BSL-II在诊断结直肠癌中的应用制造技术

本发明专利技术涉及肿瘤精准诊断领域，更具体地，本发明专利技术涉及BSL

【技术实现步骤摘要】
al.Establishment of new predictive markers for distant recμrrence of colorectal cancerμsing lectin microarray analysis.[J].Cancer Med,2015,4:293
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302.)使用细胞表面聚糖修饰的凝集素微阵列分析评估了新的结肠直肠癌远处复发预测标志物的临床益处。从福尔马林固定、石蜡包埋的肿瘤标本和53例连续根治性切除的I
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III期结直肠癌病例的正常上皮中提取糖蛋白，然后进行凝集素微阵列分析，以获得凝集素
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聚糖相互作用(LGI)值。此外，确定了与远处复发相关的临床病理因素。与远处复发相关的LGI值通过另外55例根治性切除的II期结直肠癌病例进行了验证。在癌症组织中显著的双孢蘑菇(ABA)凝集素的LGI值在统计学上与远处复发相关。ABA凝集素染色在癌细胞的细胞质和顶面显示出强烈的信号，而在正常上皮的核上区域观察到微弱的染色。

技术实现思路

[0008]本专利技术旨在提供BSL
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II在制备诊断结直肠癌试剂中的应用。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0010]BSL
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II在制备诊断结直肠癌试剂中的应用。
[0011]通过大量试验证实，BSL
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II可以识别肠道黏液主分子MUC2的Core3糖基化修饰变化从而诊断结直肠癌。
[0012]根据本专利技术的实施例，还可以对本专利技术作进一步的优化，以下为优化后形成的技术方案：
[0013]在其中一个优选的实施例中，BSL
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II在制备早期诊断结直肠癌试剂中的应用。
[0014]利用Biotin标记的BSL
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II对不同DSS循环周期的小鼠结肠组织进行免疫组化，发现DSS循环早期BSL
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II识别的Core3水平显著下调，结直肠癌组织中降至最低。说明，BSL
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II能早期就能诊断结直肠癌。
[0015]本专利技术还提供了一种用于结直肠癌诊断的工具，所述工具含有BSL
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II。
[0016]在其中一个优选的实施例中，所述结直肠癌诊断的工具包括但不限于芯片、试剂盒。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0018]本专利技术首次发现并证实BSL
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II与结直肠癌密切相关。该相关性的提出为结直肠癌转移的诊断与治疗提供了新的途径。
附图说明
[0019]图1是O
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糖链生物合成途径；
[0020]图2为BSL
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II识别的Core3修饰水平在结直肠癌种表达下调；
[0021]图3为BSL
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II的受试者工作特征曲线(ROC)；
[0022]图4为凝集素ABA(Agaricμs bisporμs lectin)在结直肠癌组织中染色结果；
[0023]图5为凝集素EEL,PTL
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1,LCA,SNA的凝集素印迹信号在结直肠癌患者与正常人血清中的结果；
[0024]图6为TCGA
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COAD(结直肠癌)项目的RNAseq数据分析结果；
[0025]图7为结直肠癌细胞系中MUC2表达水平；
[0026]图8为肝癌临床手术标本和癌旁组织的阿尔新蓝染色的结果；
[0027]图9为结直肠癌组织及癌旁组织蛋白Western Blot检测MUC2的表达水平；
[0028]图10为在LOVO细胞中过表达B3GNT6后的MUC2蛋白水平；
[0029]图11为过表达B3GNT6细胞系的凝集素ABC法染色结果；
[0030]图12为LOVO与HT29细胞转染pcDNA3.1
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Flag
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B3GNT6载体的免疫沉淀实验和凝集素ABC法染色结果；
[0031]图13为AOM/DSS诱导结直肠癌小鼠的结肠分析结果。
具体实施方式
[0032]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本
[0033]专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0034]1.实验样本
[0035]严格遵守遗传资源管理暂行办法和遗传资源疾病新鲜组织收集整理保存技术规程并以此为基准。收集中南大学湘雅三医院医院2021
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09至2023
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01收治的31例结直肠癌患者的结直肠癌组织及肿瘤边缘大于5厘米的癌旁组织作为正常组织对照。纳入标准：组织学证实为结直肠癌；临床资料完整，并有完整随访数据；组织病理标本检测经患者或家属书面同意。排除标准：组织病理诊断不明确；术前进行新辅助放化疗；随访数据不完整；合并其他恶性肿瘤病史。所有患者均有完整的临床、病理资料。本研究已通过中南大学湘雅三医院医学伦理委员会的审核批准，所有标本的采集均获得患者的知情同意。
[0036]2.实验仪器和试剂
[0037]2.1主要仪器设备
[0038]石蜡切片机、显微镜、电热恒温箱、微波炉、低速离心机、实时定量PCR仪、垂直混合仪、涡旋混合器、电泳仪、转膜仪、多功能图像分析仪。
[0039]2.2主要试剂
[0040][0041][0042]实施例1
[0043]1、石蜡包埋
[0044]将收集的结直肠癌组织及癌旁组织在4％多聚甲醛溶液中室温浸泡固定1天；
[0045]适量双蒸水室温浸泡2小时，去除多聚甲醛；
[0046]梯度脱水透明：于染色缸中依次浸泡70
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75％乙醇1h，80
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85％乙醇1h，95％乙醇45min两次，无水乙醇40min两次，异丁醇+无水乙醇(1:1)45min，异丁醇过夜，正丁醇3h；
[0047]浸蜡包埋：65℃软蜡3h浸泡后，65℃硬蜡浸泡，包埋机包埋；
[0048]包埋后的蜡块可于4℃长期保存。
[0049]2、石蜡切片
[0050]切片前，蜡块应放置于
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20℃至少30min，以增加蜡块硬度，便于切片；
[0051]展片机装满水，预热45℃，烘片机预热37℃；
[0052]结直肠组织切片4μm，一次可切多张，放入展片机，等待展平；
[0053]使用粘附载玻片捞片后，镜下初步筛选，铅笔标记，放于烘片机上烘干。用于常规染色的切片可于常温储存半年，免疫相关染色可储存1月；
[0054]烤箱60℃ 4小时，或37℃过夜。(烤片完成后应尽快使用，可直接进行脱蜡，若需储存可于染色前57℃加热30min再进入脱蜡)；
[0055]脱蜡水化：依次浸泡二甲苯(5min本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.BSL
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II在制备诊断结直肠癌试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述BSL
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II识别肠道黏液主分子MΜC2的Core3糖基化修饰变化从而诊断结直肠癌。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨易安，李征，曹培国，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：