummy study.The Lancet Neurology Vol 13 2014年2月)。然而，终生需要穿过腹壁的管(伴有包括易位(dislodgement)、扭结、堵塞和感染等在内的不良事件)，携带一个大的泵和每天更新(refresh)凝胶的供应，限制了这种疗法的使用，特别是对于老年PD患者来说，这不是最佳选择。
[0005]因此，许多作者试图通过将基因疗法直接作用于大脑中受影响最大的区域，即纹状体，来恢复帕金森病患者的多巴胺水平。临床前和临床研究显示，各种构建体(constructs)都有一定的效果，但没有任何一种构建体显示出足够的疗效、安全性或以商业上可行的成本制造的能力，以便在任何国家被批准用于医药用途。
[0006]三种分别编码TH、GCH或AADC的单顺反子单链AAV载体的混合物制剂的功效在1
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甲基
‑4‑
苯基
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1,2,3,6
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四氢吡啶(MPTP)损伤的猕猴PD模型中得到证实。编码AADC的AAV载体
的贡献被认为是该制剂成功所必需的。该产品从未进行过临床评估(Muramatsu 10February,2002,Behavioural Recovery in a Primate Model of Parkinson
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s disease by Triple Transduction of Striatal Cells with Adeno
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Associated Viral(AAV)Vectors Expressing dopamine
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Synthesizing Enzymes,Human Gene Therapy,12：345
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354)。生产和混合三种不同的AAV载体的要求以及由此产生的商品成本是决定不进一步开发该制剂的一个因素。
[0007]编码所有三种基因的单个三顺反子慢病毒(single tricistronic Lente)载体在MPTP猕猴PD模型中显示出疗效(Azzouz M,Martin
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Rendon E,Barber RD,et al.Multicistronic Lentiviral Vector
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Mediated Striatal Gene Transfer of Aromatic l
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Amino Acid Decarboxylase,Tyrosine Hydroxylase,and GTP Cyclohydrolase I Induces Sustained Transgene Expression,Dopamine Production,and Functional Improvement in a Rat Model of Parkinson
’
s Disease.J Neurosci.2002；22(23):10302
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10312.)。虽然这被推进到了临床试验阶段，但报告的疗效并不明显。约有三分之一的治疗患者报告说，他们口服L
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DOPA和多巴胺激动剂的L
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DOPA等效日剂量(equivalent daily dose)没有减少。其余的患者对口服L
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DOPA或多巴胺激动剂的需求仅有少量减少。最常见报道的不良反应仍然是运动障碍和开/关波动(Palfi S,Gurru J,Le H,et al.Long
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term follow up of a phase 1/2study of ProSavin,a lentiviral vector gene therapy for Parkinson
’
s disease.Hum Gene T本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，其包含第一表达载体和第二表达载体，其中所述第一表达载体包含可操作地连接至编码酪氨酸羟化酶(TH)的自互补编码序列的启动子，并且所述第二表达载体包含可操作地连接至编码GTP环化水解酶1(GCH1)的编码序列的启动子。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一表达载体和/或所述第二表达载体是裸DNA载体。3.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述第一表达载体和/或所述第二表达载体是AAV载体。4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述第二表达载体是单链AAV(ssAAV)载体。5.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述第二表达载体是自互补的AAV载体。6.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述第一表达载体是自互补的AAV载体，并且所述第二表达载体是ssAAV载体或裸DNA载体。7.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述第一表达载体和/或第二表达载体衍生自AAV
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1、AAV
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2、AAV
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3A、AAV
‑
3B、AAV
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4、AAV
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5、AAV
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6、AAV
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7、AAV
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8、AAV
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9、AAV
‑
10和/或AAV
‑
11。8.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述第一表达载体和/或第二表达载体衍生自AAV1、AAV5或AAV9，并且更优选AAV5。9.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述组合物不包含编码芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)的载体。10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述编码TH的编码序列包含基本上如SEQ ID NO：1或21所示的核苷酸序列，或其片段或变体，或其中所述编码TH的编码序列包含编码基本上如SEQ ID NO：2或22所示的氨基酸序列的核苷酸序列，或其片段或变体。11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述编码TH的编码序列包含编码缺少TH的调节结构域的截短的TH的核苷酸序列，任选地其中所述编码TH的编码序列包含基本上如SEQ ID No：3或23所示的核苷酸序列，或其片段或变体，或其中所述编码TH的编码序列包含编码基本上如SEQ ID No：4或24所示的氨基酸序列的核苷酸序列，或其片段或变体。12.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述编码GCH1的编码序列包含基本上如SEQ ID No：6所示的核苷酸序列，或其片段或变体，或其中所述编码GCH1的编码序列包含编码基本上如SEQ ID No：7所示的氨基酸序列的核苷酸序列，或其片段或变体。13.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在所述第一表达载体和/或第二表达载体中的所述启动子是允许在个体的神经元中，或在所述个体的神经胶质细胞中，或在所述个体的神经元和神经胶质细胞中，或在所述个体的神经元和衬于脑室的室管膜细胞中，或在所述个体的神经元和神经胶质细胞和室管膜细胞中高表达的启动子。14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在所述第一表达载体和/或第二表达载体中的启动子是CBh启动子，或其片段或变体，任选地，其中在第一载体和第二载体中的所述启动子包含所述CBh启动子。15.根据权利要求14所述的组合物，在所述第一表达载体和/或第二表达载体中的所述启动子序列包含基本上如SEQ ID No：8所示的核苷酸序列，或其片段或变体。
16.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中在所述第一表达载体和/或第二表达载体中的所述启动子是人突触蛋白启动子，或具有巨细胞病毒增强子的鸡β肌动蛋白启动子(CB7)，或四环素响应元件(TRE)启动子，并且任选地不是CMV启动子或CMV增强子/启动子。17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述启动子包含基本上如SEQ ID No：9、10、11或25所示的核苷酸序列，或其片段或变体。18.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述第一表达载体和/或所述第二表达载体包含位于其启动子和分别编码TH1或GCH1的核苷酸之间的内含子，任选地，其中(i)所述内含子的长度为至少25、50、75或100个核苷酸；(ii)所述内含子的长度为至少125、150、175或200个核苷酸；或(iii)所述内含子的长度为至少225、250、275或300个核苷酸。19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述内含子选自下列内含子：人生长激素(hGH)内含子；β
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肌动蛋白内含子；小鼠微小病毒(MVM)内含子；SV40内含子和EF
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1α内含子。20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述内含子是所述MVM内含子，优选其中所述内含子包含基本上如SEQ ID NO：27所示的核苷酸序列，或其片段或变体。21.根据权利要求18
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20中任一项所述的组合物，其中：(i)所述第一表达载体和/或第二表达载体包含SYN1启动子，所述启动子之后是内含子，所述内含子是MVM内含子(SEQ ID NO：27)或人生长激素(hGH)内含子(SEQ ID NO：26)；(ii)所述第一表达载体和/或第二表达载体包含具有巨细胞病毒增强子的鸡β肌动蛋白启动子(CB7)，所述鸡β肌动蛋白启动子之后是内含子，所述内含子是所述MVM内含子或所述人生长激素(hGH)内含子；(iii)所述第一表达载体和/或第二表达载体包含四环素响应元件(TRE)启动子，所述四环素响应元件(TRE)启动子之后是内含子，所述内含子是所述MVM内含子或所述人生长激素(hGH)内含子；或(iv)所述第一表达载体和/或第二表达载体包含C...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔，
申请(专利权)人：马阿夫克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：