一种单一聚合度的聚乙二醇及同系杂质的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种单一聚合度的聚乙二醇及同系杂质的检测方法，所述液相色谱法采用以带保护性丁基侧链的十八烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，流动相包含水：乙腈的体积比为420～470：30～60的流动相A，水：乙腈的体积比为120～170：320～380的流动相B；所述流动相A和流动相B中还含有甲酸铵和甲酸作为缓冲剂；所述液相色谱法采用电喷雾式检测器。本发明专利技术方法能快速分离并定量测定单一聚合度聚乙二醇样品与其同系物杂质，方法准确性高、特异性强、灵敏度高、重复性好，通过高低浓度计算方法，在线性范围内更准确地检测了产品的纯度，从而更好地解决单一聚合度聚乙二醇的纯度检测问题及杂质控制问题。控制问题。控制问题。

【技术实现步骤摘要】
一种单一聚合度的聚乙二醇及同系杂质的检测方法


[0001]本专利技术属于分析检测
，具体涉及一种单一聚合度的聚乙二醇及同系杂质的检测方法。

技术介绍

[0002]聚乙二醇因为其低毒性，无免疫原性和无抗体性的特点，被广泛的应用在生物医药、化工、材料领域。聚乙二醇可以与特定的药物结合，如当其与小分子活性成分、多肽、蛋白质药物结合时，其能够有效地改善药物的稳定性、水溶性、存在免疫原性、肾清除速率快等问题，有利于药物的快速吸收和迅速起效，降低了药物在细胞外分解造成的毒性，在生物医药行业中具有广泛的应用。
[0003]在实际生产过程中，往往会用到单一聚合度的聚乙二醇，其纯度影响着下游产品的质量，因此，单一聚合度的聚乙二醇的纯度的检测十分重要，传统的聚乙二醇检测方法一般采用高效液相色谱——示差折光检测器进行测定，如GB/T 17830
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1999《聚乙氧基化非离子表面活性剂中聚乙二醇含量的测定高效液相色谱法》，但是采用示差折光检测器时，样品中的水分会对待测物的结构产生干扰。专利文献CN111579660A中公开了一种测定聚乙二醇4000及其散剂平均分子量及分布系数的检测方法，但是其方法只能分开聚合度相差较大的PEG，不能分来聚合度相差较小的聚乙二醇。专利CN105067727B中公开了采用HPLC检测，聚羧酸减水剂大单体中聚乙二醇含量的方法，采用等度洗脱，外标法定量，但是，其仅仅能够分离聚乙二醇的混合物，不能分离单一聚合度的聚乙二醇。专利文献CN111855878A公开了一种克服质量歧视效应的聚乙二醇测定方法，可以根据待测样品中游离聚乙二醇分子量范围选取对照品，通过标准曲线法或外标法定量。但是，同样没有解决单一聚合度的聚乙二醇难以通过液相色谱分离的问题。专利CN101493446B公开了一种检测样品或制品中游离聚乙二醇含量的方法，采用紫外检测器联合蒸发光检测器，或者二极管阵列检测器联合蒸发光检测器，对比两者信号差异，甄别出游离聚乙二醇信号峰，然而，其方法适用于聚乙二醇修饰样品或聚乙二醇修饰制品中游离聚乙二醇含量的检测，不能适用于具有重复的氧乙烷基(
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CH2
‑
CH2
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O
‑
)结构单元组成的聚乙二醇的同系物的分离和检测。综上所述，现有技术没有公开能够精准检测单一聚合度的聚乙二醇，也就是说，现有技术鲜有能够将特定聚合度的聚乙二醇与其结构相近的聚乙二醇同系物分离的方法。
[0004]因此，亟需开发一种检测单一聚合度的聚乙二醇及同系杂质的方法，来控制单一聚合度的聚乙二醇的质量、纯度等。

技术实现思路

[0005]为了解决上述
技术介绍
的问题，本专利技术的具体技术方案如下：
[0006]本专利技术第一方面提供一种单一聚合度的聚乙二醇及同系杂质的检测方法，将待测品溶解，采用液相色谱法进行检测；
[0007]所述液相色谱法采用以带保护性丁基侧链的十八烷基键合硅胶为固定相的色谱
柱；
[0008]所述液相色谱法流动相包含流动相A和流动相B，所述流动相A为水
‑
乙腈溶液，其中水：乙腈的体积比为420～470：30～60；
[0009]所述流动相B为水
‑
乙腈溶液，其中水：乙腈的体积比为120～170：320～380；
[0010]所述流动相A和流动相B中还含有缓冲剂，所述缓冲剂包括甲酸铵和甲酸；
[0011]所述液相色谱法采用电喷雾式检测器。
[0012]进一步的，所述流动相A各组分体积比为水：乙腈：甲酸铵：甲酸＝420～470：30～60：2～3：0.2～0.7，流动相B各组分体积比为水：乙腈：甲酸铵：甲酸＝120～170：320～380：2～3：0.2～0.7；
[0013]所述甲酸铵为甲酸铵溶液，添加的甲酸铵溶液的浓度为0.5～1.5mol/L，包括但不限于0.5mol/L、0.6mol/L、0.7mol/L、0.8mol/L、0.9mol/L、1.0mol/L、1.1mol/L、1.25mol/L、1.3mol/L、1.4mol/L或1.5mol/L、优选为1mol/L。
[0014]在本专利技术的实施例中，所述流动相A各组分体积比为水：乙腈：甲酸铵：甲酸＝447：50：2.5：0.5；
[0015]所述流动相B各组分体积比为水：乙腈：甲酸铵：甲酸＝147：350：2.5：0.5；
[0016]所述甲酸铵为甲酸铵溶液，浓度为1mol/L。
[0017]进一步的，所述单一聚合度的聚乙二醇的聚合度为30～50，包括但不限于30、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49和/或50；
[0018]优选的，所述单一聚合度的聚乙二醇的聚合度为34、35、36、37、38和/或39。
[0019]在本专利技术的具体实施例中，所述单一聚合度的聚乙二醇的聚合度为36。
[0020]进一步的，所述固定相的温度为25～35℃，包括但不限于25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃或35℃；
[0021]所述流动相的流速为0.8～1.5mL/min，包括但不限于0.8mL/min、0.9mL/min、1.0mL/min、1.1mL/min、1.2mL/min、1.3mL/min、1.4mL/min或1.5mL/min。
[0022]在本专利技术的具体实施例中，所述固定相的温度为30℃，所述流动相的流速为1mL/min。
[0023]进一步的，所述液相色谱法采用梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：
[0024]0～10min，流动相A与流动相B体积比为75：25，保持等度洗脱；
[0025]10～20min，流动相A与流动相B体积比按线性渐变为0：100；
[0026]20～25min，流动相A与流动相B体积比按线性渐变为0：100，保持等度洗脱；
[0027]25～25.1min，流动相A与流动相B体积比按线性渐变为75：25；
[0028]25.1～35min，流动相A与流动相B体积比为75：25，进行等度洗脱。
[0029]进一步的，所述液相色谱法的进样量为2～10μL，具体的，可以为2μL、3μL、4μL、5μL、6μL、7μL、8μL、9μL或10μL；
[0030]在本专利技术的具体实施例中，所述进样量为5μL。
[0031]进一步的，所述色谱柱的规格为250
×
4.6mm 5μm，100A。
[0032]进一步的，所述溶解采用甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈和水中的一种或多种；优选的，所述溶解溶剂为水。
[0033]进一步的，采用高低浓度法计算待测品的纯度；
[0034]本专利技术的高低浓度法具体为：杂质％＝杂质峰面积/(1％样品峰面积
×
100+所有杂质峰面积)
×...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单一聚合度的聚乙二醇及同系杂质的检测方法，其特征在于，将待测品溶解，采用液相色谱法进行检测；所述液相色谱法的固定相采用以带保护性丁基侧链的十八烷基键合硅胶的色谱柱；所述液相色谱法的流动相包含流动相A和流动相B，所述流动相A为水
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乙腈溶液，其中水：乙腈的体积比为420～470：30～60；所述流动相B为水
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乙腈溶液，其中水：乙腈的体积比为120～170：320～380；所述流动相A和流动相B中还含有缓冲剂，所述缓冲剂包括甲酸铵和甲酸；所述液相色谱法采用电喷雾式检测器。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A各组分体积比为水：乙腈：甲酸铵：甲酸＝420～470：30～60：2～3：0.2～0.7，流动相B各组分体积比为水：乙腈：甲酸铵：甲酸＝120～170：320～380：2～3：0.2～0.7；所述甲酸铵为甲酸铵溶液，添加的甲酸铵溶液的浓度为0.5～1.5mol/L，优选为1mol/L。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述单一聚合度的聚乙二醇的聚合度为30～50。4.如权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李旭哲，贺娇，何平，赵宣，
申请(专利权)人：天津键凯科技有限公司，
类型：发明
国别省市：