一种VEGFR1检测试剂盒的制备及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种VEGFR1检测试剂盒的制备及应用，具体涉及生物检测领域。所述试剂盒包括抗体包被磁珠工作液、VEGFR1标记抗体、VEGFR1校准品、VEGFR1质控品、样品稀释液。本发明专利技术的试剂盒选择吖啶盐NSP

【技术实现步骤摘要】
一种VEGFR1检测试剂盒的制备及应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，具体涉及一种VEGFR1检测试剂盒的制备及应用。

技术介绍

[0002]VEGFR
‑
1是一种跨膜蛋白，1990年被Shibuya等人发现，VEGFR
‑
1又叫FLT，VEGFR
‑
1由1338个氨基酸构成，分为胞外区，跨膜区以及胞内区。其中胞外结构域包含7个免疫球蛋白样的结构域，跨膜结构域由22个氨基酸组成，胞内结构域由558个氨基酸的组成，其中胞内结构域中包括酪氨酸激酶结构域带有酪氨酸自磷酸位点，当VEGFR
‑
1与其配体结合后，诱导受体二聚体化，使胞内的磷酸化位点自磷酸化，从而导致下游一系列的级联反应。
[0003]sFLT
‑
1(可溶性血管内皮生长因子受体1)是mRNAVEGFR
‑
1的剪接体，只有胞外的6个免疫球蛋样的结构域和尾端31个氨基酸残基，而没有跨膜结构域和胞内结构域，SFLT
‑
1(可溶性血管内皮生长因子受体1)可以在外周血中检测到所以可以应用于血液学研究。
[0004]VEGFR
‑
1作为VEGFA，VEGFB和VEGFR1的细胞表面受体，在胚胎脉管系统的发育，血管生成调节，细胞存活，细胞迁移，巨噬细胞功能和癌细胞侵袭中起着至关重要的作用。VEGFR
‑
1与VEGFA具有非常高的亲和力和相对较低的蛋白激酶活性；可通过限制游离VEGFA的量并阻止其与VEGFR(KDR)结合，可以作为VEGFA信号传导的负调节因子。VEGFR
‑
1能够与其配体体相互作用，激活受体酪氨酸激酶活性，进而引起下游信号转导通路的激活。这些信号通路主要包括丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)途径，磷脂酰肌醇3
‑
激酶(Phosphatidylinositide 3
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kinases，PI3K)途径。所以开发一种可以检测人血液中的VEGFR
‑
1至关重要，这有利于辅助诊断早期的恶性肿瘤生长情况，做到早发现早治疗，提高患者的生存率。所以制备一款可靠的检测人血液中的VEGFR
‑
1的试剂盒刻不容缓。

技术实现思路

[0005]为此，本专利技术提供一种VEGFR1检测试剂盒的制备及应用，以解决现有检测恶性肿瘤检测手段复杂，检测时间长等问题。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]根据本专利技术一方面提供的一种VEGFR1检测试剂盒，所述试剂盒包括抗体包被磁珠工作液、VEGFR1标记抗体、VEGFR1校准品、VEGFR1质控品、样品稀释液。
[0008]进一步的，所述包被磁珠工作液为包被抗体A的磁珠悬液；
[0009]所述VEGFR1标记抗体是通过NSP
‑
SA
‑
NHS溶液对抗体B标记获得；
[0010]抗体A和抗体B分别为VEGFR1
‑
Fab 1和VEGFR1
‑
Fab 2，均由轻链和重链组成；VEGFR1
‑
Fab 1轻链如SEQ ID NO.1，重链如SEQ ID NO.2所示；VEGFR1
‑
Fab 2轻链如SEQ ID NO.3，重链如SEQ ID NO.4所示。
[0011]进一步的，所述磁珠与抗体A的质量比为50:1～150:1；所述抗体包被磁珠工作液中的磁珠为甲苯磺酰活化的磁珠；所述抗体B与NSP
‑
SA
‑
NHS的物质的量1:5～1:20。
[0012]进一步的，所述包被抗体A的磁珠悬液的方法为取磁珠母液，重悬后加入硼酸盐缓
冲液和抗体A振荡混匀；然后加入缓冲液TBS
‑
T稀释即得。
[0013]进一步的，所述VEGFR1标记抗体的制备方法为抗体B用CBS缓冲液稀释后，加入NSP
‑
SA
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NHS溶液，搅拌均匀后经过反应得到标记物，再加入DL
‑
赖氨酸后使用Sephadex G
‑
25脱盐，洗脱缓冲体系为TBS
‑
T缓冲液。
[0014]进一步的，所述VEGFR1校准品和VEGFR1质控品均由样品稀释液配制而成，VEGFR1校准品的浓度范围为1.22
‑
10000pg/mL；VEGFR1质控品的浓度为20pg/ml和2500pg/mL。
[0015]进一步的，所述样品稀释液为pH 6.5
‑
9.0的PBS缓冲液。
[0016]进一步的，所述样品稀释液中还含有BSA和防腐剂。
[0017]根据本专利技术另一方面提供的一种VEGFR1检测试剂盒在制备辅助诊断早期肿瘤产品中的应用。
[0018]本专利技术具有如下优点：
[0019]1.本专利技术的试剂盒选择吖啶盐NSP
‑
SA
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NHS修饰物与人源化抗VEGFR1抗体Fab段偶联，稳定性高，提升了检测系统的灵敏度、检测范围以及保存时间并缩短了反应时间；本试剂盒线性范围达到2.75～90000pg/mL。
[0020]2.本专利技术试剂盒优选的甲苯磺酰活化的磁珠，它可以同时与配体的巯基和氨基反应且无需缩合剂。这类磁珠对蛋白的结合效率更高，不需要对抗体进行交联来提升抗体与磁珠的结合能力。由于基础信号值的提升，无需借助异硫氰酸荧光素+对应抗体或者亲和素+生物素连接物对信号进行放大。基于上述两点，成功简化了生产工艺，提升了生产效率。
[0021]3.本专利技术通过筛选具有临床应用价值的、反应性强的抗体对，并对检测的反应体系如包被浓度等进行了系列优化，建立了对人血液中的VEGFR
‑
1检测的体系，并制备成可商用的检测试剂盒。该检测试剂盒操作过程简单，相比现有的试剂盒具有耗时短、灵敏度高、线性范围宽、精密度好、抗干扰性强等优点，能够精准反映样品中VEGFR
‑
1含量，在辅助诊断早期恶性肿瘤生长等方面具有巨大的临床应用前景。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
[0023]本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本专利技术所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本专利技术所揭示的
技术实现思路
得能涵盖的范围内。
[0024]图1为本专利技术实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种VEGFR1检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括抗体包被磁珠工作液、VEGFR1标记抗体、VEGFR1校准品、VEGFR1质控品、样品稀释液。2.根据权利要求1所述一种VEGFR1检测试剂盒，其特征在于，所述包被磁珠工作液为包被抗体A的磁珠悬液；所述VEGFR1标记抗体是通过NSP
‑
SA
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NHS溶液对抗体B标记获得；抗体A和抗体B分别为VEGFR1
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Fab1和VEGFR1
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Fab2，均由轻链和重链组成；VEGFR1
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Fab1轻链如SEQ ID NO.1，重链如SEQ ID NO.2所示；VEGFR1
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Fab2轻链如SEQ ID NO.3，重链如SEQ ID NO.4所示。3.根据权利要求2所述一种VEGFR1检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠与抗体A的质量比为50:1～150:1；所述抗体包被磁珠工作液中的磁珠为甲苯磺酰活化的磁珠；所述抗体B与NSP
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SA
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NHS的物质的量1:5～1:20。4.根据权利要求2所述一种VEGFR1检测试剂盒，其特征在于，所述包被抗体A的磁珠悬液的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹检平，
申请(专利权)人：北京健平金星医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：