一种基于侧向层析技术的AFP-L3%检测方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种基于侧向层析技术的AFP

【技术实现步骤摘要】
一种基于侧向层析技术的AFP
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L3％检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种基于侧向层析技术的AFP
‑
L3％检测方法。

技术介绍

[0002]甲胎蛋白(AFP)是目前临床应用最广泛的肝癌辅助诊断血清标志物。但是早期肝癌AFP的检出率只有30％～40％，而且在肝脏良性疾病，特别是肝癌高危人群，如慢性肝炎、肝硬化中也有部分患者会出现AFP升高。其较低的特异性，对AFP轻度升高的肝癌和慢性肝病的鉴别诊断造成较大困难。
[0003]AFP是一种单链糖蛋白，根据其与小扁豆凝集素(Lens culinaris agglutinin，LCA)的亲和力从低到高依次分为AFP
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L1、AFP
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L2和AFP
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L3。AFP
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L1主要见于良性肝病，AFP
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L2主要由卵黄囊产生并多见于孕妇，而AFP
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L3主要来源于肝癌细胞，也被称为甲胎蛋白异质体。AFP
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L3对肝癌是高特异性的指标，特异性可达到95％以上，也是诊断肝癌特异性最强的肿瘤标记物。美国食品与药品监督管理局(FDA)已于2005年批准AFP
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L3检测试剂和方法用于临床肝癌预警。
[0004]然而，AFP亚型间的结构差异仅为糖基化基团，目前通常认为抗体无法有效特异性识别区分各亚型，因此无法通过常规的双抗体夹心等免疫检测手段进行AFP
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L3的检测。目前用于AFP
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L3的检测方法有植物凝集素亲和层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、亲和印迹法、免疫电泳法、亲和离心柱法、化学发光法等。日本和光纯药株式会社(Wako)的μTASWako i30检测系统采用荧光电泳的方法，该检测试剂仅需一次进样即可得出AFP
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L3％的结果，但是该方法系统复杂，试剂昂贵，临床使用成本高。北京热景生物的甲胎蛋白异质体AFP
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L3亲和吸附离心管是国内最早获批的适用于AFP
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L3检测的方法。该方法采用琼脂糖凝胶偶联LCA，通过亲和吸附和离心分离的方法分离AFP
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L3，再结合普通总AFP检测试剂进行测定。但是，该方法采用手工操作，步骤繁琐，无法实现自动化，不利于高通量检测。已有公开技术资料公布了一种基于LCA包被的磁珠的甲胎蛋白异质体(AFP
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L3)分离试剂。该方法利用含适量明胶的胶状液体基质，将磁性微球悬浮分散形成一种均相反应体系，结合岩藻糖竞争洗脱实现对AFP
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L3的分离。利用同样原理，另一种现有技术资料公开了一种可实现AFP
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L3的自动化检测的双磁珠系统，通过分离磁珠分离出AFP
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L3，经洗脱后再通过由检测磁珠及其他试剂成分组成的检测系统进行AFP
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L3的测定。但是，由于AFP
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L3分离步骤需要在37℃孵育20min，并进行清洗和洗脱，使得该试剂完成整个检测过程耗时较长。此外，检测系统中每引入一个环节，都不可避免的引入新的误差和不精密度。
[0005]然而在现有AFP
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L3检测技术中，植物凝集素亲和层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、亲和印迹法等方法操作繁琐，耗时，步骤复杂，对操作人员素质要求高，无法实现高通量检测。亲和吸附离心管法同样采用手工操作，步骤繁琐，无法实现自动化，对配套试剂及设备要求多，且需要结合其他AFP检测试剂进行测定。日本和光i30检测系统采用荧光电泳的方法，一次进样即可得出AFP
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L3％的结果，但是该方法系统复杂，试剂昂贵，临
床使用成本高。双磁珠系统由分离磁珠和检测磁珠构成，其中分离磁珠利用LCA和AFP
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L3的亲和力从样本中分离出AFP
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L3，检测系统则采用常规的双抗夹心的方法检测分离磁珠所分离的AFP
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L3。这种方法由于分离步骤的引入，检测所需时间较长，且多一次分离环节，不利于提高整个检测的精密度。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供的一种基于侧向层析技术的AFP
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L3％检测方法，操作简单，一次检测即可获得AFP
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L3在总AFP中所占比例，即AFP
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L3％。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了组合物，包括生物素标记的凝集素、链霉亲和素、抗甲胎蛋白抗体和标记有抗甲胎蛋白抗体片段的标记物。
[0009]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述组合物中，所述标记有抗甲胎蛋白抗体片段中的所述抗体片段包括F(ab
’
)2片段、Fab
’
片段、Fab或Fv片段中的一种或多种。
[0010]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述组合物中，所述标记有抗甲胎蛋白抗体片段中的所述抗体片段还包括通过NaIO4氧化等方法去除Fc片段的糖基化修饰的抗体。
[0011]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述组合物还包括羊抗鸡IgY抗体、标记有IgY抗体的标记物、样本垫、偶合物垫或硝酸纤维素膜中的一种或多种。
[0012]在本专利技术的一些具体实施方案中，上述组合物包括：
[0013]所述凝集素包括小扁豆凝集素、橙黄网胞盘菌凝集素、刀豆凝集素或莲藕凝集素中的一种或多种；和/或
[0014]所述标记物包括胶体金颗粒、磁性微球、彩色微球、荧光微球、时间分辨荧光微球、负载有荧光染料的微球或负载有荧光蛋白的微球中的一种或多种；和/或
[0015]所述抗甲胎蛋白抗体片段包括抗甲胎蛋白抗体F(ab')2；和/或
[0016]制备所述样品垫的材料包括聚酯膜；和/或
[0017]制备所述偶合物垫的材料包括聚酯膜；和/或
[0018]所述微球具有表面功能团，所述表面功能团包括羧基、氨基、醛基或酰氯中的一种或多种。
[0019]本专利技术还提供了上述组合物在如下任意项中的应用：
[0020](1)、制备获取AFP
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L3占总AFP的比例的检测试剂；
[0021](2)、制备获取AFP
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L3占总AFP的比例的检测试剂盒；
[0022](3)、制备获取AFP
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L3占总AFP的比例的装置；
[0023](4)、获取待测样品中AFP
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L3占总AFP的比例；
[0024]所述装置包括侧向层析试剂条。
[0025]本专利技术还提供了试剂，包括上述组合物，以及可接受的辅料或助剂。
[0026]本专利技术还提供了试剂盒，包括上述组合物或上述试剂，以及可接受的辅料或助剂。
[0027]本专利技术还提供了装置，包括：
[0028]具有上述组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.组合物，其特征在于，包括生物素标记的凝集素、链霉亲和素、抗甲胎蛋白抗体和标记有抗甲胎蛋白抗体片段的标记物。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包括羊抗鸡IgY抗体、标记有IgY抗体的标记物、样本垫、偶合物垫或硝酸纤维素膜中的一种或多种。3.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，包括：所述凝集素包括小扁豆凝集素、橙黄网胞盘菌凝集素、刀豆凝集素或莲藕凝集素中的一种或多种；和/或所述标记物包括胶体金颗粒、磁性微球、彩色微球、荧光微球、时间分辨荧光微球、负载有荧光染料的微球或负载有荧光蛋白的微球中的一种或多种；和/或所述抗甲胎蛋白抗体片段包括抗甲胎蛋白抗体F(ab')2；和/或制备所述样品垫的材料包括聚酯膜；和/或制备所述偶合物垫的材料包括聚酯膜；和/或所述微球具有表面功能团，所述表面功能团包括羧基、氨基、醛基或酰氯中的一种或多种。4.如权利要求1至3任一项所述的组合物在如下任意项中的应用：(1)、制备获取AFP
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L3占总AFP的比例的检测试剂；(2)、制备获取AFP
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L3占总AFP的比例的检测试剂盒；(3)、制备获取AFP
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L3占总AFP的比例的装置；(4)、获取待测样品中AFP
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L3占总AFP的比例；所述装置包括侧向层析试剂条。5.试剂，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的组合物，以及可接受的辅料或助剂。6.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的组合物或如权利要求6所述的试剂，以及可接受的辅料或助剂。7.装置，其特征在于，包括：具有如权利要求1至3任一项所述的组合物；所述生物素标记的凝集素包被于所述样品垫或不包被于所述样品垫；所述链霉亲和素固定于所述硝酸纤维素膜；所述抗甲胎蛋白抗体固定于所述硝酸纤维素膜；所述标记有抗甲胎蛋白抗体片段的标记物固定于所述偶合物垫；所述装置包括侧向层析试剂条。8.侧向层析试剂条，其特征在于，包括生物素标记的小扁豆凝集素、链霉亲和素...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈干超，陈明峰，郑筱雯，
申请(专利权)人：深圳市国赛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：