基于RPA技术检测新冠病毒、甲型流感病毒的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于RPA技术的检测新冠病毒、甲型流感病毒的试剂盒，属于分子生物技术领域。本试剂盒的干粉检测试剂包括用于扩增新冠病毒、甲型H1N1流感病毒和甲型H3N2流感病毒的引物及探针，干粉检测试剂预装在微流控芯片中。本发明专利技术的检测方法特异性强，灵敏性高；使用时只需要向微流控芯片中加入核酸样本即可进行检测，能快速区分新型冠状病毒和不同亚型甲型流感病毒。本发明专利技术的微流控芯片芯片外包体、基板和盖板，基板上设有样品池、储液池、分样池、扩增池和切换区以及从各池引出的流道，盖板上设有加样接口和连通微阀的微阀装口，本发明专利技术微流控芯片的微阀能够实现流道切换和启闭，芯片上还可加装核酸提取器以实现核酸提取检测一体化。检测一体化。检测一体化。

【技术实现步骤摘要】
基于RPA技术检测新冠病毒、甲型流感病毒的试剂盒

：
[0001]本专利技术涉及分子生物
，具体涉及一种基于RPA技术检测新冠病毒、甲型流感病毒的试剂盒。

技术介绍
：
[0002]新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2，简称新冠病毒)是β冠状病毒家族的新型毒株，可侵染人体的呼吸道而引起新型冠状病毒感染(COVID
‑
19)，具备变异性强、传染性强，传播范围广等特点，给人们的生活和医疗等方面带来了严重的负面影响。SARS
‑
CoV
‑
2是一种包膜正链单链RNA病毒，其基因组约为30Kb。由于潜伏时间长、传播速度快且存在40％～45％的无症状感染，自2019年12月首次报道，并在全球迅速传播，严重威胁了公共卫生安全。虽然已经研发出灭活病毒疫苗、腺病毒载体疫苗、重组亚单位疫苗等新冠疫苗，但因有限的接种率与SARS
‑
CoV
‑
2的强变异性(如有阿尔法、德尔塔以及奥密克戎等变体)，全球疫情扩散速率仍呈增大趋势。因此，开发一种微型快速高灵敏即时检测方法(POCT)对SARS
‑
CoV
‑
2进行准确筛查显得尤为重要。
[0003]感染人类的甲型流感病毒(Influenza A virus)主要由H1N1和H3N2组成。甲型流感病毒和SARS
‑
CoV
‑
2高度相似，在传播性方面具有相似的特征，最好使用一种能够同时快速检测SARS
‑
COV
‑
2和甲型流感病毒的测试技术，否则很难直接区分它们。核酸扩增技术(NAAT)可以从样品中检测出痕量目标分子，具有灵敏特异等诸多优势。基于逆转录聚合酶链反应(RT
‑
PCR)的检测SARS
‑
CoV
‑
2和甲型流感病毒的方法，虽大大提高了检测的灵敏度和特异性，但这种方法对实验室、仪器、人员及环境要求都比较高，一线检测推广有难度。
[0004]近年来等温(即单温)扩增技术的快速发展促进了NAAT技术在POCT中的应用，它消除了高温变性、热循环等步骤，大大降低对大型高精密仪器的依赖程度，是实现POCT有效的技术手段。例如，重组聚合酶核酸扩增技术(RPA)是一种高度特异和灵敏的等温扩增技术，它对样本要求低，可在25℃
‑
45℃下15分钟内将痕量核酸模板扩增到可检测水平。RPA采用的酶活性最适温度在37℃
‑
42℃之间，无需变性，在常温下即可进行，由于不需要温控设备，RPA正在成为一种快速特异的病原体检测工具，可以真正实现便携式的快速核酸检测。
[0005]微流控芯片以微流控技术为基础，具有多种单元技术灵活组合和大规模集成的特点，能够以极少量的样品获得极大的信息量。其中涉及到进样及样品处理有关的膜，用于流体控制的微阀、微泵等。正是这种微操作单元的规模集成能力，使微流控芯片成为系统生物学研究的主要技术平台之一。基于RPA技术快速检测核酸的微流控芯片，为同时快速、灵敏地检测SARS
‑
COV
‑
2和不同亚型的甲型流感病毒提供了一种新的工具。由于新冠病毒感染和流感在秋冬两季频繁发生，对疑似症状的患者进行检查非常重要，同时对疫情的早期发现及控制具有非凡意义，也非常适合社区、门诊等现场检测或如野外等资源受限地区的应用。

技术实现思路
：
[0006]为解决现有技术中存在的缺陷，本专利技术提供了一种基于RPA技术的检测新冠病毒、
甲型流感病毒的试剂盒，能够对新型冠状病毒和甲型流感病毒进行快速准确检测，而且对实验条件要求低，适合现场及资源条件受限地区应用，同时具备检测的特异性、灵敏性和时效性。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：
[0008]一种基于RPA技术的检测新冠病毒、甲型流感病毒的试剂盒，包括干粉检测试剂；干粉检测试剂中包括用于扩增新冠病毒、甲型H1N1流感病毒和甲型H3N2流感病毒的引物及探针，其中引物序列为：新冠病毒，SEQ ID NO.1～2；甲型H1N1流感病毒，SEQ ID NO.4～5；甲型H3N2流感病毒，SEQ ID NO.7～8；探针序列为：新冠病毒，SEQ ID NO.3；甲型H1N1流感病毒，SEQ ID NO.6；甲型H3N2流感病毒，SEQ ID NO.9。
[0009]进一步的，所述试剂盒还包括微流控芯片，所述微流控芯片包括芯片外包体、基板和盖板，基板和盖板贴合在一起组成芯片本体，芯片外包体上设置安装芯片本体的芯片槽；
[0010]基板上设有样品池、储液池、分样池、扩增池和切换区以及从各池引出的流道，其中分样池出口处引出的分样流道与对应的扩增池相连通，每个扩增池对应一个分样池出口和一条分样流道；样品池引出的样品流道、储液池引出的储液流道、分样池入口处引出的入样流道分别与切换区内对应的引流孔连通，其中第一引流孔与样品流道连通，第二引流孔与入样流道连通，中心引流孔与储液流道连通，检测新冠病毒、甲型H1N1流感病毒和甲型H3N2流感病毒干粉检测试剂预装在微流控芯片的扩增池中；切换室内连接微阀，微阀上设置导流通道，导流通道的一端与中心引流孔常通，转动微阀能使导流通道的另一端与第一引流孔或第二引流孔连通；盖板上设有连通样品池的加样接口和连通微阀的微阀装口。
[0011]进一步的，所述微阀包括转动台和保持套，转动台为阶梯轴状，保持套的内部形状与转动台外部形状适配，保持套固定在所述芯片本体上，转动台转动装设在保持套和芯片本体之间。
[0012]进一步的，所述导流通道在转动台底部并沿转动台的径向进行设置，转动台上设置嵌合槽，嵌合槽内可分离式连接有拨动器，拨动器使转动台相对保持套转动。
[0013]进一步的，所述拨动器包括从上至下而设的旋拨头、拨颈和嵌合榫，所述转动台的上还设有沉颈圈和定位孔，沉颈圈与所述转动台同心，拨颈的端部经沉颈圈限位，嵌合榫与嵌合槽配合，拨颈下端还设有与定位孔插接的定位柱。
[0014]进一步的，所述旋拨头的径向尺寸大于拨颈的径向尺寸，所述嵌合槽的中心为复合六边形凹槽，复合六边形凹槽的每个角上沿离心方向设有嵌合部。
[0015]进一步的，转动台和保持套之间设置垫片，垫片上设有与转动台连接的随动孔，转动台下端对应随动孔设有连接柱。
[0016]进一步的，所述芯片外包体的两侧分别扣装拼接板，其中一侧的拼接板上设置负压接口和防溢室，负压接口与防溢室连通，所述储液池出口引出的防溢流道与防溢室连通。
[0017]进一步的，所述芯片本体上还设置核酸提取器，核酸提取器包括第一壳体、第二壳体和提取膜，第一壳体上端设置加液部，第二壳体的下端设置排液部和提取部，第二壳体内设有承托件，提取膜放置在承托件上，第一壳体压合在第二壳体上，提取膜将第一壳体和第二壳体之间的反应空间分为过滤腔和排液腔，在所述盖板上加样接口旁侧增设排液第一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于RPA技术检测新冠病毒、甲型流感病毒的试剂盒，其特征在于：包括干粉检测试剂；干粉检测试剂中包括用于扩增新冠病毒、甲型H1N1流感病毒和甲型H3N2流感病毒的引物及探针，其中引物序列为：新冠病毒，SEQ ID NO.1～2；甲型H1N1流感病毒，SEQ ID NO.4～5；甲型H3N2流感病毒，SEQ ID NO.7～8；探针序列为：新冠病毒，SEQ ID NO.3；甲型H1N1流感病毒，SEQ ID NO.6；甲型H3N2流感病毒，SEQ ID NO.9。2.根据权利要求1所述的基于RPA技术检测新冠病毒、甲型流感病毒的试剂盒，其特征在于：还包括微流控芯片，所述微流控芯片包括芯片外包体、基板和盖板，基板和盖板贴合在一起组成芯片本体，芯片外包体上设置安装芯片本体的芯片槽；基板上设有样品池、储液池、分样池、扩增池和切换区以及从各池引出的流道，其中分样池出口处引出的分样流道与对应的扩增池相连通，每个扩增池对应一个分样池出口和一条分样流道；样品池引出的样品流道、储液池引出的储液流道、分样池入口处引出的入样流道分别与盖板的切换区内对应的引流孔连通，其中第一引流孔与样品流道连通，第二引流孔与入样流道连通，中心引流孔与储液流道连通，检测新冠病毒、甲型H1N1流感病毒和甲型H3N2流感病毒干粉检测试剂预装在微流控芯片的扩增池中；切换室内连接微阀，微阀上设置导流通道，导流通道的一端与中心引流孔常通，转动微阀能使导流通道的另一端与第一引流孔或第二引流孔连通；盖板上设有连通样品池的加样接口和连通微阀的微阀装口。3.根据权利要求2所述的基于RPA技术检测新冠病毒、甲型流感病毒的试剂盒，其特征在于：所述微阀包括转动台和保持套，转动台为阶梯轴状，保持套的内部形状与转动台外部形状适配，保持套固定在所述芯片本体上，转动台转动装设在保持套和芯片本体之间；转动台和保持套之间还设置垫片，垫片上设有与转动台连接的随动孔，转动台下端对应随动孔设有连接柱；所述导流通道在转动台底部并沿转动台的径向进行设置，转动台上设置嵌合槽，嵌合槽内可分离式连接有拨动器，拨动器使转动台相对保持套转动。4.根据权利要求3所述的基于RPA技术检测新冠病毒、甲型流感病毒的试剂盒，其特征在于：所述拨动器包括从上至下而设的旋拨头、拨颈和嵌合榫，所述转动台上还设有沉颈圈和定位孔，沉颈圈与转动台同心，拨颈的端部经沉颈圈限位，嵌...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈蕾，于观留，李华，孙文博，梁洪坤，庞雪辉，孙扬，杨桂文，
申请(专利权)人：山东师大瑞柏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：