一种基于RPA检测猴痘病毒的引物组合和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种基于RPA检测猴痘病毒的引物组合和试剂盒，属于人兽共患病分子生物学检测技术领域。为了利用RPA技术开发出一种快速、灵敏度高、特异性强的检测猴痘病毒的实时荧光检测试剂盒和试纸条试剂盒。本发明专利技术提供了用于检测猴痘病毒的引物组合物核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，以及与引物配合使用的探针如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示；利用实时荧光检测试剂盒或试纸条试剂盒可以在等温条件下，快速的检测样本中是否含有猴痘病毒，检测灵敏度可达100copies/μl。本发明专利技术具有操作简便、快速、高效和特异的优点，对输入性猴痘的筛查具有重要意义。猴痘的筛查具有重要意义。猴痘的筛查具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种基于RPA检测猴痘病毒的引物组合和试剂盒


[0001]本专利技术属于人兽共患病分子生物学检测
，具体涉及一种基于RPA检测猴痘病毒的引物组合和试剂盒。

技术介绍

[0002]猴痘(Monkeypox)，是由猴痘病毒引发的感染。病毒最早是从猴子身上发现的，属于人畜共患病毒。猴痘会在人类中引起类似于天花的疾病，其死亡率约为3％至6％。人类感染猴痘主要发生在非洲，近年来这些国家病例程增长态势，平均每年报道几千例。
[0003]目前猴痘的诊断方法主要有病毒分离培养、电镜镜检查法和分子诊断。猴痘病毒的分离培养和电镜观察，需要时间较长且存在生物安全隐患。目前，开展猴痘分子诊断的方法主要有PCR和荧光定量PCR等检测方法。PCR和荧光定量检测技术操作复杂、需要专业的技术人员并且需要至少1～2h才能出检测结果。因此，需要开发一种操作更简便并且可以在更短的时间内实现对猴痘病毒检测的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了利用RPA技术开发出一种快速、灵敏度高、特异性强的检测猴痘病毒的实时荧光检测试剂盒和试纸条检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测猴痘病毒的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物正向引物为SEQ IDNo.3所示核苷酸序列，反向引物为SEQ ID No.4所示核苷酸序列。2.一种基于RPA的检测猴痘病毒的实时荧光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组合物和荧光探针。3.根据权利要求2所述的实时荧光检测试剂盒，其特征在于，所述荧光探针序列是5
’
GAGACGGTAACTCTAGTGGGCGACTGTC[FAM
‑
dT]A[THF]C[BHQ1
‑
dT]AGCGTCGACATCT 3
’
C3 Spacer。4.根据权利要求3所述的实时荧光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：反应体系缓冲液、RPA干粉、醋酸镁、阳性对照和阴性对照；所述的RPA干粉试剂的成分如下：1mmol/L dNTP、90ng/μL SSB蛋白、120ng/μL rec A重组酶蛋白或30ng/μL Rad51、30ng/μL Bsu DNA聚合酶、100mmol/L Tricine、20％PEG、5mmol/L二硫苏糖醇、100ng/μL肌酸激酶、nfo核酸外切酶，所述反应体系缓冲液为20％PEG，醋酸镁为280mM MgAc，所述阴性对照是ddH2O，阳性对照是含猴痘病毒J2R基因的质粒。5.一种基于RPA的检测猴痘病毒的试纸条检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括上游引物如SEQ ID No.3所示核苷酸序列，下游引物如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列且其5
’
端标记生物素，还包括如SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵宗正，金宁一，李霄，郭振东，刘丽娜，刘军，周博，孙洋，尚超，朱羿龙，
申请(专利权)人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所，
类型：发明
国别省市：